醋氯芬酸对骨关节炎软骨细胞增殖和基质代谢的影响

袁霞，柴克霞，秦雅婧，杨洁，胡月正

（1.青海大学附属医院血液风湿科，青海 西宁 810001；2.温州医学院第二医院骨科，浙江 温州 325027）

醋氯芬酸对骨关节炎软骨细胞增殖和基质代谢的影响

袁霞1，柴克霞1，秦雅婧1，杨洁1，胡月正2

（1.青海大学附属医院血液风湿科，青海 西宁 810001；2.温州医学院第二医院骨科，浙江 温州 325027）

目的探讨醋氯芬酸对骨关节炎软骨细胞增殖和基质代谢的影响。方法选择2011年9月～2013年9月于青海大学附属医院就诊的65例骨关节炎患者，根据随机分组原则分成观察组（n＝35），采用醋氯芬酸治疗；对照组（n＝30），采用布洛芬治疗。比较2组患者治疗后的疗效差异，比较观察组患者与对照组患者的人关节软骨细胞的5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine，BrdU）阳性率、蛋白多糖（proteoglycan，PG）与Ⅱ型胶原含量。结果观察组和治疗组患者治疗有效率分别为74.29%、73.33%，组间比较差异无统计学意义；观察组患者关节活动痛、关节压痛、15米行走时间、日常活动能力与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组不良反应发生率显著低于对照组（P＜0.05）；2组BrdU阳性率之间的比较差异无统计学意义，观察组Ⅱ型胶原含量显著高于对照组（P＜0.05），观察组PG含量显著低于对照组（P＜0.05）。结论醋氯芬酸治疗骨关节炎疗效佳，不良反应发生率低，醋氯芬酸通过促进Ⅱ型胶原分泌和减少PG生成缓解患者的临床症状。

醋氯芬酸；骨关节炎；软骨细胞；增殖；代谢

1 资料与方法

1.1 临床资料 随机选取2011年9月至2013年9月于青海大学附属医院血液风湿科就诊的65例骨关节炎患者，纳入标准：符合骨关节炎的诊断标准［3］，排除感染、发热、血液疾病、恶性肿瘤、合并类风湿性关节炎及其他关节炎症性疾病患者。经伦理委员会批准，并与患者签署知情同意书。随机分为2组，观察组35例，男12例，女23例，年龄25～77岁，平均（46.87±12.04）岁，病程10～21月，平均病程（11.89±5.14）月；对照组30例，男9例，女21例，年龄27～75岁，平均（47.01±10.72）岁，病程12～20月，平均病程（12.04±6.07）月；2组患者在性别、年龄、病程等一般情况上的差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 材料与方法 全部患者均停用非甾体类抗炎药2周后进行药物治疗，观察组患者给予醋氯芬酸肠溶胶囊（广州白云山光华制药公司，国药准字 H20050479）100mg，2次／d，口服，早晚餐后服用；对照组患者给予布洛芬缓释胶囊（吉林力胜制药公司，国药准字 H22026083）300mg，2次／d，口服，早晚餐后服用。2组患者服药疗程均为3个月。治疗前即取观察组患者与对照组患者的第1代骨关节炎软骨细胞分别进行培养，观察组给予醋氯芬酸，对照组给予布洛芬，药物溶于二甲基亚砜中，充分摇匀后配成溶液，探讨不同药物对细胞增殖与代谢的影响。主要选用的实验仪器与试剂：培养基、Ⅱ型胶原酶、Ⅱ型胶原抗体和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine，BrdU）购买自圣克鲁斯生物公司，ELISA试剂盒购自深圳新博盛生物公司。

1.3 观察指标

1.3.1 临床指标：记录患者治疗后膝关节活动痛（正常0分，上下楼有症状、屈伸无影响为2分，上下楼有症状、下蹲疼痛为4分，行走疼痛为6分）、关节压痛指数（正常0分，重压时疼痛为2分，重度压力疼痛为4分，轻度压痛为6分）、15米行走时间、日常活动能力评分（不受限为0分，轻度受限为2分，中度受限为4分，重度受限为6分）。临床疗效评价根据美国膝关节协会评分［4］：患者症状、体征和红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation tate，ESR）的改善程度＜30%提示治疗无效，改善程度30%～49%提示好转，改善程度50%～74%提示有效，改善程度≥75%提示显效。安全性评价：记录药物不良反应情况和发生率，定期进行肝肾功能检查。

1.3.2 实验室指标：采用BrdU免疫荧光法检测关节软骨组织的软骨细胞增殖能力，在荧光显微镜下观察软骨细胞的细胞核，细胞核呈绿色荧光的为BrdU阳性，记录5个高倍视野（×100）下BrdU阳性细胞数与细胞总数，BrdU阳性率＝BrdU阳性细胞数／细胞总数×100%。取第3代软骨细胞，采用ELISA方法检测软骨细胞的蛋白多糖（proteoglycan，PG）与Ⅱ型胶原的含量。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件进行分析，正态计量资料用“±s”表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患者临床疗效的比较 观察组患者治疗疗效情况：5例好转，15例有效，6例显效，总有效人数为26例，总有效率74.29%；观察组患者治疗疗效情况：4例好转，16例有效，2例显效，总有效人数为22例，总有效率73.33%，2组患者治疗有效率比较差异无统计学意义。观察组4例患者出现恶心呕吐、腹痛等不良反应，不良反应发生率为11.43%，对照组8例患者出现不良反应，不良反应发生率为26.67%，2组不良反应情况比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 2组患者临床指标比较 观察组患者关节活动痛评分、关节压痛评分、15米行走时间、日常活动能力评分与对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.05，见表1）。

表1 2组患者临床指标比较Tab.1 Comparison of clinical indicator in two groups

2.3 2组BrdU阳性率、PG、Ⅱ型胶原含量之间的比较 荧光显微镜下见胞核呈绿色荧光的细胞为BrdU阳性细胞（见图1），统计患者软骨细胞BrdU阳性率，2组BrdU阳性率之间的比较差异无统计学意义，观察组Ⅱ型胶原含量显著高于对照组，差异具有统计学意义，对照组PG含量显著高于观察组，差异具有统计学意义（P＜0.05，见表2）。

图1 荧光显微镜下的软骨细胞BrdU阳性标记图（×100）Fig.1 Fluorescencemicroscope cartilage cells of BrdU positive（×100）

表2 2组BrdU阳性率、PG、Ⅱ型胶原含量之间的比较Tab.2 Comparison of BrdU positive rate，PG and collagen typeⅡcontent in two groups

3 讨论

本临床研究表明，醋氯芬酸治疗骨关节炎的疗效较好，不良反应显著低于布洛芬治疗患者（P＜0.05），是一种有效安全的治疗药物。醋氯芬酸可增强骨关节炎患者软骨细胞的细胞增殖能力与促进对Ⅱ型胶原的分泌，缓解患者关节疼痛，增加治疗总有效率，同对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。布洛芬通过增强患者软骨细胞增殖能力与促进PG分泌的途径缓解患者的关节疼痛，达到治疗的目的。醋氯芬酸通过促进Ⅱ型胶原的分泌抑制关节软骨的退化，具有缓解关节疼痛与修复关节软骨的作用［5-7］。但是，自身抗原产生的免疫反应对细胞增殖与基质代谢的影响、免疫反应在醋氯芬酸对软骨细胞增殖与基质代谢影响中的作用有待进一步的临床研究。陈海南等［8-11］研究表明：原发性骨关节炎不仅与职业性使用过度、肥胖、高龄等因素相关，更与自身抗原产生的免疫性反应相关，醋氯芬酸在治疗骨关节炎方面具有显著的疗效与不良反应低等优点，与本文结论类似。骨关节炎是一种复杂疾病，非甾体类抗炎药可缓解患者的症状与体征，但是，醋氯芬酸对软骨细胞基质代谢的影响需要综合多种因素进行评价。黄瑛等［12-15］研究表明：自身抗原产生免疫反应对自身组织损伤也表现在抑制软骨细胞增殖及基质代谢方面，主要病理表现为：T细胞活化异常后分化不同功能亚群并产生大量的细胞炎症因子，造成关节滑膜炎症性反应，软骨骨质破坏，影响了关节软骨细胞的基质代谢。因此，骨关节炎的免疫反应是一个复杂的过程，醋氯芬酸是否对软骨细胞的增殖及基质代谢产生影响有待进一步的临床探讨。

［1］ 李路玲，郑毅.非甾体抗炎药对人骨关节炎软骨细胞生长代谢的影响［J］.天津医药，2013，41（9）：860-864.

［2］ 欧云生，安洪，谭超，等.非甾体抗炎药对大鼠骨关节炎关节软骨细胞 IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的影响［J］.重庆医科大学学报，2013，38（3）：260-265.

［3］ 冀全博，张强，王岩带.小板凝血酶敏感蛋白结构域的解聚素与金属蛋白酶4、5在骨关节炎中作用的研究进展［J］.中国修复重建外科杂志，2013，27（9）：1080-1084.

［4］ Insall JN，Dorr LD，Scott RD，et al.Rationale of the Knee Society clinical rating system［J］.Clin Orthop Relat Res，1989（248）：13-14.

［5］ 曾玉，吴新忠.吲哚胺2，3-双加氧酶与自身免疫性疾病［J］.实用医学杂志，2013，29（19）：3257-3259.

［6］ 朱芳晓，周润华，石宇红，等.小白菊内酯对兔膝骨关节炎血清IL-1β及 TNF—α的影响［J］.中国中西医结合杂志，2013，33（10）：1382-1384.

［7］ 段成茜，高作宁.醋氯芬酸在nano-TiO2／PF6修饰碳糊电极上的电催化氧化及电分析方法［J］.药物分析杂志，2012，32（2）：365-369.

［8］ 陈海南，董启榕，姜伟，等.骨关节炎早期软骨下骨三维结构变化及二磷酸盐的干预效应［J］.中华创伤杂志，2013，29（8）：790-795.

［9］ Driban JB，Barr AE，Amin M，et al.Joint inflammation and early degeneration induced by high-force reaching are attenuated by ibuprofen in an animal model of work-related musculoskeletal disorder［J］.JBiomed Biotechnol，2011，69：12-14.

［10］ 林定齐.非甾体类抗炎药及解热镇痛药用药情况分析［J］.当代医学，2012，18（2）：132-133.

［11］ 郭钰琪，齐冬梅，郝钰.三七皂苷R1调节炎性T细胞亚群保护血管内皮的实验研究［J］.中国药理学通报，2012，28（2）：240-244.

［12］ 黄瑛，林志，李波，等.药物诱导性自身免疫性疾病研究进展［J］.中国新药杂志，2013，22（19）：2244-2249.

［13］ 杜国辉，屈爱存，陈建英.透明质酸对关节软骨蛋白聚糖aggrecan的影响［J］.中国生化药物杂志，2011，32（2）：125-127.

［14］ Prasadam I，Crawford R，Xiao Y.Aggravation of ADAMTS and matrix metalloproteinase production and role of ERK1／2 pathway in the interaction of osteoarthritic subchondral bone osteoblasts and articular cartilage chondrocytes--possible pathogenic role in osteoarthritis［J］.J Rheumatol，2012，39（3）：621-634.

［15］ Fosang AJ，Beier F.Emerging Frontiers in cartilage and chondrocyte biologe［J］.Best Pract Res Clin Rheumatol，2011，25（6）：751-766.

（编校：李璐璐）

The influence of aceclofenac to cartilage cell proliferation and substratemetabolism in osteoarthritis

YUAN Xia1，CAIKe-xia1，QIN Ya-jing1，YANG Jie1，HU Yue-zheng2

（1.Department of Rheumatism and Hematology，Affiliated Hospital of Qinghai University，Xining 810001，China；2.Department of Orthopedics，The Second Hospital ofWenzhou Medical College，Wenzhou 325027，China）

ObjectiveTo invesgate the influence of aceclofenac to cartilage cell proliferation and substratemetabolism in osteoarthritis.MethodsSelect65 cases of patientswith osteoarthritiswhowere treated in Department of Rheumatism and Hematology of Affiliated Hospital of Qinghai University from September 2011 to September 2013.Patients were divided into observation group（n＝35）and control group（n＝30）.The observation group were treated with aceclofenac，while control group were treated with ibuprofen，Compare the efficacy of patients in two group.Compare human articular cartilage cells of5-bromodeoxyuridine（BrdU）positive rate，the content of glycogen protein（PG）and collagen typeⅡ in two groups.ResultsThe effective rate of observation group and control group was 74.29%and 73.33%respectively.There was significant difference between the two groups.Compared with control group，the joints pain，joints tenderness，15 meters walking time，daily activity ability（P＜0.05）.The incidence of adverse reactions of observation group（11.43%）was significantly lower than that of control group（P＜0.05）.The difference of BrdU positive rate in two groups had no statistical significance.Ⅱ type collagen content of observation group was significantly higher than that of control group（P＜0.05）.PG of observation group was significantly lower than that of control group（P＜0.05）.ConclusionThe efficacy of aceclofenac is good and the incidence of adverse reactions is low in treatment of osteoarthritis.Aceclofenac can alleviate clinical symptoms of patients by increasing collagen typeⅡand decreasing PG.

aceclofenac；osteoarthritis；cartilage cells；proliferation；metabolic

R331.1

A

1005－1678（2014）04－0128－03

骨关节炎［1］（ostearthritis，OA）是一种累及关节为主的多系统性自身免疫性疾病，是常见的关节疾患之一，主要病理特征［2-3］是关节软骨细胞凋亡、软骨细胞外基质减少及关节软骨细胞功能异常。非甾体类抗炎药是治疗骨关节炎的常规临床用药，醋氯芬酸是常用的非甾体类抗炎药，且在治疗骨关节炎中具有一定效果。本研究通过对骨关节炎软骨细胞的体外培养，探讨非甾体类抗炎药醋氯芬酸对骨关节炎软骨细胞增殖和基质代谢的影响，现报道如下。

浙江省医药卫生计划（2011KYB052）

袁霞，女，硕士，主治医师，研究方向：风湿免疫病，E-mail：qianghaiyuanxia＠163.com。