贯叶连翘提取物联合美沙酮对海洛因成瘾大鼠行为及脑单胺递质的影响

王 昱

（陇南师范高等专科学校 生化系，甘肃 成县742500）

海洛因学名二乙酰吗啡，是吗啡二乙酰的衍生物 .滥用海洛因会造成生理依赖和精神依赖，依赖机理十分复杂，涉及NE能系统、DA能系统、5-HT能系统、胆碱能系统、组胺系统及离子通道系统等多个系统［1～3］.随着阿片类受体激动剂美沙酮等药物的应用，目前早期脱毒的治疗问题已基本得到解决.但海洛因造成的生理内稳态失调在短时间内不能完全纠正，其产生的一系列戒断症状是导致毒品复吸的重要原因 .韦世秀等［4］模拟人类成瘾、治疗、复吸成瘾、再治疗的方式，从不同阶段海洛因成瘾大鼠脑内单胺递质变化的角度探讨了成瘾机制，并得出多递质检测是治疗或预防阿片类物质依赖、减轻戒断症状的有益工具.

贯叶连翘 （Hypericum perforatum Linn）为藤黄科金丝桃属多年生草本植物，主要成分为贯叶金丝桃素和黄酮类化合物［5，6］.中医认为贯叶连翘具有清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎、利湿的功效 .现代研究表明贯叶连翘具有抗忧郁、抗病毒、抗菌、镇痛、抗肿瘤等作用［7］.近年发现贯叶连翘能有效清除氧自由基、能对抗氧化应激损伤，有抗衰老、提高免疫力的功能［8～12］.为了提高海洛因脱毒成功率和临床疗效，本研究拟以海洛因依赖大鼠为模型，在美沙酮脱毒治疗基础上加用贯叶连翘提取物（hypericum perforatum linn extract，HPLE）辅助治疗，通过观察分析大鼠的行为及脑内单胺递质的变化，研究HPLE对减轻海洛因戒断症状的临床效果.

1 材料与方法

1.1 材料

盐酸海洛因（纯度≥98%，成县公安局提供）；去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、5-吲哚乙酸（5-HIAA）均购自南京建成生物工程研究所；美沙酮注射液（天津中央药业有限公司生产，批号020515），其他试剂均为国产分析纯；贯叶连翘提取物为棕褐色粉末（含金丝桃素56%）由北大维信生物科技有限公司提供（批号：010413）；明暗箱（中国医学科学院药物研究所）；高速台式冷冻离心机（TGL-16M，Beckman美国）；荧光分光光度计RF-5301PC（日本，岛津公司）；SD大鼠♀，体重200～250g［兰州大学实验动物中心，许可证号：SCXK（甘）2005-0007］.

1.2 方法

1.2.1 动物模型建立与给药

健康♀性SD大鼠24只，同条件饲养，喂食普通固体饲料，自由饮水 .随机分正常组、模型组、HPLE＋美沙酮处理组、美沙酮处理组，每组6只 .除正常组大鼠皮下注射生理盐水外，其余大鼠按体重第1天剂量1mg／kg海洛因皮下注射，一天总剂量平分两次注射（下同）.

第2天之后，每天递增1mg／kg，直至每天剂量达到20mg／kg，持续维持该剂量10d，共计处理30 d［13］.建模后根据替代递减原则，给予HPLE＋美沙酮处理组、美沙酮处理组大鼠进行脱毒治疗.1～10 d、11～20d、21～30d美沙酮灌胃剂量依次为10、5、2.5mg／kg，HPLE＋美沙酮处理组同时灌胃150 mg／kg HPLE［10］，正常组和模型组每天灌胃等量生理盐水.

1.2.2 行为学观察

给药后每天定时观察记录大鼠跳跃、站立、扭体、齿颤和上睑下垂等行为变化，并进行避暗被动回避实验［8］（实验箱由明暗两室组成，隔板下部有一通道供大鼠出入；暗室铁栅与电击仪相连，如大鼠进入暗室则遭电击）.训练时，将大鼠头背向洞口放入明室中适应3min，然后通电同时将隔板抽出，观察5 min，记录大鼠第一次钻入暗室的时间（潜伏期）及错误次数.24h后测试，不插隔板并通电5min，观察大鼠第一次钻入暗室的时间（潜伏期）及错误次数.

1.2.3 脑单胺递质的测定

迅速取出全脑，吸净血液、除去脑膜、精确称重后，入酸性正丁醇溶液中匀浆，3 500r／min离心10 min，收取上清液 .用荧光分光光度法检测NE、DA、5-HT、5-HIAA.1.2.4 数据处理

2 结果

2.1 海洛因依赖大鼠行为的变化

与正常组相比，海洛因依赖大鼠模型组跳跃、站立等行为指标值显著升高，潜伏期显著缩短、错误次数增加（P＜0.01）.治疗后，与模型对照组相比，HPLE＋美沙酮组和美沙酮组大鼠跳跃、站立、扭体等次数均明显下降，潜伏期延长、错误次数明显减少（P＜0.05，P＜0.01）.HPLE＋美沙酮组大鼠各项行为指标值已接近于正常组值（P＞0.05，表1、表2），提示HPLE＋美沙酮组改善戒断症状比美沙酮组明显.

表1 海洛因依赖大鼠行为的变化（±s）

表1 海洛因依赖大鼠行为的变化（±s）

注：与正常组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与模型组比较，cP＜0.05，dP＜0.01.

1±0.20模型组 6.98±1.22b 12.14±2.22b 8.69±2.37b 16.60±3.27b 6.87±1.35b HPLE＋美沙酮组 0.49±0.14d 5.71±1.03d 0.34±0.08d 5.81±2.61d 1.90±0.18d美沙酮组 1.93±0.67ac 6.67±2.41ad 2.98±1.06ad 7.58±1.34ad 5.45±1.15组别 跳跃 站立 扭体 齿颤 上睑下垂正常组 0.46±0.13 5.12±1.17 0.00±0.00 5.26±1.24 0.7 bc

表2 海洛因依赖大鼠避暗实验结果（±s）

表2 海洛因依赖大鼠避暗实验结果（±s）

注：与正常组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与模型组比较，cP＜0.05，dP＜0.01.

.12模型组 296.88±92.75b 4.02±1.11b 206.33±62.05b 3.66±1.04b HPLE＋美沙酮组 233.47±71.34d 1.55±0.66d 160.22±55.40d 0.63±0.13d美沙酮组 260.01±69.37ac 2.72±0.74ad 180.80±49.51ac 1.87±0.86错误次数正常组 226.11±88.87 1.27±0.82 155.45±57.14 0.57±0组别 训练期 测试期潜伏期（s）错误次数 潜伏期（s）ad

2.2 海洛因依赖大鼠脑单胺递质的变化

与正常组相比，模型组大鼠脑NE、DA、5-HT、5-HIAA显著升高（P＜0.01），经治疗后，与模型对照组相比，HPLE＋美沙酮组和美沙酮组大鼠脑NE、DA、5-HT、5-HIAA明显下降（P＜0.05，P＜0.01），尤其是HPLE＋美沙酮组大鼠脑NE、DA、5-HT、5-HIAA降至正常或接近正常水平（P＞0.05，P＜0.05，表3）.

表3 海洛因依赖大鼠脑NE、DA、5-HT、5-HIAA的变化（±s）

表3 海洛因依赖大鼠脑NE、DA、5-HT、5-HIAA的变化（±s）

注：与正常组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与模型组比较，cP＜0.05，dP＜0.01.

.61±45.25模型组 616.74±79.53b 1 165.27±216.14b 748.58±81.21b 566.55±39.16b HPLE＋美沙酮组 471.12±67.76d 616.08±102.37ad 537.44±69.07ad 381.99±27.38d美沙酮组 515.84±58.15ac 658.89±121.22ad 576.87±78.14ad 405.48±38.49 NE DA 5-HT 5-HIAA正常组 465.01±65.37 532.44±77.22 445.35±50.02 365组别c

3 讨论

海洛因为阿片半合成品，进入体内水解为吗啡，会使依赖者各组织器官造成不同程度的损害，尤其对脑的损害最为严重 .美沙酮是合成的麻醉性药物，能完全替代海洛因而控制戒断症状，但是，其本身也有一定的成瘾性.在递减撤药的过程中，患者的心理依赖和恐惧感严重，出现恶心、呕吐、腹泻、便秘、肌肉关节疼痛、失眠等戒断症状［14］.这既是导致脱毒者复吸的原因之一，也是当今亟待解决的治疗难点.

一般认为，正常生理状态下机体中的内源性阿片样多肽作用于阿片受体，通过多种信号传导系统调节NE能系统、DA能系统、5-HT能系统、胆碱能系统、组胺系统及离子通道等系统的正常功能，以保持内环境恒定 .当从外部摄入大量的外源性阿片类物质时，外来的阿片类物质与内源性阿片肽竞争阿片受体并与之结合，关闭Ca2＋通道，开启K＋通道，增加K＋通透性，使蓝斑核等神经核团发生抑制 .因此，阿片类物质依赖时，内源性阿片样肽的合成降低，降解增加，其数量和功能都比成瘾前低 .当机体处于戒断状态时，阿片类物质对NE能系统神经元的抑制作用降低，蓝斑核（脑内最大的NE能神经核）等部位突然活跃、放电增加，使得NE、DA、5-HT等释放增加，促使躯体戒断症状发生 .阿片类物质在中枢神经系统中可直接或间接兴奋5-HT神经元和DA能神经元，分别促进5-HT和DA合成［4］.

在本实验中，观察了大鼠行为的改变，并用荧光分光光度法观察了HPLE联合美沙酮对海洛因依赖大鼠脑单胺类递质含量的变化 .结构显示：模型组大鼠跳跃、站立、扭体等次数显著高于正常组，潜伏期显著缩短、错误次数增加，脑NE、DA、5-HT及其代谢物5-HIAA（5-HIAA可反映组织中5-HT合成、代谢的多寡）显著升高，经HPLE和美沙酮处理后则可以逆转上述指标的变化，而且HPLE联合美沙酮的脱毒效果比单独使用美沙酮的效果更明显 .其可能机制是：一方面，美沙酮是强效持久的受体激动剂，可与中枢的阿片受体相结合，从而缓解戒断症状或防止戒断症状出现 .另一方面，HPLE中含有金丝桃素、黄酮类、原花青素和鞣质等大量的活性成分，这些成分都具有增强机体抗氧化能力，清除自由基，抗菌、抗炎、抗肿瘤，保护细胞、DNA、脂多糖等不受损伤，从而维持机体良好的生理功能状态的作用［7～12］.或是通过抑制5-HT、NE、DA及谷氨酸的重摄取［15］，从而能够升高中枢神经系统中单胺类神经递质的浓度，改善大鼠的行为特征 .因此，HPLE联合美沙酮进行脱毒治疗，能改善海洛因导致的行为学的改变，使NE、DA、5-HT能等神经元功能恢复协调，但有没有其他可能的机理存在还有待进一步研究.

综上所述，在采用美沙酮替代递减脱毒治疗的同时辅以HPLE治疗，能起到相辅相成的作用，有利于改善海洛因患者戒断症状，促进机体康复.

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