内蒙古地区牛羊口蹄疫灭活疫苗的免疫效果比较研究

高日明，马立峰，李 敏，范秀丽，孙树民 ，赵心力*

(1.金宇保灵生物药品有限公司，呼和浩特010030;2.内蒙古自治区动物疫病预防控制中心，呼和浩特010020;3.内蒙古民族大学动物科学技术学院，内蒙古通辽028042)

口蹄疫(foot and mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒属、细小RNA病毒科的口蹄疫病毒引起的偶蹄动物高度接触性传染病，被列为A类传染病的首位［1－2］，严重危害养殖业，造成巨大的经济损失。世界卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将它列为一类动物传染病。至今，对该病尚无有效的治疗药物，疫苗免疫是有效地预防该病的手段之一。为有效控制口蹄疫，我国将其列为强制免疫病种。市售牛羊口蹄疫疫苗都是全病毒灭活疫苗，有6个生产厂家提供疫苗，2012年内蒙古自治区使用了4个厂家的牛羊口蹄疫O－AsiaⅠ型双价灭活疫苗和和1个厂家牛羊口蹄疫A型灭活疫苗。为准确掌握牛羊口蹄疫免疫效果，给牛羊口蹄疫防控工作提供依据与参考，2012年对内蒙古自治区的牛羊口蹄疫苗田间免疫效果进行了检测，具体结果如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清来源 2012年全国重大疫病集中强制免疫期间，委托内蒙古自治区县级动物疫控机构，采集8个旗县免疫口蹄疫疫苗后15、30、60 d的4528份牛血清和4784份羊血清。

1.1.2 检测试剂 液相阻断ELISA试剂盒，均购自中国兰州兽医研究所，O型LPB－ELISA试剂盒:批号 2012040501、2012070901、2012102901;Asia 型LPB －ELISA 试 剂 盒:批 号 2012031602、2012070901、2012101602。

1.1.3 疫苗 牛羊口蹄疫双价灭活疫苗(O型和AsiaⅠ)分别来自A公司生产(批号1006044J，简称A);金宇保灵生物药品有限公司生产(批号0216030，简称金宇);B公司生产(批号2010014，简称B);C公司生产(批号1006003，简称C)。

1.2 方法 采用液相阻断ELISA检测试剂盒，对不同厂家生产的牛羊口蹄疫双价灭活疫苗(O型和AsiaⅠ)免疫效果、规模化养殖场和散养户饲养牛羊的免疫效果和2012年不同地区牛羊免疫效果进行检测;采用3ABC－ELISA检测试剂盒，对2012年内蒙古部分地区牛羊自然感染抗体进行了检测和比较。检测方法按照液相阻断ELISA和3ABCELISA检测试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 不同厂家口蹄疫O型和AsiaⅠ双价灭活疫苗免疫效果检测 采用四个厂家生产的口蹄疫双价灭活疫苗进行了免疫试验，分四组(每组15头牛)，分别检测免疫前、一免后15 d、一免后30 d、一免后60 d进行采血，检测免疫抗体水平。并对一免后30 d免疫抗体水平不合格的牛进行了加强免疫，结果见表1、表2，其数据均值见图1、图2。

表1 注射四个不同厂家口蹄疫双价灭活苗O型抗体合格率结果

图1 加强免疫组O型口蹄疫抗体消长结果

由表1及其数据均值图1可见，在注射疫苗前被检测动物的抗体合格率在53%左右，一免后15 d都能达到农业部免疫抗体合格率不低于70%的要求，加强免疫后抗体合格率三个厂家能达到100%，相比较C厂家的结果差，免疫合格率为为93.3%。

表2 注射四个不同厂家口蹄疫双价灭活苗Asia型抗体合格率结果

图2 加强免疫组Asia型口蹄疫抗体消长结果

由表2及其数据均值图2可见，在注射疫苗前被检测动物的抗体合格率基本在53%左右，一免后15 d都能达到农业部免疫抗体合格率不低于70%的要求，加强免疫后抗体合格率三个厂家能达到100%，相比较C厂家的结果差些。

2.2 规模化奶牛场与散养奶牛口蹄疫的免疫效果比较 在呼和浩特地区选取5个规模化奶牛场、5个奶牛散养户，每组随机采样20份，结果见表3。

可以看出:(1)规模化奶牛场和散养户口蹄疫免疫抗体合格率分别为88%和74%，达到农业部免疫抗体合格率不低于70%的要求;(2)规模化养殖场的免疫抗体水平略高于散养户的免疫抗体水平。

2.3 不同地区2012年牛羊口蹄疫的免疫检测结果

选取了内蒙古东、中、西部地区的8个旗县血清样品，监测了牛O型口蹄疫免疫抗体检测4528头份，亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体检测4517头份，A型口蹄疫免疫抗体检测4519头份;监测羊O型口蹄疫免疫抗体检测4784头份，亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体检测4670头份，结果见表4、表5。

表3 规模化奶牛场与散养奶牛口蹄疫的免疫效果检测结果

表4 2012年内蒙古部分地区牛口蹄疫免疫抗体监测情况

表5 2012年内蒙古部分地区羊口蹄疫免疫抗体监测情况

可以看出:(1)8个旗县的口蹄疫总体抗体合格率均达到了农业部免疫抗体合格率不低于70%的要求;(2)免疫牛的口蹄疫抗体合格率O型和AsiaⅠ的要高于A型，牛的O型和AsiaⅠ口蹄疫抗体合格率明显高于羊的口蹄疫抗体合格率;(3)不同地区免疫牛羊后口蹄疫抗体合格率参差不齐。

2.4 不同地区2012年口蹄疫感染抗体的测定结果 采用非结构蛋白抗体检测试剂盒(3ABCELISA)共检测2012年不同地区牛血清2538头份、羊2754头份，检测阳性的刮取OP液进行PCR复检，结果见表6。

表6 2012年内蒙古部分地区非结构蛋白抗体的测定结果(试剂盒)

可以看出:(1)采用试剂盒检验的不同地区的非结构蛋白抗体阳性率高低不同，阳性率最低0.00%，阳性率最高3.02%;(2)为进一步确定是否存在假阳性，阳性的样品刮取OP液进行PCR复检，结果为阴性。

3 讨论

3.1 内蒙古自治区的牛羊口蹄疫免疫效果总体良好。从监测结果看无论是规模化养殖场还是散养户，口蹄疫疫苗的三个血清型免疫抗体合格率均超过70%。说明内蒙古自治区大力推行口蹄疫疫苗强制免费免疫，提高了牛羊的免疫力，已经获得了一定的成效。

3.2 从本次监测结果看，不同厂家疫苗的免疫效果有差异，这可能与不同厂家疫苗毒株来源、生产工艺、疫苗抗原含量有关，因此相关部门应加强疫苗质量监管。四个厂家生产的口蹄疫双价灭活疫苗注射后60 d，总体免疫合格率均高于国家标准，这与徐名能等［3］实验结论相一致。

3.3 规模化养殖场免疫效果比散养户免疫效果好，这与吕艳秋［4］实验结果相一致，并且不同地区的免疫效果不同。推测其原因可能有以下几种:一是农村的散养户集中动物和保定动物存在困难，免疫密度低于规模化养殖场，补免不及时，导致抗体水平较低;二是，从本次监测结果看，不同的疫苗生产厂家，疫苗免疫效果参差不齐;三是可能与疫苗接种技术、疫苗使用和保管不当有关。因此，散养户应定期开展口蹄疫免疫抗体水平监测，及时掌握群体的免疫水平，及时进行补免疫苗，以利于口蹄疫的防控。

［1］ Gurumurthy C B ，San Yal A ，Ven Kataramananr，et al.Genetic diversity in the VP1 gene of foot－and－mouth disease virus serotype Asia Ⅰ［J］.Arch Virol，2002，147(1):85 －102.

［2］ Sahle M，Venter E H，Dwarka R M，et al.Molecular epidemiology of serotype O foot－and－mouth disease virus isolated from cattle in Ethiopia between 1979 2001.Onderstepoort［J］.J Vet Res，2004，71:129 －138.

［3］ 徐名能，骆旭铭，邓文煌.牛用口蹄疫AsiaⅠ－O型双价灭活苗与猪用口蹄疫O型灭活苗对猪的免疫效果比较试验［J］.广东畜牧兽医科技，2010，3:34 －36.

［4］ 吕艳秋.牛口蹄疫Asia I－O型双价灭活疫苗免疫抗体跟踪试验［J］.中国兽医杂志，2009，2:41 －42.