银杏叶提取物对鼠眼短暂缺血光学相干断层扫描的影响

吴兴萍 沙翔垠 宋 莉 罗佩娜 郭露萍

全身多种致病因素综合作用如心肺复苏、麻醉意外等短暂缺血造成视神经功能损害正成为人们致残的原因之一〔1〕。目前对其的早期治疗正得到广泛重视。近年来，银杏叶提取物在国内外临床主要用于冠心病、脑梗塞、糖尿病〔2，3〕等，并且获得了很好的效果。随着它的研究不断深入，在眼科疾病方面也有其独特的疗效〔4，5〕。 由于光学相干断层扫描（Optical coherence tomography，OCT）能对评价治疗视网膜疾病的结果提供客观、精确、有效的依据，笔者模拟大鼠短暂缺血后所致眼部视网膜改变，并用OCT检查，观察银杏叶提取物治疗后能否有助于提高视网膜血流灌注，减轻视力损害。

1 材料与方法

1.1 实验动物分组

Wistar雄性大鼠24只（南方医科大学实验动物中心提供），年龄 20～25 周，体重 200～380 g，实验前检查双眼眼前节和眼底均正常。随机分为4组：正常组、短暂缺血组、生理盐水对照组和银杏叶提取物治疗组，每组各6只。每只鼠任取一只眼进行研究，所有实验动物的操作和饲养均符合中华人民共和国《实验动物管理条例》。

1.2 大鼠短暂缺血模型的制备

10%水合氯醛（350 mg/kg成年大鼠）腹腔注射麻醉。颈部正中横切口，分离两侧颈总动脉约1 cm，将缺血装置套上颈总动脉，即将一条硅胶管系于颈总动脉周围并将其穿过聚乙烯纽扣的两个小孔，再穿过一个2cm长的塑料圆筒，打结，避免血管受压和血流受阻，简易缝合切口。将大鼠固定于定位仪上，枕部纵切口，暴露第一颈椎板及横突板上的翼小孔，用双极电凝针电凝双侧翼小孔内的椎动脉，缝合切口后待动物完全苏醒，将其移至笼内饲养，夜间禁食，此时动物行为正常，没有明显的脑损伤。24 h后在大鼠完全清醒的状态下，夹闭双侧颈总动脉10分钟，即将穿过圆筒的硅胶管拉紧，从而将动脉紧紧压向纽扣造成短暂缺血。此时肉眼可见球结膜苍白，眼底镜发现视网膜缺血，缺血10分钟后解除夹闭的缺血装置，恢复血流后见球结膜充血和视网膜血液。

1.3 检查方法

（1）肉眼、裂隙灯及检眼镜镜观察眼部情况：排除屈光间质和眼底异常。（2）OCT检查：首先在鼠眼视盘中点下方（6:00位）2 mm处作为视网膜形态学检查的标记点。然后，将鼠眼固定于OCT（日本Topcon 3D OCT-1000型）颌架合适位置上，通过监视屏观察，保证OCT探测光源对准处，采用直线横向扫描方式，对视网膜进行横向断层扫描，扫描线长4 mm。重复检测3次以上，对其中成像清晰者存盘（不少于3幅图像）以备分析。分析测量依电脑内装程序，根据不同光反射强度来分辨视网膜内界膜和色素上皮前界（呈现红色），再用OCT分析仪中设置的标尺对上述两点间的距离进行测量，将4 mm长扫描图5等分，测定5个点位的距离，求其平均值。

1.4 给药方法

银杏叶提取物治疗组：短暂缺血后，即刻按5 ml/kg体重剂量尾静脉注射1%银杏叶提取物（舒血宁），连用10 d。生理盐水对照组：短暂缺血后，即刻尾静脉注射同样体积的生理盐水，连用10 d。短暂缺血组和正常组不做处理。

1.5 统计学处理

采用spss 11.5软件包，比较鼠眼正常组、短暂缺血组、生理盐水对照组和银杏叶提取物治疗组的OCT检查视网膜厚度平均值的变化。采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

视网膜厚度的比较：短暂缺血组6只实验大鼠均显示视网膜厚度增加，神经上皮层（除光感受器外）的反射性增强；银杏叶提取物治疗组则视网膜厚度和神经上皮层反射性均比短暂缺血时的鼠眼有所减低；而上述类似改变在生理盐水对照组则不明显。对鼠眼正常组（图1）、短暂缺血组（图2）、生理盐水对照组（图3）和银杏叶提取物治疗组（图4）的视网膜厚度平均值的OCT检查结果，进行两者均值t检验，差异有统计学意义的是：短暂缺血组与正常组（t=4.489，P＜0.01)；银杏叶提取物治疗组与短暂缺血组（t=3.366，P＜0.01)；银杏叶提取物治疗组与生理盐水对照组（t=6.765，P＜0.01)。而银杏叶提取物治疗组与正常组（t=1.939，P＞0.05）;生理盐水对照组与短暂缺血组比较（t=0.579，P＞0.05），差异无统计学意义。

表1 各组鼠眼视网膜厚度的OCT检查结果（±s，μm）

表1 各组鼠眼视网膜厚度的OCT检查结果（±s，μm）

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3 讨论

随着社会日益城镇化及饮食结构的改变，溺水、异物吸入、手术麻醉意外、人口老龄化所致短暂全脑缺血、心脏骤停、等多种因素引起短暂缺血，使供应眼部血管（眼动脉、睫状动脉与视网膜中央动脉）的血流减少甚至中断，导致视功能损害的事件不断发生，所以有必要早期、有效、积极的干预治疗以避免视功能受损。

OCT作为一种非接触性、非侵入性、高分辨率的成像手段，可以产生高精度的视网膜断面图像〔6〕，已经被广泛应用于眼底疾病的定位和定性等方面，尤其是对视网膜疾病的诊治起着十分重要的作用。鼠眼短暂缺血以及干预治疗后使用OCT进行视网膜检查有很高的敏感性和特异性，可获得类似于活体组织病理学观察的结果。因此本研究采用大鼠模拟短暂缺血后所致眼部视网膜改变模型，进行OCT检查以观察银杏叶提取物的疗效，为相应临床研究提供诊疗依据。

我国拥有银杏叶资源占世界90%，作为银杏研究最早、首先将其作为药物的国家，其提取物亦是近年来成为研究的热点才备受世人关注。在欧美国家已采用银杏叶提取物治疗心脑血管和老年痴呆疾病取得良好疗效〔7〕，银杏叶提取物是从植物银杏叶中提取精制而成的，银杏叶性味甘苦涩平，有益心敛肺，化湿止泻作用。据现代药理研究，银杏叶对人体和动物体的作用较为广泛，已有的资料表明其主要药理作用有两大类：银杏黄酮和内酯成分，前者发挥抗氧化，后者起扩张血管的作用〔8，9〕，国外有学者 用放射性同位素标记后，给动物口服银杏叶，在视网膜上显示药物有足够的浓度及其代谢产物〔10〕，再次说明银杏叶能通过血眼屏障到达视网膜节细胞。

从本实验结果来看：夹闭大鼠双侧颈总动脉10分钟造成的短暂缺血时间已经超过了细胞耐受极值，此时肉眼可见球结膜苍白，检眼镜显示视网膜缺血。采用OCT检测短暂缺血组与正常组的鼠眼视网膜厚度，两者均值比较，差异有统计学意义；短暂缺血组不仅视网膜厚度增加，而且神经上皮层的反射性亦增强；这就表明建立的短暂缺血后视网膜改变模型已成功。同样地OCT检测鼠眼视网膜厚度：两者均值比较，银杏叶提取物治疗组与短暂缺血组；银杏叶提取物治疗组与生理盐水对照组差异均有统计学意义；银杏叶提取物治疗组疗效明显优于生理盐水对照组。在神经上皮层反射性方面，视网膜结构或细胞形态学改变可引起其光学特性的改变，引起反射性增强的原因包括视网膜动脉阻塞、炎症渗出至各层视网膜、硬性渗出、出血、新生血管膜、视网膜色素沉着以及前膜形成等；反射性减弱可以由视网膜水肿引起。本研究中银杏叶提取物治疗组神经上皮层反射性均比短暂缺血时的鼠眼有所减低；而上述类似改变在生理盐水对照组则不明显，表明银杏叶提取物治疗组疗效优于对照组。我们推测银杏叶提取物在临床剂量下，调节血管活性，改善微循环等作用，有利于疏通小血管内的血液瘀滞，有可能减低鼠眼短暂缺血后视网膜病变，从而保护和恢复缺血后视功能，避免不可逆的的视功能损害。

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