结直肠癌原发灶及淋巴结转移灶中CD44v6、E-cadherin蛋白表达变化及意义

陈梅香，刘坤平，罗 枫

(暨南大学医学院附属清远医院，广东清远511518)

肿瘤转移是影响结直肠癌患者预后的主要原 因［1］。肿瘤侵袭转移是复杂的多步骤、多阶段、多通路参与的过程。CD44是一种分布于细胞表面的黏附分子，其拼接变异体CD44v6主要介导异质细胞间的黏附，促进癌细胞侵袭和转移［2］;E-钙黏附蛋白(E-cadherin)在同质细胞之间的黏附中起主要作用，能维持上皮细胞正常形态和结构并阻止肿瘤细胞脱离原发灶［3］。2009年1月～2012年1月，我们观察了CD44v6和E-cadherin蛋白在结直肠癌原发灶与转移灶组织中的表达情况，探讨二者与结直肠癌发生、发展的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 结直肠癌标本118例(结直肠癌组)、结直肠腺瘤标本61例(结直肠腺瘤组)、结直肠癌原发灶及淋巴结转移灶组织标本41例，均取自2005年12月～2008年4月于我院接受手术的结直肠癌患者及结直肠腺瘤患者。结直肠癌患者男66例，女52例;年龄31～85岁，中位年龄为61.7岁;术前均未经放、化疗。所有组织标本均经甲醛固定后常规石蜡包埋。主要试剂:鼠抗人CD44v6购自北京中杉金桥公司;鼠抗人E-cadherin购自北京中杉金桥公司。

1.2 CD44v6、E-cadherin蛋白检测 取各组标本中直径为1 mm的组织，采用Beecher公司(美国)的组织芯片打孔仪将其制成阵列蜡块，连续切4 μm厚切片，常规HE染色，采用免疫组化SP法检测组织中的CD44v6、E-cadherin蛋白，用已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照，操作步骤按试剂盒说明书进行。结果判定标准:CD44v6定位于细胞膜和(或)细胞质，呈棕黄色为阳性，根据阳性细胞百分比与染色强度综合判定结果。阳性细胞百分比≤5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，＞75%计4分;染色呈淡黄色计1分，为黄色计2分，褐色计3分。两项得分相乘，≤3分为阴性，＞3分则为阳性。E-cadherin定位于细胞膜，呈棕黄色为阳性，阳性细胞百分比≥70%为阳性，＜70%为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件，率的比较用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CD44v6、E-cadherin蛋白表达 结直肠癌组及结直肠腺瘤组CD44v6阳性表达率分别为63.6%(75/118)、42.6%(26/61)，E-cadherin 的阳性表达率分别为57.6%(68/118)、73.8%(45/61)，P 均 ＜0.05。

2.2 CD44v6、E-cadherin蛋白表达与结直肠癌临床病理参数的关系 CD44v6在C+D期(Dukes分期)肿瘤组织中阳性表达率高于 A+B期，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P均＜0.05);E-cadherin蛋白在Dukes C+D期者肿瘤组织中的阳性表达率低于Dukes A+B期者，有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者，P均＜0.05。见表1。

表1 CD44v6、E-cadherin蛋白表达与结直肠癌临床病理参数的关系

2.3 CD44v6、E-cadherin蛋白在结直肠癌原发灶与淋巴结转移灶组织中的表达情况 41例发生转移的结直肠癌病例中，原发灶与淋巴结转移灶CD44v6阳性表达率分别为 78.0%(32/41)、80.5%(33/41)，差异无统计学意义;E-cadherin蛋白阳性表达率分别为 41.5%(17/41)、19.5%(8/41)，P ＜0.05。

3 讨论

CD44存在两种类型，即 CD44s(标准型)以及CD44v(变异型)，前者主要在生理状态下表达，后者主要在病理状态下表达。多项临床研究已证实，CD44的变异体(CD44v)，尤其是 CD44v4～v7和CD44v6～v9均参与肿瘤的发病和进展，CD44v6的高表达被认为与恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关，且在结直肠癌中呈现特异性表达［4～7］。CD44v6参与肿瘤迁移侵袭过程的相关机制可能为:CD44v6是一种透明质酸、骨桥蛋白受体，能与细胞外间质、基底膜的透明质酸和骨桥蛋白结合，从而调节细胞的形态、运动，利于浸润转移［8，9］;同时表达 CD44v6 的细胞可以模拟淋巴归巢使肿瘤细胞逃避免疫防御;CD44v6还可激活细胞体内一些信号通路，使细胞分泌蛋白水解酶，加速细胞外基质的降解［10］。还有研究表明CD44v6低表达的大肠癌患者生存率高于CD44v6 高表达者［11，12］，提示 CD44v6 是一个预后不良的指标。本研究发现CD44v6蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率高于结直肠腺瘤，且Dukes C+D期者高于Dukes A+B期者，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者，提示CD44v6蛋白的表达预示着肿瘤细胞存在侵袭和转移的可能性。此外，我们对淋巴结转移灶中CD44v6蛋白进行检测，未见CD44v6蛋白表达有明显变化，与文献［13］报道一致。

E-cadherin是钙离子依赖的细胞黏附分子中的一员，E-cadherin蛋白正常表达于细胞膜，异常表达为细胞膜表达缺失或出现胞质表达，导致肿瘤细胞与周围正常细胞之间的黏附下降，促进肿瘤细胞侵袭和转移［14，15］。有研究显示E-cadherin蛋白在胃癌组织中的表达与肿瘤转移呈负相关［16，17］。本研究发现，E-cadherin蛋白在结直肠腺瘤中的阳性表达率高于结直肠癌，提示E-cadherin蛋白在结直肠恶性肿瘤中呈低表达;同时E-cadherin蛋白在Dukes C+D期患者肿瘤组织中的阳性表达率低于Dukes A+B期，在有淋巴结转移者中表达率低于无淋巴结转移者，提示E-cadherin蛋白表达减少，同质细胞间黏附力降低，肿瘤细胞易于转移。本研究结果还显示，E-cadherin蛋白在结直肠癌原发灶中的表达率高于淋巴结转移灶，说明E-cadherin蛋白在结直肠癌转移过程中可能发生了异质性变化，其表达减少预示肿瘤细胞拥有更强的转移能力。

综上所述，结直肠癌组织中CD44v6呈高表达，E-cadherin蛋白呈低表达，二者可能与结直肠癌的侵袭及转移有关，检测两项指标可为临床预测结直肠癌的侵袭及转移提供一定依据。

［1］Chua TC，Liauw W，Chu F，et al.Viewing metastatic colorectal cancer as a curable chronic disease［J］.Am J Clin Oncol，2012，35(1):77-80.

［2］Yoshida R，Kimura N，Harada Y，et al.The loss of E-cadherin alpha and beta-catenin expression is associated with metastasis and poor prognosis in invasive breast cancer［J］.Int J Oncol，2001，18(3):513-520.

［3］Reinhold WC，Reimers MA，Lorenzi P，et al.Multifactorial regulation of E-cadherin expression:an integrative study［J］.Mol Cancer Ther，2010，9(1):1-16.

［4］Chen JQ，Zhan WH，He YL，et al.Expression of heparanase gene，CD44v6，MMP-7 and nm23 protein and their relationship with the invasion and metastasis of gastric carcinomas［J］.World J Gastroenterol，2004，10(6):776-782.

［5］Bendardaf R，Algars A，Elzagheid A，et al.Comparison of CD44expression in primary tumours and metastases of colorectal cancer［J］.Oncol Rep，2006，16(4):741-746.

［6］Yamaguchi A，Goi T，Yu J，et al.Expression of CD44v6 in advanced gastric cancer and its relationship to hematogenous metastasis and long-term prognosis［J］.J Surg Oncol，2002，79(4):230-235.

［7］Misra S，Heldin P，Hascall VC，et al.Hyaluronan-CD44interactions as potential targets for cancer therapy［J］.FEBS J，2011，278(9):1429-1443.

［8］陈雅卿，郑爱文，张谷.CD44v6在宫颈癌中的表达及其意义［J］.中国肿瘤，2002，11(8):485-486.

［9］朱光君，张宏，熊正文.光波/微波组合修复CD44v6抗原及其在78例非小细胞肺癌中的表达［J］.实用医学杂志，2006，22(18):2131-2133.

［10］费建东，张林西，戴杰，HSP90α与CD44v6在胃癌及其淋巴结转移癌中的表达［J］.中华新医学，2004，5(20):1827-1829.

［11］Dommann SN.Adhesion molecules in dermato-oncology［J］.Hautarzt，1996，47(3):169-171.

［12］ Zavrides HN，Zizi-Sermpetzoglou A，Panousopoulos D，et al.Prognostic evaluation of CD44expression in correlation with bcl-2 and p53 in colorectal cancer ［J］.Folia Histochem Cytobiol，2005，43(1):31-36.

［13］赵亮，张玉宝，张殿忠.乳腺癌原发灶与转移灶CD44v6表达的对比研究［J］.中国肿瘤临床，2005，31(7):410-411.

［14］Aoki R，Yasuda M，Torisu R，et al.Relationship between lymph node metastasis and E-cadherin expression in submucosal invasive gastric carcinomas with gastric-phenotype ［J］.J Med Invest，2007，54(1-2):159-167.

［15］Balaram P，Alex S，Panikkar B，et al.Adhesion-related proteins E-cadherin，P-cadherin，CD44，and CD44v6，and antimetastatic protein nm23H1 in complete hydatidiform moles in relation to invasion potential［J］.Int J Gynecol Cancer，2004，14(3):532-539.

［16］Aoki R，Yasuda M，Torisu R，et al.Relationship between lymph node metastasis and E-cadherin expression in submucosal invasive gastric carcinomas with gastric-phenotype ［J］.J Med Invest，2007，54(1-2):159-167.

［17］Czyzewska J，Guzinska-Ustymowicz K，Ustymowicz M，et al.The expression of E-cadherin-catenin complex in patients with advanced gastric cancer:role in formation of metastasis［J］.Folia Histochem Cytobiol，2010，48(1):37-45.