海藻消瘤胶囊的质量控制

焦玉 胡然

海藻消瘤胶囊处方为湖北省中医名师内分泌科专家胡思荣主任医师集多年临床经验，自拟所得。全方以软坚散结，祛瘀通络治其标，疏肝解郁，消痰祛湿治其本，由海藻、昆布、浙贝母、土鳖虫、制鳖甲、生牡蛎、三棱、莪术、桃仁、白花蛇舌草、半枝莲、夏枯草、黄柏、川厚朴、白芍药、延胡索、金银花、陈皮、焦山楂、茯苓、生甘草组成。功效软坚散结，化痰消瘤，祛瘀通脉，用于乳腺增生、甲状腺瘤。为控制该制剂的质量，更好的应用于临床，对其进行了质量控制方法研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料(1)处方:海藻、昆布、浙贝母、土鳖虫、制鳖甲、生牡蛎、三棱、莪术、桃仁、白花蛇舌草、半枝莲、夏枯草、川厚朴、黄柏、白芍药、延胡索、金银花、陈皮、焦山楂、茯苓、生甘草。(2)制备工艺:将处方量药材浸泡半小时后，加10 倍量水煎煮2 次，2 h/次，滤过，合并滤液，浓缩成浸膏，加淀粉适量，混匀，于60℃干燥后，粉碎，过80 目筛，整粒，分装，即得。

1.2 仪器与试药

1.2.1 仪器:高效液相色谱仪(2910 泵，2930UV 检测器，N2000 工作站，上海天普精密科学仪器有限公司);C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，江苏汉邦科技有限公司);ZF-1 三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)，电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，TG328A 型光学读数分析天平(湘仪天平仪器厂)。

1.2.2 试药:①材料:聚酰胺薄膜(规格:10 cm×10 cm，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)。②试剂:甲醇、乙腈(色谱级，天津市大茂化学试剂厂)，注射用水(四川科伦药业股份有限公司)。甲醇(分析纯，西陇化工股份有限公司)，乙酸乙酯(分析纯，天津市永大化学试剂有限公司)，氨水(分析纯，襄樊市樊城福利化工厂)，蒸馏水(自制)。③药品:三批海藻消瘤胶囊样品(规 格:0.26 g/粒，批号:20120706、20130122、20130208)。贝母素甲对照品(购自中国药品生物制品检定院，批号:110750-200609)，贝母素乙对照品(购自中国药品生物制品检定院，批号:110751-200709)，橙皮苷对照品(购自中国药品生物制品检定院，批号:0721-200010)，柚皮苷对照品(购自中国药品生物制品检定院，批号:110722-200610)，绿原酸对照品(购自中国药品生物制品检定院，批号:110753-200413)，盐酸小檗碱对照品(购自中国药品生物制品检定院，批号:110713-200911，纯度86.8%)。缺浙贝母、金银花、陈皮和黄柏的阴性对照分别按制法自制。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 浙贝母的薄层鉴别:取本品10 g，加水30 ml，加热使溶解，放至室温，加浓氨试液调pH 值至11 ～12，用二氯甲烷振摇提取2 次，40 ml/次，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加无水乙醇1 ml 使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素甲、贝母素乙对照品，加无水乙醇制成每1 毫升各含2 mg 的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(17∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。斑点分离度好，缺浙贝母的阴性样品无干扰。薄层色谱图见图1。

2.1.2 金银花的薄层鉴别:取本品5 g，加甲醇50 ml，加热回流30 min，放冷，滤过，蒸干，残渣加水20 ml 使摇提取2 次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 毫升含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各2 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶4∶3.5∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。缺金银花的阴性样品无干扰。薄层色谱图见图2。

图1 海藻消瘤胶囊中浙贝母的薄层鉴别

图2 海藻消瘤胶囊中金银花的薄层鉴别

2.1.3 陈皮的薄层鉴别:取2.1.2 鉴别项下的供试品溶液，作为供试品溶液。取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml 含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。另取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成过饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各2 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-冰醋酸(5∶1∶1∶0.02)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365 nm)下检视。缺陈皮的阴性样品无干扰。薄层色谱图见图3。

图3 海藻消瘤胶囊中陈皮的薄层鉴别

2.2 黄柏中盐酸小檗碱的含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验:C18 色谱柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，ODS 预柱，流动相:乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH 值至3.0)(30∶70)，流速1.0 ml/min，检测波长∶270 nm，进样:20 μl，柱温:室温。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3 000。拖尾因子小于1.05，主峰盐酸小檗碱峰与杂质峰的分离度大于1.5。

2.2.2 溶液的制备:①对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱峰对照品3.70 mg(纯度86.8%)，置10 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，作为对照品储备液。精密吸取该储备液3 ～50 ml 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每1 毫升含19.27 μg 的溶液。②供试品溶液的制备:取本品，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液50 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇溶液(1∶100)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 专属性试验:将2.2.2 项下制备缺黄柏的阴性样品溶液，按2.2.1 项下色谱条件进样，记录色谱图，阴性样品溶液色谱图在与对照品和供试品溶液色谱图相同的保留时间未见盐酸小檗碱色谱峰，表明阴性无干扰。对照品溶液、供试品溶液及缺黄柏的阴性样品溶液色谱图见4 ～6。

图4 对照品色谱图

图5 海藻消瘤胶囊样品色谱图

图6 缺黄柏的阴性样品色谱图

2.2.4 线性关系考察:精密吸取3.2.2 项下对照品储备液10 ml，至50 ml 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每1 毫升含64.2 μg 的溶液。分别精密吸取该溶液1、2、4、6、8 ml 置10 ml 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成进样 浓 度 为6.42、12.84、25.68、38.52、51.36、64.2 μg/ml的溶液，按3.2.1 项下色谱条件进样，测定盐酸小檗碱峰面积。以峰面积为纵坐标(Y)，进样浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，得到盐酸小檗碱的标准曲线y =18291x－12624，R2 =0.9991，结果表明盐酸小檗碱在进样浓度6.42 ～64.2 μg/ml 范围内进样量与峰面积呈良好线性关系。见图7。

2.2.5 精密度试验:精密量取盐酸小檗碱对照品溶液20 μl，注入液相色谱仪，重复进样5 次。计算盐酸小檗碱峰面积RSD 为0.51%，表明仪器精密度良好，见表1。

图7 盐酸小檗碱的标准曲线

表1 精密度试验结果

2.2.6 稳定性试验:取同一批样品(批号:20120706)，按2.2.2 项下制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h 进样，测定盐酸小檗碱峰面积，计算RSD 为0.80%，表明供试品溶液在12 h 内稳定。见表2。

表2 稳定性试验结果

2.2.7 重复性试验:取同一批样品(批号:20120706)6 份按2.2.2 项下制备供试品溶液，进样，测定盐酸小檗碱的峰面积，计算RSD 为0.98%，表明重复性良好。见表3。

表3 重复性试验结果

2.2.8 加样回收率试验:精密称取已知盐酸小檗碱含量的样品(批号:20120816，含量为1.299 μg/g)0.25 g 6 份，置具塞锥形瓶中，并加入精密量取的盐酸小檗碱对照品储备液(浓度为38.52 μg/ml)10 ml，加甲醇至刻度，按2.2.2 项下制备供试品溶液，并按2.2.1 项下色谱条件测定，计算回收率。见表4。

表4 盐酸小檗碱的回收率 n=6

2.3 样品测定精密称取三批样品各0.5 g，按2.2.2项下制备供试品溶液，并按2.2.1 项下色谱条件测定，计算盐酸小檗碱的含量。见表5。

表5 三批样品中盐酸小檗碱的含量

3 讨论

海藻消瘤胶囊方选海藻、昆布、浙贝母、制鳖甲软坚散结，消痰祛湿;黄柏、夏枯草清热散结;柴胡、厚朴疏肝解郁，理气止痛;神曲、焦山楂、茯苓健脾消食;黄芪、甘草补脾益气，缓急止痛，调和诸药，且甘草与海藻相反为用，因坚积之病。非和平之药所能取捷，必令其反伍而获其功，取其相反相成之妙用。为控制该制剂的质量，对方中的浙贝母、金银花、陈皮进行了鉴别，制剂中盐酸小檗碱的含量进行了测定。

浙贝母性微寒，味苦。清热散结，化痰止咳。浙贝母中含多种甾体生物碱，如贝母素甲、贝母素乙、浙贝丙素、贝母新碱、贝母定碱、贝母替定碱等。其公认的主要药效成分为贝母素甲和贝母素乙，药理作用明确，故以此为对照品鉴别方中药味浙贝母。

陈皮中的主要成分为挥发油类、黄酮类等。《中国药典》2010 年版一部中以橙皮苷为对照进行鉴别，由于陈皮中也存在大量的柚皮苷成分，二者同为黄酮类化合物，因此一并作为鉴别的指标。陈皮中的橙皮苷、柚皮苷和金银花中的绿原酸均含有酚羟基，中等极性，因此供试品溶液制备过程中调酸后采用乙酸乙酯溶剂萃取，聚酰胺薄膜为吸附剂进行鉴别。相比《中国药典》中对于橙皮苷的鉴别采用硅胶G 吸附剂，二次展开的方法［1］，此鉴别方法更为简便，快速，准确。

黄柏苦寒，清泄燥湿，善除下焦湿热，利于痰结祛除，为方中臣药。盐酸小檗碱为黄柏中的主要药效成分，因此将其作为含量测定的指标。方法学研究中，先后试验了流动相乙腈－0.1%磷酸溶液(50:50)(每100毫升加十二烷基磺酸钠0.1g)［1］、乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH 值至3.0)(25∶75)［1］，发现后者流动相系统组成下峰形好，柱压较前者低，因此采用后者系统组成为流动相。并对其比例进行了优化，最终采用乙腈－0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH 值至3.0)(30 ∶70)，出峰时间适合，分离度好。

医院验方大多根据临床经验自拟总结得到，由此开发出的制剂密切结合临床，品种多，规格齐，因此深受患者欢迎。该制剂所建立的质量控制方法准确、快速、重现性好，为不同制剂中含有相同药味的制剂的质量控制方法提供参考和借鉴。

1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:中国医药科技出版社.2010，176-177，286-287，1000-1001.