舒巴坦匹酯在肉鸡体内药物动力学研究

何 斌，操继跃，陈 洁，陆 征，李在建，杨文海，童新红，江 晖

（1.华中农业大学动物医学院，武汉430070；2.武汉市畜牧兽医科学研究所，武汉430208）

舒巴坦匹酯（Sulbactam Pivoxyl）为 β-内酰胺酶抑制剂药物，常以舒巴坦为原料，在其基础上引入（2，2-二甲基-1-氧代丙氧）甲基而得的酯类化合物。在胃肠道吸收后进入血液循环系统，在血液中迅速转化为舒巴坦而发挥抑酶作用［1-2］，与直接口灌舒巴坦相比，提高了其血药浓度和生物利用度；舒巴坦通过与β-内酰胺酶不可逆性结合而发挥对酶的抑制作用，保护β-内酰胺类药物对敏感细菌原有的抗菌活性。因此，临床上常将其与β-内酰胺类抗菌药物联合应用，对产酶耐药菌发挥协同增效作用，提高耐药菌的敏感性［3-4］。但是，目前国内外未见舒巴坦匹酯及其相关物质在家禽体内药动学的研究报道。因此，为了掌握其在家禽体内的吸收、分布、转化及消除规律，为家禽养殖临床用药提供理论指导，开展其在肉鸡体内的药物动力学研究显得十分必要。

1 材料与方法

1.1 试验材料 美国Agilent 1100型高效液相色谱仪，紫外检测器，Agilent ZORBAX SB-Aq柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；原料药品均由四川华蜀动物药业有限公司提供，舒巴坦钠原料药，批号：20100312，含量 98%；舒巴坦匹酯原料药，批号：20100406，含量99%；舒巴坦对照品，上海安谱科学仪器有限公司提供，批号：CDCT-C 16986600，含量：99.0%。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件 经过反复试验，确立色谱条件为如下：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-Aq柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长为 210 nm；流动相为乙腈：0.01 mol／L KH2PO4（pH 4.0） ＝ 7 ∶93；流速为1.0 mL／min；进样量为20 μL；柱温为（30±0.1） ℃。

1.2.2 血浆样品处理 舒巴坦：准确吸取血浆0.5 mL，加入 1.0 mol／L HCl溶液 0.5 mL，旋涡振荡1 min，然后加入3 mL乙醚提取两次，每次旋涡振荡1 min，3000 r／min离心，准确吸取乙醚层，合并两次乙醚提取液于10 mL尖底聚丙烯离心管中，35℃水浴蒸干，残留物加200 μL流动相充分溶解，12000 r／min 高速离心10 min，取上清20 μL 进样分析，记录色谱图。

1.2.3 血浆标准曲线的建立 向9支5 mL聚丙烯离心管中各加入0.5 mL空白血浆，留一支作空白对照，然后依次加入对照品标准工作液，便得到药物浓度依次为 0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 μg／mL的血浆样品。按照舒巴坦血浆样品处理方法处理后，进样分析。分别以测得舒巴坦的峰面积（A）为横坐标，浓度（C）为纵坐标，建立标准曲线，求得舒巴坦的回归方程为C＝ 0.0332A+0.0011，r为 0.9992。

1.2.4 方法学验证 取空白血浆0.5 mL，分别添加适量舒巴坦标准工作液，浓度分别为 10、1.0、0.1 μg／mL的血浆样品，按照血浆样品的处理方法处理，并进行HPLC检测，每个浓度设置5个平行，测定结果为日内变异系数在5%以内；重复检测5 d，测定结果为日间变异系数在10%以内。舒巴坦的萃取回收率为89.69%～96.33%；LOD、LOQ分别为 0.01、0.04 μg／mL。

1.2.5 药物动力学试验设计 试验用三黄肉鸡购于养鸡场，35日龄，雌雄各半，试验前适应饲喂7 d，给药前将20羽三黄肉鸡随机分成两组，禁食12 h，采用单一两期交叉试验设计分别给药。贵要静脉注射和口灌两种给药方式，其中一组以含舒巴坦3.75 mg／kg.B.W（舒巴坦一般与阿莫西林等抗生素按照4：1联合应用，兽药典规定阿莫西林的临床使用剂量为15 mg／kg.B.W）剂量于贵要静脉注射舒巴坦钠注射液，另一组以1 mL／kg.B.W剂量口灌舒巴坦匹酯口灌液（舒巴坦的浓度为3.75 mg／mL），间隔10 d，交叉重复给药。

贵要静脉注射给药后，剥离另一侧贵要静脉，分别于 0.083、0.167、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8 h 采血1 mL左右；口灌给药后，分别于 0.083、0.167、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、12 h 采血 2 mL 左右，置于已加肝素钠的聚丙烯离心管中，以3000 r／min离心15 min，取上清液于-20℃冷冻保存，待测定。

1.2.6 数据处理及统计分析 方法学验证考察数据采用SPSS 18.0软件分析处理；药时曲线图和消除动态图采用Excel软件绘制；药物动力学模型拟合及参数计算均采用3P97药动学软件分析，药物动力学参数可根据公式进行计算。

2 结果

2.1 色谱行为 通过反复多次试验所建立的色谱条件，基线平稳，药物峰形良好，样品中阿莫西林及舒巴坦在各自的色谱条件下均能与杂质峰良好分离。结果表明，本测定方法简便，稳定，分检测效率高，色谱峰良好（图1～图3）。

图1 空白血浆对照色谱图

图2 空白血浆添加舒巴坦色谱图（1.0 μg／mL）

图3 舒巴坦样品色谱图

2.2 药物动力学数据 按照试验设定方案进行给药和样品处理，经高效液相色谱分析检测、软件分析计算。静脉注射舒巴坦和口灌舒巴坦匹酯的药物动力学参数见表1～表2。

静脉注射舒巴坦钠后，药-时曲线符合无吸收二室开放模型，其药-时方程为 C ＝6.4838e-7.6842t+3.9915e-0.7541t，口灌舒巴坦匹酯后，药-时曲线符合有吸收一室开放模型，其药-时方程为 C＝1.4554e-0.3392t-1.4554e-8.0039t。 根据两者 AUC 得舒巴坦匹酯的生物利用度F为66.96%±5.95%。药物在血浆中的药-时曲线见图4～图5。

表1 静脉注射舒巴坦钠（3.75 mg／kg.B.W）在肉鸡体内的药动学参数 （n＝20）

表2 口灌舒巴坦匹酯 （3.75 mg／kg.B.W）在肉鸡体内的药动学参数 （n＝20）

图4 舒巴坦钠静注给药的血药浓度-时间曲线

3 讨论

图5 舒巴坦匹酯口灌给药的血药浓度-时间曲线

本试验中，建立了舒巴坦的高效液相色谱检测方法，方法简单、快速。舒巴坦具有很多活性基团，在液相色谱检测时，药物中的阳离子易与色谱柱中游离的硅羟基经范德华力作用或发生离子反应，使其在色谱柱中被吸附，洗脱时间延长，导致色谱峰拖尾。在进行分析时，选择双峰端C18硅胶色谱柱或者选择洗脱能力较强的流动相均可以有效解决这种问题。本试验比较了Agilent Extend-C18和Agilent ZORBAX SB-Aq两种色谱分析柱的分析效果。结果发现Extend-C18色谱柱的色谱峰出现拖尾现象，色谱峰对称性不符合分析要求，在流动相中添加乙酸胺、三乙胺防等防拖尾试剂，也不能抑制其拖尾。进行分析总结后发现Extend-C18色谱柱主要用于偏碱性药物（pH 2～12）的分离，三乙胺主要抑制碱性药物的色谱峰拖尾。最后采用ZORBAX SB-Aq色谱柱，适用于酸性条件下（pH 1～7）酸性药物的分离，且适合高水相的流动相，可以走100%纯水，符合本试验流动相中95%的高水相的要求，色谱峰无拖尾现象，对称性达0.9以上，舒巴坦的药物峰与杂质峰分离良好，有效的提高了检测的灵敏度，使药物与杂质得到了有效分离。

目前未见舒巴坦在禽类相关药物动力学方面的报道，相关动力学特征不好比较；本试验测出舒巴坦匹酯在肉鸡体内的生物利用度为66.96%±5.95%，比舒巴坦钠20%的生物利用度要高很多，这与杨永革［5］等报道的舒巴坦匹酯在人体内的生物利用度80%要低一些，这可能是种属的差异，主要是与禽类的消化道结构功能有腺胃和肌胃，影响药物吸收；以及禽类体温较高，代谢较快等原因所致。

舒巴坦匹酯的药动学数据表明，舒巴坦匹酯在肉鸡体内吸收迅速、分布快，与［6-8］研究报道的β-内酰胺类抗菌药物阿莫西林、氨苄西林等在肉鸡体内的消除半衰期和达峰时间较相近，显示舒巴坦匹酯与β-内酰胺类抗菌药物阿莫西林、氨苄西林等［9-10］在肉鸡体内具有相似的药动学特征，舒巴坦匹酯的药动学研究，提供其在机体内的吸收、分布、转化和排泄的规律，这对临床药剂量、给药方案的拟定和舒巴坦匹酯与β-内酰胺类抗菌药物阿莫西林、氨苄西林等药物的联合使用具有重要的临床指导意义。但舒巴坦匹酯与β-内酰胺类抗菌药物阿莫西林、氨苄西林等联合应用于肉鸡的药物动力学特征是否相似，有待进一步研究。

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