香菇多糖对顺铂抑制H e l a宫颈癌细胞增殖作用的影响

阎蓓，邸石，王罡，张婧

(1.武汉市第三医院妇产科，湖北 武汉 430060；2.襄阳市中心医院妇产科，湖北 襄阳 441021)

香菇多糖对顺铂抑制H e l a宫颈癌细胞增殖作用的影响

阎蓓1，邸石1，王罡1，张婧2△

(1.武汉市第三医院妇产科，湖北 武汉 430060；2.襄阳市中心医院妇产科，湖北 襄阳 441021)

目的研究香菇多糖对顺铂抑制Hela宫颈癌细胞增殖的影响。方法根据处理方法将Hela宫颈癌细胞分为LEN组（单用香菇多糖处理）、CIS组（单用顺铂处理）、LEC组（香菇多糖联合顺铂处理）和CON组（未做香菇多糖和顺铂处理），比较其处理前后细胞增殖、细胞周期、PI和凋亡率的差异。结果4组Hela细胞处理前吸光度无明显差异，LEN组和CON组Hela宫颈癌细胞处理后d 1～d 8的吸光度无明显差异，均显著高于CIS组和LEC组Hela细胞（P＜0.05）;CIS组Hela细胞处理后d 1～d 8的吸光度显著高于LEC组（P＜0.05）。处理后CON组和LEN组两组Hela细胞G0/G1期和凋亡率均显著低于CIS组和LEC组（P＜0.05），S期和G2/M期显著高于CIS组和LEC组（P＜0.05）;LEC组Hela细胞G0/G1期和凋亡率均显著高于CIS组（P＜0.05），S期和G2/M期显著低于CIS组（P＜0.05）。结论香菇多糖可显著增强顺铂对Hela细胞增殖的抑制作用。

香菇多糖;顺铂;Hela细胞;宫颈癌;凋亡

香菇多糖是目前临床上广泛应用的免疫增强剂，广泛用于恶性肿瘤的辅助治疗，可显著提高化疗的有效率，有效改善患者的生存时间和生存质量[1-2]。目前对香菇多糖抑制肿瘤的作用机制尚未明确，研究表明，其通过提高T淋巴细胞免疫和细胞毒性T细胞的杀伤作用杀灭肿瘤细胞[3]。基于香菇多糖为免疫增强剂和其抑制肿瘤细胞的作用，可能香菇多糖具有协同增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用[4]。本研究采用香菇多糖联合顺铂作用于宫颈癌Hela细胞，比较细胞增殖和凋亡的差异，探讨香菇多糖增强顺铂抑制肿瘤细胞效应的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料 Hela宫颈癌细胞购于中国典型培养物保藏中心；细胞培养试剂购自Gibco公司；MTT试剂购于碧云天公司；香菇多糖采用南京康海药业有限公司的香菇多糖冻干粉剂；5-FU购于Sigma公司。

1.2 药物处理方法 Hela宫颈癌细胞培养基为10% FBS和90%RPMI-1640，培养条件为：37℃、5%CO2恒温培养箱。香菇多糖冻干粉剂采用PBS配制成2µmol/mL浓度工作液，顺铂用PBS配制成400 ug/mL存储液。根据药物处理方法分为

LEN组单用香菇多糖处理，香菇多糖终浓度0.1µmol/L）、CIS组（单用顺铂处理，顺铂终浓度2 ug/mL）、LEC组（香菇多糖联合顺铂处理，香菇多糖终浓度0.1µmol/L，顺铂终浓度2 ug/mL）和CON组（未做香菇多糖和顺铂处理）。

1.3 细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡检测 取4组细胞培养与培养板，分别加入药物作用24 h后PBS洗涤后继续培养。采用MTT法检测细胞增殖，酶标检测仪上测定波长为490 nm下的吸光值，细胞吸光度=测得值-空白对照孔值。以吸光值为纵坐标，以时间为横坐标，绘制四组细胞增殖曲线。采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡，增殖指数（PI）=（S+G2/M）/（G0/ G1+S+G2/M）。

1.4 统计学方法 采用SPSS 12.0进行数据处理和统计学分析。正态计量资料采用“x±s”表示。2组间均数比较采用t检验；计数资料采用χ2检验。P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组Hela宫颈癌细胞增殖对比 LEN组和CON组Hela宫颈癌细胞处理后d 1～d 8的吸光度均显著高于CIS组和LEC组Hela细胞（P＜0.05）；CIS组Hela细胞处理后d 1～d8的吸光度显著高于LEC组（P＜0.05，见图1)。

图1 4组细胞处理前后吸光度改变Fig.1 Absorbance changes in four groups pre-and post-treatment

2.2 4组Hela宫颈癌细胞凋亡周期和PI对比 CON组和LEN组Hela细胞在G0/G1期、S期、G2/M期、PI和凋亡率均无明显差异，但2组Hela细胞G0/G1期和凋亡率均低于CIS组和LEC组（P＜0.05），S期和G2/M期高于CIS组和LEC组（P＜0.05）；LEC组Hela细胞G0/G1期和凋亡率均高于CIS组（P＜0.05），S期和G2/M期低于CIS组（P＜0.05，见表1）。

表1 4组细胞处理后细胞周期、PI和凋亡率对比（%）Tab.1 Comparison of cell cycle, PI and apoptosis in four groups（%）

3 讨论

顺铂是目前临床上广泛应用的化疗药物，单药或联合其他化疗药物可用于多种肿瘤的治疗。其作用机制为顺铂进入体内后，一个氯原子缓慢被水分子取代，铂与DNA碱基一个位点发生配位，与DNA单链内两点或双链发生交叉联结，抑制癌细胞的DNA复制过程，使之发生细胞凋亡[5-7]。本研究中，LEN组和CON组Hela宫颈癌细胞处理后d 1～d 8的吸光度均显著高于CIS组和LEC组Hela细胞（P＜0.05）；CIS组Hela细胞处理后d 1～d 8的吸光度显著高于LEC组（P＜0.05）。这些数据表明香菇多糖可增强顺铂对Hela细胞的增殖作用。进一步研究发现，CON组和LEN组Hela细胞G0/G1期和凋亡率均低于CIS组和LEC组（均P＜0.05），S期和G2/M期高于CIS组和LEC组（均P＜0.05）；LEC组Hela细胞G0/G1期和凋亡率均高于CIS组(均P＜0.05)，S期和G2/M期低于CIS组（均P＜0.05），这些证据表明香菇多糖可增加顺铂对细胞周期的抑制作用，导致细胞凋亡率增加。

值得困惑的是，本研究中香菇多糖自身并未表现出抑制肿瘤细胞增殖的作用，与未行药物处理的Hela细胞相比，2者的细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡无明显差异，这些数据表明香菇多糖自身不具有抑制肿瘤的作用。目前对香菇多糖增强化疗药物疗效的机制尚未完全明确，有体外细胞实验表明香菇多糖可改善化疗药物耐药现象[7]。目前发现的耐药产物包括MDR 1、MRP1和LRP，其中MDR1为位于细胞膜的一种P-糖蛋白，含有二个ATP结合位点，跨膜区域构成药物通道盒式结构，利用ATP水解功能可将化疗药物泵出胞膜外[8-9]；MRP1属于非P-gp跨膜糖蛋白，可将带负电荷的药物分子逆浓度泵出到细胞外，降低化疗药物在细胞内的浓度，同时可改变细胞内的pH值，抑制化疗药物与靶点的结合，导致化疗药物失去作用[10-11]；LRP可使顺铂无法通过核孔进入细胞核，阻止顺铂与DNA上的碱基结合，此外还可以将进入胞浆的顺铂转运到运输囊泡中，最终通过胞吐的方式转到细胞外，从而抑制顺铂的抑制肿瘤细胞增殖作用[12-13]。在体外细胞实验中，香菇多糖可抑制MDR 1、MRP1和LRP的表达，从而增强化疗药物对肿瘤细胞的杀灭作用[14]。综合这些研究结果，香菇多糖自身并不具有抑制肿瘤细胞增殖的效应，但其可通过改善多药耐药分子的表达提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，从而提高化疗药物的疗效。

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Effect of lentinan on cisplatin’s inhibition effects on cervical cancer Hela cell line

YAN Bei1, DI Shi1, WANG Gang1, ZHANG Jing2△
(1. Department of Obstetrics and Gynecology, The Thind Hospital of Wuhan, Wuhan 430060, China; 2. Department of Obstetrics and Gynecology, Xiangyang City Central Hospital, Xiangyang 441021, China)

ObjectiveTo study the effect of lentinan on cisplatin’s inhibition on cervical cancer Hela cell line。MethodCervical cancer Hela cell line were divided into LEN group (only lentinan treatment), CIS group (only Cisplatin treatment), LEC group (Both Lentinan and Cisplatin treatment) and CON group (no Lentinan and Cisplatin treatment) according to their treatment methods. The differences of cell proliferation, cell cycle, PI and apoptosis were compared。ResultsThe differences of absorbance between LEN group and CON group were not signi fi cant d1-d8 after treatment, but signi fi cant between CIS and LEC group (P＜0.05). The absorbance in LEC group was signi fi cantly lower than in CIS group (P＜0.05). The differences of PI and apoptosis rate in LEC and CIS group were signi fi cant (P＜0.05), but not between LEN and group. The PI in LEC group was lower than in CIS group (P＜0.05), while apoptosis rate was higher (P＜0.05)。ConclusionLentinan could signi fi cantly promote Cisplatin’s inhibition effects on cervical cancer Hela cell line.

lentinan；cisplatin；hela cell line；cervical cancer；apoptosis

R 710.4

A

1005-1678(2014)01-0049-02

阎蓓，女，副主任医师，研究方向：妇科肿瘤疾病诊断与治疗，Email：1745319803@qq.com；张婧，通信作者，女，主治医师，研究方向：妇产科疾病诊断与治疗，Email：mirror 1219@sohu.com。