整合素α5β1、CD44V3表达与胃癌临床病理特征的关系

张杰，贺宇，谢朝辉

（1.河北省承德市中心医院，河北 承德 067000 E-mail：jiezhanghebei＠163.com；2.河北省承德市第三人民医院，河北 承德 067000）

胃癌和其他恶性肿瘤一样有着共同的转移机制，其机制是一个多阶段、多步骤的复杂过程[1]。黏附分子（adhesion molecules）是介导细胞与细胞、细胞与基质间相互作用的转膜糖蛋白，在癌细胞的侵袭与转移中有重要作用[2]。整合素是广泛存在于细胞表面的一类细胞黏附分子，主要介导细胞之间、细胞与细胞外基质（ECM）间的黏附[3-4]。α5β1是整合素家族中重要的一员，通过影响肿瘤细胞与细胞外基质的黏附、水解诱导肿瘤血管的生成，调节肿瘤细胞的凋亡[5]。本文探讨整合素α5β1和细胞黏附分子44-V3（CD44V3）与胃癌患者肿瘤细胞内的表达意义，及其与胃癌临床病理特征的关系。

1 资料及方法

1.1 临床资料 2012年1月～2013年12月收集本院106例行内镜活检及手术治疗的胃黏膜组织样本，其中男性85例，女性21例，年龄18～78岁，平均年龄（53.62±5.36）岁。根据病理组织检查结果分为正常对照组30例，癌前病变组42例（其中不典型增生12例，肠生化30例）以及胃癌组34例，其中胃癌组患者活检前未接受过放化疗治疗。采用10%的中性甲醇固定标本，石蜡包埋脱水，将样本制成3mm切片备用。

1.2 标本采集 ①胃癌根治手术者均于术后将胃切开获取组织细胞；②保胃手术者将阳性组织部分切除并获取组织细胞；③非胃癌患者在门诊行活体组织细胞检查。所有胃组织均在无菌的条件下将其置于含有双抗（链霉素、青霉素各1000IU／ml）的预冷PBS的溶液中，并立刻在无菌的工作台上对胃组织细胞进行原代培养。

1.3 方法

1.3.1 免疫化学组织染色 将样本组织剪碎后采用DHank’s试剂液（美国Gibco公司）进行冲洗，并加入1mg／ml的DNASeI以及2.5g／L胰蛋白酶（由美国Gibco公司提供）混合液，并在37℃中孵化60min，并在含有小牛血清的DMEM（由美国Gibco公司提供）培养基中终止消化。样液反复吹打后过滤弃上清液，并用D-Hank＇s试剂洗涤2次，再次离心5min，弃掉上清液，留置沉淀物，采用SABC法测定NF-κB，兔抗人NF-κBp65单克隆抗体由美国Sgima公司提供，采用SP法测定胃黏膜中整合素α5β1及CD44V3，鼠抗人α5β1及兔抗人CD44V3单克隆抗体有北京金桥生物公司提供。

1.4 结果判定 每张切片随机选取5个（×400）的高倍视野记录阳性细胞百分率，阴性（-）：无着色细胞；弱阳性（＋）：阳性着色细胞＜25%；阳性（＋＋）：着色细胞细胞25%～50%；强阳性（＋＋＋）：阳性着色细胞＞50%。

1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0进行统计学分析，组间计数资料采用率表示，组间比较采用χ2表示，等级资料采用Spearman等级相关性分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同胃黏膜病变中整合素α5β1阳性表达情况 对三组进行χ2检验，结果显示差异有统计学意义（χ2＝57.702，P ＜0.001），进而两两比较。癌前病变组患者整合素α5β1阳性表达率显著高于正常对照组，差异有统计学意义（χ2＝53.529，P＜0.001）；癌前病变组患者整合素α5β1阳性表达率显著高于胃癌组，差异有统计学意义（χ2＝4.955，P ＝0.026）；而胃癌组整合素α5β1阳性表达率高于正常对照组，差异有统计学意义（χ2＝30.285，P＜0.001），见表1。

表1 不同胃黏膜病变中整合素α5β1阳性表达情况 （n，%）

2.2 不同胃黏膜病变中CD44V3蛋白阳性表达情况 对三组进行χ2检验，结果显示差异具有统计学意义（χ2＝20.120，P＜0.001），进行两两比较。胃癌组患者CD44V3阳性表达率显著高于正常对照组，差异具有统计学意义（χ2＝23.988，P＜0.001）；胃癌组患者CD44V3阳性表达率显著高于癌前病变组，差异具有统计学意义（χ2＝7.957，P ＝0.005）；而癌前病变组CD44V3阳性表达率高于正常对照组，差异具有统计学意义（χ2＝7.111，P＝0.008），见表2。

表2 不同胃黏膜病变中CD44V3蛋白阳性表达情况 （n，%）

2.3 整合素α5β1、CD44V与胃癌临床病理因素的相关关系整合素 α5β1阳性表达率与胃癌临床分期（r＝0.485，P ＝0.014）、分化程度（r＝0.378，P ＝0.004）呈正相关，CD44V3阳性表达率与临床分期（r＝0.435，P ＝0.010）、分化程度（r＝0.341，P＝0.008）、病灶大小（r＝0.536，P＝0.004）及淋巴结转移（r＝0.348，P ＝0.004）呈正相关。

3 讨论

目前关于胃癌的发病机制尚不明确，但普遍认为环境因素、生物因素、化学因素、物理因素等相关因素可导致多种抑癌基因失活及原癌基因的激活而引起的机体细胞生物学行为发生一系列的改变，从而引发癌症[6-7]。

本研究结果显示，胃癌癌前病变患者整合素α5β1阳性表达率显著高于对照组，从而支持了整合素α5β1可引起胃正常黏膜组织细胞肠化的观点[8]。此外，本研究发现，癌前病变组患者整合素α5β1表达水平高于胃癌组，且其表达强度随着胃癌患者分化程度的增加而减弱，从而表明整合素α5β1表达水平的缺损可能与胃癌的发生密切相关。

赵甘婷等[9]研究认为CD44V3参与肿瘤血管形成、细胞分化及转移过程中，但不同的肿瘤组织中CD44V3上调或下调存在一定的差异。本研究中CD44V3表达则与分化程度及临床分期有关，目前关于CD44V3表达与肿瘤的病理特征的关系已有相关报道。汪雷等[10]研究指出，白血病患者癌细胞分化后，CD44V3表达水平显著上调，从而表明CD44V3可参与胃癌的发生及进展。

综上所述，大量的研究已经发现，癌细胞脱落不总是引起腹腔肿瘤转移，肿瘤转移关键是细胞运动，细胞黏附是肿瘤细胞运动的基本过程。整合素为参加细胞黏附的主要分子，它的表达异常和胃癌细胞转移关系密切。整合素α5β1和CD44V3表达异常可能作为一种灵敏、无创、用活检标本检测的指标，对胃癌转移、复发进行早期监测，而有利于人们对此采取相应的措施。对与胃癌转移相关的整合素α5β1、CD44V3功能区抗体，可抑制胃癌细胞的淋巴结以及远处转移，促使人们进一步探索，为转移癌治疗开辟新途径。

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[2]李珏，陈立新，张沛峰，等.胃癌患者血清活性氧、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶水平观察[J].右江民族医学院学报，2013，35（4）：460-461.

[3]李桃，齐洁敏.整合素α5β1、CD151在胃癌中的表达及意义[J].中国老年学杂志，2013，33（11）：2527-2529.

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[5]李桃，齐洁敏.整合素α5β1和乙酰肝素酶在胃癌中的表达及意义[J].广东医学，2012，33（19）：2974-2976.

[6]朱大伟，陈俊俊，裴红蕾，等.胃癌组织中粘附分子整合素CD11c的表达及对预后的影响[J].临床肿瘤学杂志，2013，18（9）：782-785.

[7]张杰，江小华，齐洁敏，等.整合素α5β1及CD44V3与胃癌关系的研究进展[J].临床和实验医学杂志，2014，13（3）：240-242.

[8]王华毅，谢先木，付德琴，等.腹腔冲洗液L3-PP和整合素α5β1检测对胃癌腹膜种植转移预测价值分析[J].中华肿瘤防治杂志，2013，20（4）：281-284.

[9]赵甘婷，肖鹏，李灵敏，等.整合素β1在胃癌中的表达及与胃癌浸润转移的相关性研究[J].中国药物与临床，2012，12（12）：1570-1572.

[10]赵雪艳，王娟，荣小伟，等.DS对胃癌细胞整合素β1表达及腹腔种植转移的影响[J].临床与实验病理学杂志，2013，29（4）：365-368.