生存素在慢性肝病患者外周血中的表达

申建刚，王红芳，张 平，张定国

1.深圳市龙华新区人民医院消化内科，广东 深圳 518000;2.深圳市南山区西丽人民医院内科;3.深圳市人民医院消化内科

作为凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins，IAPs)家族的新成员，生存素(survivin)是迄今为止发现的作用最强的凋亡抑制蛋白之一，在细胞增殖、凋亡的平衡中起到重要的调控作用。研究发现，多种相关基因、蛋白、生长因子等通过促进肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)增殖可引起或加重肝纤维化的发生，在活化的HSC中生存素表达明显增高。通过检测生存素在慢性肝病中的表达，对发现肝硬化、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，了解肝炎、肝纤维化程度，判断病情、预测预后等可能具有重要临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取深圳市南山区西丽人民医院健康体检的人群30名，作为对正常对照组，既往体健。病例资料来自深圳市人民医院、深圳市南山区西丽人民医院2010年9月－2012年10月住院患者83例，其中慢性乙型病毒性肝炎30例，男19例，女11例，平均年龄(33.7±4.3)岁;乙肝肝硬化患者30例，均为失代偿期，男21 例，女9 例，平均年龄(41.5 ±4.1)岁;原发性肝癌患者23例，男13例，女10例，平均年龄(46.2±3.8)岁。83例患者均根据病史、症状和体征、生化学、影像学及组织学等确诊且诊断符合2000年第10次全国传染病与寄生虫病学和肝病学术会议修订标准、2009年PLC规范化诊治的专家共识，排除其他系统原发恶性肿瘤和其他系统重大疾病。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集与保存:留取晨起空腹外周血标本3 ml，离心后血清送－80℃储存。

1.2.2 检测方法:人生存素试剂盒为博世德生物科技有限公司产品，采用ELISA检查方法，具体操作按照说明书。每份标本重复检测2次，取平均值。

1.3 统计学处理 应用SPSS 19.0软件包处理数据。计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用q检验;建立ROC曲线分析外周血生存素对原发性肝癌的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清生存素检测结果 结果显示，乙肝肝硬化组、慢性乙型肝炎组和正常对照组外周血生存素浓度分别为(70.58 ± 9.78)ng/L、(67.90 ± 9.14)ng/L、(65.07 ± 7.58)ng/L，原发性肝癌组为(83.70 ±14.45)ng/L。慢性乙型肝炎组与正常对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，乙肝肝硬化组与正常对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，乙肝肝硬化组与慢性乙型肝炎组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，原发性肝癌组外周血生存素浓度明显高于乙肝肝硬化组、慢性乙型肝炎组和正常对照组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)。

2.2 ROC曲线 根据正常对照组、慢性乙型肝炎组、乙肝肝硬化组及原发性肝癌组外周血生存素浓度绘制ROC曲线，结果显示生存素在原发性肝癌组ROC曲线下面积为0.82(P＜0.01，见图1);生存素在乙肝肝硬化组ROC曲线下面积为0.62(P＜0.01)，生存素在慢性乙型肝炎组ROC曲线下面积小于0.5。在ROC曲线下原发性肝癌的临床诊断临界点是77.29 ng/L，在23例原发性肝癌患者中，超过该临界点的患者为16例，阳性率69.57%，而乙肝肝硬化组超过该临界点的患者7例，阳性率为23.33%(见图1～2)。

图1 外周血生存素浓度诊断原发性肝癌的ROC曲线;图2 外周血生存素浓度诊断乙肝肝硬化的ROC曲线Fig1 The ROC curve for surviving to diagnose PLC;Fig2 The ROC curve for surviving to diagnose hepatitis B associated liver cirrhosis

3 讨论

近年来，生存素在肿瘤领域的研究一直是热点。生存素几乎在所有常见恶性肿瘤组织中高表达，如肝细胞癌、乳腺癌、前列腺癌、霍奇金病等，所以有望成为预测肿瘤发生、发展的一个新的肿瘤标志物[1];生存素具有调节细胞增殖分裂和强大的抗凋亡功能，成为抗肿瘤治疗的一个新的理想靶点[2]。但生存素不是一种肿瘤特异性分子，它也表达于正常人体组织，调节正常细胞的功能，特别是血液和免疫系统，比如在肝脏缺血时生存素表达下降，在肝脏再生时生存素表达增强[3]。

研究发现生存素可在人正常肝组织和肝硬化组织中表达[4]，生存素在肝硬化组织中的表达与肝病的严重程度可能相关。关于生存素在肝硬化组织中的阳性率，研究结果相差巨大[5]，高者达 85.1%，低者仅为7.9%，其准确阳性率有待进一步研究。由于生存素在原发性肝癌组织中的阳性率较高，有人建议把生存素作为原发性肝癌的一个肿瘤标志物用于临床诊断。但在慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化患者外周血中生存素的表达尚无研究，且在原发性肝癌外周血中检测生存素表达的研究也较少。

本研究显示，生存素可在正常人、慢性乙型肝炎患者、乙肝肝硬化患者外周血中表达，正常对照组与慢性乙型肝炎组间差异无统计学意义，慢性乙型肝炎组与乙肝肝硬化组比较差异无统计学意义，但乙肝肝硬化组生存素浓度略高于慢性乙型肝炎组和正常对照组。生存素在原发性肝癌外周血中浓度较其他3组明显升高，结合ROC曲线，考虑生存素在诊断原发性肝癌中有一定的临床价值，但在慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化的诊断中临床价值较低，对病情的判断有一定价值。

Stefano等[6]研究发现，在非酒精性脂肪性肝病中，生存素局限表达于细胞质中，而且随着肝病逐渐向肝硬化、肝癌进展，其表达逐渐减弱，这与其他原因引起的肝硬化、肝癌中生存素表达明显增高是不同的[5]。本研究证实，生存素在正常人、慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化及原发性肝癌患者外周血中表达，随着肝病严重程度的发展，生存素表达逐渐升高，原发性肝癌患者中最高，与非酒精性脂肪性肝病发展中生存素的表达趋势不同。

国内徐锋等[7]检测80例肝癌患者血清生存素浓度，有50例(62.5%)呈阳性，而正常组均为阴性，58例肝癌患者血清AFP阳性，阳性率为72.5%，两者联合可使原发性肝癌患者的检出率达到90.0%，从而使AFP阴性的肝细胞癌检出率增加。本研究发现原发性肝癌中血清生存素阳性率为69.57%，绘制ROC曲线，曲线下面积为0.82，诊断准确性为中等，提示外周血生存素浓度对于原发性肝癌诊断具有一定价值，此与李剑锋等[8]研究一致。由于外周血标本较组织标本更易获得，因此以外周血作为检测标本更加方便快捷，成本较低，若能联合甲胎蛋白等肿瘤标志物，临床意义更为明显。

总之，乙肝肝硬化、原发性肝癌患者中外周血生存素水平升高，其可能在慢性肝病发生、发展中起重要作用，联合甲胎蛋白等肿瘤标志物可能对指导临床早期诊断及治疗原发性肝癌具有重要价值。

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