干姜、炮姜中成分的比较

张科卫，马彩霞，缪六舒

(南京中医药大学，江苏南京 210023)

干姜为姜科植物姜 Zingiber Offtcinale Rosc.的干燥根茎，味辛，性热，归脾、胃、肾、心、肺经。具有温中散寒，回阳通脉，温肺化饮之功。用于腕腹冷痛，呕吐泄泻，肢冷脉微，寒饮喘咳等症。

炮姜是干姜经砂烫法制得的炮制加工品，味辛，性热，归脾、胃、肾经。具有温经止血，温中止痛之功。用于阳虚失血，吐衄崩漏，脾胃虚寒，腹痛吐泻等症［1］。

干姜、炮姜均为生姜的加工炮制品，而两者主治功效差异甚大，这必与其炮制前后的成分改变有很大关系。查阅文献，目前对干姜、炮姜中总的成分的比较研究鲜见报道。

多糖类物质在中药中广泛存在，具有降血糖、降血脂、免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性［2-7］。有研究表明，生姜中所含的多糖类物质有很好的抗氧化活性［8］。

姜酚类物质是目前生姜中发现的另一大类有效物质。药理学方面的实验研究证实，姜酚类物质具有抗氧化［9］、抗肿瘤［10］、抗神经损伤和细胞保护［11］、抗呕吐［12］等多种生理活性。

近年来的研究还表明，生姜中富含黄酮类成分，且该类成分具有抗氧化［13-15］、抑菌［16］等生理活性。

干姜、炮姜为生姜的炮制加工品，生姜经过一定的炮制，其中的多糖、总酚、黄酮类物质是否发生了改变，目前尚未见到相关文献的报道。

对干姜、炮姜中几种姜酚类成分的测定虽有相关报道，但是所取样本地域范围较小，不足以体现我国幅员辽阔，及生姜出口大国的地位。

本实验对来自全国多个产地的干姜、炮姜中所含的多糖类、总酚类、总黄酮类成分及几种姜酚类物质进行了定量测定及比较研究，以期为进一步研究生姜的炮制机理进行一定的探索。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津UV-2401紫外可见分光光度计;Sartorius BP211D型电子天平;TCG-16G台式离心机 (上海安亭科学仪器厂)。Waters e2695型高效液相色谱仪，2998PDA检测器，Millennium32色谱管理系统;Sartorius BP211D型电子天平。

1.2 试药 葡萄糖 (批号110833200503)、没食子酸 (批号110831-200803);芦丁 (批号080-9303)对照品均购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用);6-gingerol(批号111228)、8-gingerol(批号120302)、10-gingerol(批号120316)、6-shogaol(批号110516)对照品均购自四川维克奇生物科技有限公司，经HPLC检测为单一成分，纯度达到98%以上。

乙腈、甲醇为色谱纯;水为亚沸蒸馏水 (自制);其他试剂均为国产分析纯。

生姜药材产地分别为海南海口、湖北武汉、山东滕州、山东郯城、福建永春、湖南永州、江西上饶、安徽浍沟、四川西昌、江苏邹庄。以上生姜均为2012年3月收集得到。

1.3 干姜的制备 取上述各产地的生姜，洗净，切片，50℃ 干燥;打粉，过4号筛，即得。

1.4 炮姜的制备 将上述各产地的生姜 (与制备干姜的生姜为同一批次)，洗净，切片，50℃ 干燥，得干姜饮片;将此干姜饮片按砂烫法烫至鼓起，表面棕褐色时，取出，放凉;打粉，过4号筛，即得。

2 方法与结果

2.1 多糖测定 参照本课题组百合多糖测定方法［17］，结果见表 1。

2.2 总酚测定 参照本课题组生姜中总酚测定的方法［18］，结果见表 2。

表1 不同产地干姜、炮姜中所含多糖的量 (n=6)Tab.1 Contents of polysaccharide in dried ginger(ganjiang)and processed ginger(paojiang)from different habitats(n=6)

表2 不同产地的干姜、炮姜中所含总酚的量 (n=6)Tab.2 Contents of total phenols in dried ginger(ganjiang)and processed ginger(paojiang)from different habitats(n=6)

2.3 黄酮测定

2.3.1 试剂的配制

2.3.1.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的芦丁对照品适量，加60%乙醇，配制成0.2090 mg/mL的对照品贮备液。

2.3.1.2 干姜供试品溶液的制备 精密称取干姜细粉1.0 g，加60% 乙醇20 mL，超声 (工作频率80 kHz，功率 250 W)30 min，离心 (4900 r/min)5 min，取上清液置50 mL量瓶中，残渣加60% 乙醇洗涤2次，每次5 mL，同前离心，合并上清液，加60% 乙醇定容，摇匀。

2.3.1.3 炮姜供试品溶液的制备 精密称取炮姜细粉1.0 g，同“干姜供试品溶液的制备”项下操作。即得。

2.3.2 测定波长的选择 精密吸取对照品溶液、干姜供试品溶液、炮姜供试品溶液各0.5、0.5、0.2 mL，分别置于10 mL的棕色具塞试管中，分别加入60% 乙醇0.5、0.5、0.8 mL，摇匀，分别依次加入甲醇1 mL，10%AlCl3溶液0.1 mL和0.1 mL醋酸钾溶液，蒸馏水2.8 mL，60% 乙醇5.0 mL，摇匀，室温放置 30 min，于 200～400 nm范围内进行光谱扫描，结果表明，对照品溶液和供试品溶液的最大吸收波长均为270 nm(见图1)。

图1 对照品 (芦丁)及样品 (江苏邹庄干姜黄酮、江苏邹庄炮姜黄酮)的紫外光谱图Fig.1 UV Spectrum of reference substance(rutin)and samples(general flavones in dried ginger(ganjiang)and processed ginger(paojiang)from Zouzhuang of Jiangsu province)

2.3.3 标准曲线的绘制 精密吸取对照品贮备液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于10 mL具塞试管中，分别加 60% 乙醇 1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.0 mL，加入 1.0 mL甲醇，10%AlCl3溶液0.1 mL和0.1 mL醋酸钾溶液，蒸馏水2.8 mL，60% 乙醇 5.0 mL，摇匀，室温放置 30 min，在270 nm测定吸光度。以吸光度为纵坐标，进样质量浓度为横坐标绘制标准曲线，求得回归方程为Y=0.0398X-0.0203，r=0.9999。线性范围为4.18 ～20.90 μg/mL。

2.3.4 精密度试验 取0.01254 mg/mL的对照品溶液，重复测定6次，记录其吸光度的值，RSD为0.45%，结果表明仪器精密度良好。

2.3.5 稳定性试验

2.3.5.1 干姜黄酮稳定性试验 精密吸取新鲜配制的干姜供试品 (江苏邹庄产)溶液0.5 mL置于10 mL的棕色具塞试管中，照“2.3.2”项下操作，分别于0、0.5、1、1.5、2 h测定其在270 nm处的吸光度，结果RSD为0.76%，结果表明本法所测样品在2 h内保持稳定。

2.3.5.2 炮姜黄酮稳定性试验 精密吸取新鲜配制的炮姜供试品 (江苏邹庄产)溶液0.2 mL，加60% 乙醇0.8 mL，置于10 mL的棕色具塞试管中，照“2.3.2”项下操作，分别于 0、0.5、1、1.5、2 h测定其在270 nm处的吸光度，结果RSD为0.88%。表明本法所测的干姜、炮姜样品溶液在2 h内保持稳定。

2.3.6 重复性试验 分别精密称取产自江苏邹庄并经低温干燥至恒重的干姜、炮姜细粉约1.0 g，平行6份。分别制成供试品溶液，照“2.3.2”项下操作，结果其中干姜所含黄酮的平均含有量为1.09%，RSD为0.99%;炮姜所含黄酮的平均含有量为2.71%，RSD为1.20%。表明所测样品的重复性良好。

2.3.7 加样回收率试验

2.3.7.1 干姜加样回收率试验 取芦丁对照品适量，加60%乙醇溶解，配成质量浓度为0.5642 mg/mL的溶液，作为加样对照品贮备液。取产自江苏邹庄并经低温干燥至恒重的干姜细粉，精密称取该细粉约0.5 g，平行6份，精密加入加样对照品贮备液 10.0 mL，加 60% 乙醇 10 mL，照“2.3.1.2”及“2.3.2”项下操作，于 270 nm处测定吸光度的值并计算回收率，得平均回收率为100.02%，RSD为1.57%。

2.3.7.2 炮姜加样回收率试验 取芦丁对照品适量，加 60% 乙醇溶解，配成质量浓度为1.3645 mg/mL的溶液，作为加样对照品贮备液。取产自江苏邹庄并经低温干燥至恒重的炮姜细粉，精密称取该细粉约0.5 g，平行6份，精密加入加样对照品贮备液 10.0 mL，加 60% 乙醇 10 mL，照“2.3.1.2”及“2.3.2”项下操作，于270 nm处测定吸光度的值并计算回收率，得平均回收率为99.46%，RSD为1.02%。

2.3.8 样品测定 取各产地的干姜、炮姜细粉，各精密称取约1.0 g，每个产地平行3份，按供试品溶液制备方法制备，照“2.3.2”项下操作，测定其270 nm处的吸光度，每份平行测定2次。根据标准曲线计算其中黄酮的量。结果见表3。

表3 不同产地的干姜、炮姜中所含黄酮的量 (n=6)Tab.3 Contents of general flavones in dried ginger(ganjiang)and processed ginger(paojiang)from different habitats(n=6)

2.4 几种活性成分的测定

2.4.1 色谱条件 Agilent TC-C18(2)(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为乙腈 (A)-水 (B)，梯度洗脱 (0～15 min，15% ～50%A;15～45 min，50%A;45～65 min，50% ～80%A;65～67 min，80% ～100% A;67 ～69min，100%～15%A;再保持13 min至82 min);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长280 nm。理论塔板数以6-gingero计不低于4000，并且6-gingerol、8-gingerol、10-gingerol、6-shogaol 与其他相邻组分的分离度均大于1.5。见图2。

2.4.2 溶液的制备

2.4.2.1 对照品溶液的制备 取减压干燥至恒重的 6-gingerol、8-gingerol、10-gingerol、6-shogaol 适量，精密称定，配制含6-gingerol 3002 μg/mL、8-gingerol 376 μg/mL、6-shogaol 74 μg/mL、10-gingerol 452 μg/mL的混合对照品溶液，作为混合对照品贮备液。

2.4.2.2 供试品溶液的制备 精密称取各产地干姜、炮姜各1.0 g，加30 mL甲醇，超声 (工作频率80 kHz，功率250 W)30 min，4900 r/min离心10 min，取上清液置50 mL量瓶中，残渣加甲醇洗涤两次，每次5 mL，同前离心，合并上清液，加甲醇定容，摇匀。即得。

2.4.3 线性关系的考察 精密称取该贮备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀，制得混合对照品溶液系列Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。取 10 μL进样，测定，以对照品质量浓度对峰面积平均值作图，结果经回归分析，6-gingerol在30.02～480.32 μg/mL范围内有良好的线性关系，回归方程为Y=5582.2X－39667，r= 0.999 9;8-gingerol在 3.76 ～60.16 μg/mL范围内有良好的线性关系，回归方程为 Y=5764.4X－1452.8，r=0.9999;6-shogaol在0.74～11.84 μg/mL范围内有良好的线性关系，回归方程为 Y=14856X+1590.4，r=0.9998;10-gingerol在4.52～72.32 μg/mL范围内有良好的线性关系，回归方程为 Y=5837.7X－7859.6，r=0.9998。

2.4.4 精密度试验

2.4.4.1 对照品精密度试验 精密吸取混合对照品溶液Ⅲ10 μL进样，重复6次，以峰面积计算RSD，结 果 6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol的RSD分别为1.83%、1.19%、1.55%、0.53%。

2.4.4.2 干姜精密度试验 取干姜供试品溶液(海南海口)重复进样6次，进样量10 μL，记录所测各组分积分面积。结果6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol的 RSD分别为 1.71%、1.40%、1.67%、1.86%。

图2 对照品及样品的HPLC图谱Fig.2 HPLC chromatogroms of reference substance and samples

2.4.4.3 炮姜精密度试验 取炮姜供试品溶液(海南海口)重复进样6次，进样量10 μL，记录所测各组分积分面积。结果6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol的 RSD分别为 0.89%、0.50%、0.87%、1.09%。

控制预测[6]系统是超导磁场储能型微网预测控制模型的核心部分,并且是最复杂与关键的板块,能够划分为两个板块:外环控制和内环控制。

2.4.5 重复性试验

2.4.5.1 干姜 取同一批次海南海口干姜，按供试品溶液的制备方法平行制备6份，依法测定，计算各组分的量，结果 6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol的 RSD分别为0.82%、1.41%、0.92%、1.96%。

2.4.5.2 炮姜 取同一批次海南海口炮姜，按供试品溶液的制备方法平行制备6份，依法测定，计算各组分的量，结果 6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol的 RSD分别为1.88%、1.07%、1.76%、1.85%。

2.4.6 稳定性试验

2.4.6.1 干姜 新配制的干姜供试品溶液 (海南海口产)，分别于 0、1.5、3.0、4.5、6.0、7.5、9.0、10.5、12 h进样 9次，测定 6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol峰面积，结果其RSD分别为 1.81%、1.09%、1.56%、1.53%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.4.6.2 炮姜 新配制的炮姜供试品溶液 (海南海口产)，分别于 0、1.5、3.0、4.5、6.0、7.5、9.0、10.5、12 h进样 9次，测定 6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol峰面积，结果其RSD分别为 1.46%、1.49%、1.73%、1.79%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.4.7 加样回收率试验

2.4.7.1 干姜 分别精密称取6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol各适量，配制成含 6-gingerol 673.12 μg/mL、8-gingerol 99.92 μg/mL、6-shogaol 5.06 μg/mL、10-gingerol 179.96 μg/mL的混合溶液，即为加样对照品贮备液。

精密称取干姜 (海南海口产)0.5 g，平行6份，精密加入上述加样对照品贮备液5.0 mL，照供试品溶液制备项下操作。结果，6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol的加样回收率分别为 99.93%、99.69%、99.78%、99.87%，RSD分别为1.55%、1.61%、1.27%、1.74%。

2.4.7.2 炮姜 分别精密称取6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol各适量，配制成含 6-gingerol 419.6 μg/mL、8-gingerol 70.4 μg/mL、6-shogaol 55.6 μg/mL、10-gingerol 145.6 μg/mL 的混合溶液，即为加样对照品贮备液。

精密称取炮姜 (海南海口产)0.5 g，平行6份，精密加入上述加样对照品贮备液5.0 mL，照供试品溶液制备项下操作。结果，6-gingerol、8-gingerol、6-shogaol、10-gingerol的加样回收率分别为 99.81%、99.03%、99.27%、99.45%，RSD分别为1.56%、1.33%、1.56%、1.54%。

2.4.8 样品测定 取各产地的干姜、炮姜，照“2.4.2.2”项下操作，制成供试品溶液，取10 μL进样，以外标法计算，每个产区的干姜、炮姜平行3份，每份进样2次。结果见表4。

3 结论与讨论

3.1 实验结果表明，来自全国各产地的干姜与炮姜中多糖、总酚、黄酮及几种活性成分的量差异显著，同批次生姜炮制品中，炮姜中所含有的多糖、总酚、黄酮的量明显高于干姜;而对几种活性成分的量测定结果表明，炮姜中所含的6-gingerol、8-gingerol、10-gingerol的量明显低于干姜，而 6-shogaol的量明显高于干姜，这可能与在砂炒过程中，由于受高温的影响，饮片中的相关成分发生了变化有关。

表4 不同产地的干姜、炮姜中几种姜酚类成分的量 (n=6)Tab.4 Contents of several gingerols and 6-shogaol in dried ginger(ganjiang)and processed ginger(paojiang)from different habitats(n=6)

3.2 干姜中含多糖量最高的为福建永春，13.99%;含多糖量最低的为山东滕州，3.23%。十个产地的干姜中多糖平均含有量为7.01%。炮姜中含多糖量最高的为海南海口，17.88%;含多糖量最低的为山东郯城，7.87%。十个产地的炮姜中多糖平均含量为11.90%。

3.3 在实验过程中，本课题组还测定了干姜和炮姜中的总糖量、非多糖量，结果表明，干姜和炮姜中所含有的总糖量基本一致，非多糖量与多糖量呈现明显的负相关。说明在炮制过程中，由于受高温的影响，多糖量升高，非多糖量下降。至于在炮制过程中，这些多糖和非多糖的结构到底如何改变，以及这些改变是否与干姜、炮姜的功效有直接的关系，值得进一步深入研究。

3.4 干姜中含总酚量最高的为安徽浍沟，1.85%，含总酚量最低的为海南海口，1.23%，十个产地的干姜中总酚平均含有量为1.53%。炮姜中含总酚量最高的为湖北武汉，2.86%，最低为福建永春，1.68%。十个产地的炮姜中含总酚的平均含有量为2.09%。

3.5 干姜中含黄酮量最高的为江西上饶，1.32%，含黄酮量最低的为海南海口，0.94%，十个产地的干姜中黄酮平均含量为1.12%。炮姜中含黄酮量最高的为山东郯城，4.14%，含黄酮量最低的为福建永春，1.86%，十个产地的炮姜中黄酮的平均含量为2.86%。

3.6 在《中国药典》2010年版中，干姜和炮姜的含量测定项下仅测定了6-姜辣素 (即6-gingerol)，这个方法对控制其质量不是很全面，也不科学。本实验对其中的多种姜酚类成分进行了测定，同时还对其中的多糖、总酚、黄酮类物质也进行了定量测定研究。以期为控制干姜和炮姜的质量做一些有益的探索。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:13-15.

［2］罗祖友，胡筱波，吴谋成.植物多糖的降血糖与降血脂作用［J］.食品科学，2007，28(10):596-600.

［3］张 磊，孟 林.植物多糖的免疫调节作用研究进展［J］.天津医科大学学报，2007，13(4):615-618.

［4］张 强，牟雪姣，周正义，等.洋葱多糖的提取及其抗氧化活性研究［J］.食品与发酵工业，2007，33(1):138-141.

［5］秦卫东，梅红霞，朱金凤.仙人掌多糖清除自由基的研究［J］.中国食品添加剂，2006(5):66-68.

［6］李朝阳，刘 魁，韩忠宵，等.大蒜多糖的酶法提取及其抗氧化性研究［J］.食品科学，2008，29(1):117-120.

［7］林梦感，杨义芳，李永辉.多糖抗肿瘤活性构效关系的研究进展［J］.中草药，2007，38(6):949-953.

［8］Zhang Z S，Wang X M，Zhang J J，et al.Potential antioxidant activities in vitro of polysaccharides extracted from ginge(Zingiber officinale)［J］.Carbohydrate Polymers，2011，86(2):448-452.

［9］Chakraborty D，Mukherjee A，Sikdar S，et al.［6］ -Gingerol isolated from ginger attenuates sodium arsenite induced oxidativestress and plays a corrective role in improving sulin signaling in mice［J］.Toxicol Lett，2012，210(1):34 －43.

［10］Weng C J，Yen G C.Chemopreventive effects of dietary phytochemicals against cancer invasion and metastasis:Phenolic acids，monophenol，polyphenol，and their derivatives［J］.Cancer Treatment Reviews，2012，38(1):76-87.

［11］Shim S，Kim S，Kwon Y B，et al.Protection by［6］ -shogaol against lipopolysaccharide-induced toxicity in murine astrocytes is related to production of brain-derived neurotrophic factor［J］.Food Chem Toxicol，2012，50(3/4):597-602.

［12］Kawai T，Kinoshita K，Koyama K，et al.Anti-emetic principles of Magnolia obovata Bark and Zingiber officinale Rhizome［J］.Plant Med，1994，60(1):17-20.

［13］莫开菊，柳 圣，程 超.生姜黄酮的抗氧化活性研究［J］.食品科学，2006，27(9):111-112.

［14］杨 洋.生姜黄酮的提取及其抗氧化活性的测定［J］.中国调味品，2002，7(7):18-27.

［15］于 洁，陈耀容，王世祥，等.生姜黄酮的提取及性能研究［J］.食品科学，2009，30(24):108-113.

［16］王 娜，褚衍亮.超声辅助提取生姜黄酮及其抑菌活性研究［J］.江苏科技大学学报，2009，23(5):450-453.

［17］孙 俊，张科卫，秦昆明，等.不同产地百合多糖的含量测定［J］.南京中医药大学学报，2010，26(1):65-66.

［18］张科卫，马彩霞，缪六舒.Folin-Ciocaileu比色法测定不同产地生姜中总酚［J］.中成药，2012，34(12):2450-2452.