河南农村肥胖成年人酪酪肽基因rs2880416位点多态性分析*

王 娟，卫 红，赵景志，李琳琳，尹 磊，张功员#，刘卫刚，暴 磊

1)郑州大学公共卫生学院流行病学教研室 郑州 450001 2)河南司法警官职业学院法医学教研室 郑州 450001 3)河南省军区直属医院体检中心 郑州 450003 4)河北工程大学附属医院统计室邯郸 056002

肥胖是一种由多因素引起的慢性代谢性疾病，已成为全球性的公共卫生问题[1-2]。人群中肥胖患病率较高[3-5]，并且常与高血压、糖尿病、高脂血症等疾病危险因子在同一个体中聚集，导致心脑血管疾病的发生或加重。近年来，遗传因素在肥胖发病机制中的作用备受关注。研究[6-8]发现食欲调节激素酪酪肽(peptide YY，PYY)与肥胖发生密切相关，PYY可通过与其受体结合，抑制促进食欲的神经元神经肽Y的分泌，从而抑制食欲，降低食物摄入，影响肥胖的发生发展。目前，关于PYY及其受体基因多态性与肥胖关系的研究在国外仅有个别报道[9-11]。在基于病例对照试验原理的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)与疾病关联的研究中，SNP位点的选择主要有参考文献法和标签SNP法，标签SNP法用于较新的基因，并与其他基因存在较好的连锁不平衡，具有提高工作效率的优点[12]。作者采用标签SNP法，通过人类基因组计划获取中国人群PYY基因的SNP信息，并采用Haploview 4.2软件按照基因频率大于0.10，r2大于0.8的条件选择了rs2880416位点。为了解我国农村成年人肥胖与PYY基因rs2880416位点多态性的相关性，作者进行了以下研究。

1 对象与方法

1.1 研究对象 根据《中国成人超重和肥胖症预防控制指南(试行)》制定的超重、肥胖及腹型肥胖标准[13]，体重指数(BMI)为 18.5 ～ kg/m2为正常，24.0～kg/m2为超重，≥28 kg/m2为肥胖。抽取河南省某农村地区18岁以上符合条件的410名肥胖病例，同时选取生活在同一地区按性别、年龄匹配的非肥胖者410人作对照。

1.2 问卷调查和体格检查 自行设计调查问卷，在研究对象知情同意的情况下，由统一培训的调查员入户调查并填写调查表。调查内容包括年龄、性别、文化程度、职业、家庭月人均收入、婚姻状况、体育锻炼等情况。体育锻炼强度分级:重度(包括登山、负重跑或快跑、骑快车等剧烈运动)，中度(包括慢跑、秧歌、跳舞、健身操、游泳、网球等运动)，轻度(包括散步、气功、伸展运动等)，无(包括看电视、看书、吃饭等)。体格检查包括测量身高、体重等，计算BMI、腰围(WC)和腰围身高比(WHTR)。

1.3 血液生化指标测定 由统一人员抽取每例研究对象10 mL血液，其中5 mL抗凝血用于提取人白细胞基因组DNA，－80℃分装保存;另外5 mL用于生化指标的测定，包括空腹血糖(FPG)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。

1.4 PYY基因rs2880416位点多态性检测 取1.5 mL EDTA-K2抗凝血液，采用血液DNA小量提取试剂盒(上海莱枫生物科技有限公司)提取DNA，进行PCR。采用 Primer 5.0软件设计 PCR引物。rs2880416位点上游引物序列为5'-GAGGAGAAG GAGCAGAAGGA-3'，下游为 5'-CGTTTTACTTTGAAT GACTACTTGC-3'，产物大小354 bp，引物由金唯智生物科技(北京)有限公司合成。PCR反应体系15 μL，主要包括基因组 DNA 1.0 μL，上下游引物各0.25 μL，2 × Taq PCR PlusMaster Mix 7.5 μL，加离子水6 μL。PCR反应条件:94℃预变性5 min;94℃变性30 s，60 ℃退火40 s，72 ℃延伸 30 s，30 个循环;72℃延伸8 min;产物于4℃保存。PCR产物经常规限制性内切酶FspBI(Fermentas公司)酶切，酶切产物经40 g/L琼脂糖凝胶电泳，判定结果。酶切后产生135和219 bp片段者为GG纯合型，产生135、219、61和158 bp 4条片段者为 CG杂合型，产生135、61和158 bp 3条片段者为CC纯合型。

1.5 统计学处理 采用SAS 9.1进行数据处理与分析。肥胖和非肥胖组各指标的比较采用两独立样本的t检验或 χ2检验;采用 Haploview软件进行Hardy-Weinberg平衡性检验，两组 PYY基因rs2880416位点基因型频率和等位基因频率的比较采用χ2检验;应用logistic回归模型对混杂因素进行调整后，分析不同突变模型下rs2880416位点多态性与肥胖的关系;检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 研究对象的基本特征 见表1。

表1 两组一般资料的比较

续表1

2.2 PYY基因rs2880416位点多态性分析 肥胖和非肥胖组PYY基因rs2880416位点基因型频率分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡(χ2=1.626、4.017，P=0.444、0.132)，提示样本具有一定的人群代表性。两组等位基因和基因型频率分布差异均有统计学意义(表2)，肥胖组C等位基因频率高于非肥胖组(P ＜0.001)。

2.3 PYY基因rs2880416位点多态性与河南农村成年人肥胖发病的关系 以体育锻炼为调整因素，以肥胖为因变量(0=非肥胖，1=肥胖)，以频率较低的等位基因C为突变基因，分别采用显性模型、隐性模型及相加模型[14]对rs2880416位点多态性与肥胖的关系进行logistic回归分析，结果见表3。从表3可以看出，无论哪种模型条件下，等位基因C均与河南农村成年人肥胖的发病有关。

2.4 肥胖组不同基因型携带者肥胖临床特征的比较 肥胖组中rs2880416位点不同基因型携带者BMI、WC、WHTR的差异均无统计学意义，见表4。

表2 两组PYY基因rs2880416位点基因型频率和等位基因频率分布的比较

表3 rs2880416位点基因型与肥胖的关联性分析

表4 肥胖组不同基因型携带者肥胖临床特征的比较

3 讨论

多项研究表明，消化道远端黏膜L细胞可分泌食欲调节激素PYY，PYY可调节食物摄入，与肥胖关系密切。Ma等[15]对83名极度肥胖的Pima印第安人进行基因测序，共选定14个SNP位点，并通过病例对照分析发现PYY及其受体Y2R基因的多态性均与肥胖显著相关。作者选取了PPY基因rs2880416位点，探讨了该位点与河南农村成年人肥胖易感性的关系，目前，国内外对该位点与肥胖关系的研究较少。

此次研究对象均为河南省某地区18岁以上的农村成年人，按照BMI分成肥胖组与非肥胖组，一般资料分析结果显示，肥胖组BMI、WTHR、血糖、TC、TG等指标均高于非肥胖组，而HDL-C低于非肥胖组。总研究人群中PYY基因rs2880416位点表现出3种基因型，GG、CG和CC;肥胖和非肥胖组基因型频率和等位基因频率分布差异均有统计学意义，肥胖组C等位基因频率为34.3%，显著高于非肥胖组的18.4%，提示等位基因C可能为河南省农村成年人肥胖的危险因素。作者进一步采用logistic回归分析法对PYY基因rs2880416位点多态性与肥胖的关系进行了分析，在调整体育锻炼情况的基础上，在显性模型、隐性模型和相加模型中，C等位基因均增加了河南省农村成年人肥胖的患病风险。该研究中，肥胖组不同基因型携带者BMI、WC、WHTR的差异均无统计学意义，这可能与样本量不大有关。

综上所述，该研究结果提示，PYY基因rs2880416位点C等位基因可能是河南省农村成年人肥胖发生的危险因素。由于样本含量的局限性，仍需对较大样本及不同人群进行研究，对该推论加以验证。事实上肥胖的发生是由多种基因共同作用所致。相关研究[10]表明，机体通过下丘脑的神经肽和黑皮质素两大系统使得Y2R受体发挥重要的生理学作用，维持机体的代谢平衡;同时环境因素也起着至关重要的作用。因此，从多因素多角度进行分析能够更全面地解释肥胖的发生机制，为制定肥胖防治措施提供科学依据。

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