宫腔粘连子宫内膜组织中TGF-β1、MMP-9及NF-κB的表达变化及意义

郭君丽，高 立

(宝鸡市妇幼保健院，陕西宝鸡721000)

宫腔粘连(IUA)指宫腔、宫颈管因宫腔手术操作或因继发感染造成腔壁相互粘连，引起少经、闭经、流产、周期性腹痛和不孕等［1～4］。治疗 IUA 的方法有多种，但治疗后复发率极高，重度IUA患者尤为显著。预防IUA形成及宫腔镜宫腔粘连电切术(TCRA)后再形成显得尤其重要。2012年7月～2013年7月，我们观察了宫腔粘连子宫内膜组织中转化生长因子 β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及核转录因子-κB(NF-κB)的表达变化，探讨IUA的形成机制，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2012年7月～2013年7月因IUA在我院行TCRA的患者60例(观察组)，年龄19～35(28.35±4.15)岁;其中闭经 12例，月经减少 31例，继发不孕17例。均符合IUA的诊断标准［3］，轻中度粘连30例、重度粘连30例。同期其他原因就诊的非 IUA患者30例(对照组)，年龄23～35(27.52±4.10)岁;其中子宫纵隔6 例，功能失调性子宫出血6例，黏膜下子宫肌瘤7例，子宫内膜息肉11例。术前3个月内均未使用激素类药物或使用宫内节育器，均无妇科内分泌疾病。两组病例手术时间均选择于卵泡期。两组一般资料有可比性。

1.2 手术方法 术前晚10点宫颈放置海藻扩张棒以软化宫颈，如宫颈坚韧、粘连及萎缩致宫颈扩张棒难以插入，于手术当日晨6点口服米索前列醇400 μg扩张宫颈。采用硬膜外麻醉，B超监护下手术。行TCRA时用针状电极划开宫颈及宫腔粘连带，术毕宫腔基本恢复正常形态。术后常规放置IUD 3个月，抗生素预防感染3～5 d，并行人工周期治疗3个月，月经来潮后复查宫腔镜。

1.3 子宫内膜组织 TGF-β1、NF-κB、MMP-9 表达测定 观察组于术中取适量粘连组织表面的子宫内膜，对照组切取适量子宫黏膜组织，生理盐水冲洗干净后甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，采用免疫组化 SP 法检测 TGF-β1、NF-κB 及 MMP-9。显微镜(400×)下观察切片，每个切片选择5个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，根据染色强度及阳性细胞百分比判定结果。染色强度:基本无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;阳性细胞百分比:≤5%为0分，6～25%为1分，26～50%为2分，＞50%为3分。两项评分乘积≤1分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～6分为中度阳性(++)，＞6分为强阳性(+++)，+～+++为表达阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS11.5软件，计数资料采用 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

观察组子宫内膜组织中TGF-β1和NF-κB表达高于对照组，其中重度粘连者高于轻中度粘连者(P均＜0.05);观察组子宫内膜组织中MMP-9的表达低于对照组，其中重度粘连者低于轻中度粘连者(P均 ＜0.05)。见表 1。

3 讨论

IUA是子宫内膜基底层受损后纤维蛋白原渗出、结缔组织异常增生造成的［7］。刘秀玲等［8］研究认为，子宫内膜受损后，增生的结缔组织是由于细胞外基质(ECM)的生成与降解平衡被打破，导致ECM在创伤组织上积聚所致。

表1 两组子宫内膜组织中TGF-β1、MMP-9及NF-κB表达比较［例(%)］

TGF-β1是最有潜能的纤维原性细胞因子，在纤维化病变中发挥重要作用［9］。许多研究表明［10］，阻断TGF-β1的活性可减轻肝、肾、肺等组织纤维化程度。文献报道［11］，在病理条件下，TGF-β1通过与成纤维细胞膜上的特异性受体结合，刺激ECM合成，诱导合成基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)和纤溶酶原活化因子(PAI-1)，抑制MMP的表达，使ECM合成和降解紊乱，导致ECM沉积。

MMP-9是一组能降解ECM成分的主要水解酶。在生理条件下，MMP-9以酶原的形式从胞内分泌到胞外，经过一系列酶解过程被激活［12］，但在酶解过程中，其活性受非特异性和特异性抑制剂的抑制。TGF-β1为MMP-9重要的非特异性抑制剂，通过改变空间构象，阻断底物与其活性中心结合，抑制MMP-9活性，从而促进ECM合成。

NF-κB是一种具有多向调节功能的转录因子，TGF-β1和 MMP-9均为 NF-κB的靶基因。由于TGF-β1活化因子组织转谷氨酰氨酶基因的启动子中含有 NF-κB的结合位点，因而 NF-κB可促进TGF-β1的表达。张金子等［13］报道，胃癌组织中TGF-β1和 NF-κB 的表达呈正相关关系，提示 NF-κB可能在介导TGF-β1表达或活化中起一定作用。已有研究证实，NF-κB能与MMP-9的启动子结合，增强其启动子的活性，上调MMP-9表达［14］，从而加速ECM降解，减少粘连发生。

本研究结果显示，IUA患者粘连子宫内膜组织中 TGF-β1、NF-κB 呈高表达，且重度粘连者高于轻中度粘连患者，提示 TGF-β1、NF-κB 的过度表达与IUA关系密切，可能使受损后的子宫内膜在修复过程中ECM异常增多、沉积，成纤维细胞过度增生。我们还发现，观察组粘连子宫内膜组织中MMP-9表达低于对照组，且重度粘连者低于轻中度粘连者。推测 在 TGF-β1、NF-κB 均高 表 达时，TGF-β1对MMP-9生成的抑制作用大于NF-κB对MMP-9生成的促进作用。可能是由于TGF-β1过度表达占据大量NF-κB结合位点，剩余小部分 NF-κB与 MMP-9启动子结合，上调MMP-9，相互间作用效果悬殊，打破了ECM合成与降解平衡，使ECM大量沉积，抑制正常内膜生长，导致粘连形成。

本研究表明，IUA子宫内膜组织中TGF-β1、NF-κB高表达，MMP-9低表达，三者可能参与了IUA的形成。未来有望研制出TGF-β1活性抑制剂，阻断其与NF-κB和MMP-9之间的相关环节，增强NF-κB对MMP-9表达的上调作用，从而预防IUA形成及术后再发。

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