附子保健品刨附片及炮天雄的急性毒性研究

1.成都中医药大学药学院，四川 成都 610075；2.中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

附子保健品刨附片及炮天雄的急性毒性研究

谢晓芳1,2李梦婷1代良萍1张雪1,2彭成1,2饶朝龙1,2

1.成都中医药大学药学院，四川 成都 610075；2.中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

目的测定灌胃炮天雄和刨附片对小鼠的急性毒性。方法待禁食不禁水12h后，各组24h内一次性给药，其中刨附片、炮天雄组均分别灌胃刨附片水煎液25.2g生药/kg或炮天雄水煎液27.2g生药/kg，正常对照组灌胃蒸馏水，给药体积均为40ml/kg，给药后观察并记录小鼠一般行为活动、体重、饮食及死亡等情况，连续观察14d。结果刨附片组小鼠和炮天雄组小鼠无死亡，一般状态正常，无明显异常行为或变化，体重和摄食量逐日增长，与正常对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论刨附片、炮天雄水煎液灌胃小鼠均无明显急性毒性，最大给药量分别为25.2、27.2g生药/kg，若按附子临床人用量为15g/日算，均大于人用量的100倍。

刨附片；炮天雄；急性毒性

附子为毛茛科植物乌头AconitumcarmichaeliDebx.的子根加工品。自古以来，附子是临床疗效显著而毒副作用大的中药，但由于其良好的温阳功效，在我国陕西、云南、四川等附子产区自古将其用作药膳以补阳散寒[1]。刨附片和炮天雄是采用现代炮制手段制备的附子保健品，煲汤后服用，具有温肾壮阳、祛寒止痛、扶阳补虚的功效，为外贸保健品。然而，目前暂无其安全性的研究报道，因此，本课题研究了其水煎液灌胃小鼠后的急性毒性试验，以初步了解其安全性。

1 材料与方法

1.1 药物 刨附片，炮天雄，均由四川好医生攀西药业有限公司提供。水煎液制备工艺：称取刨附片403 g或炮天雄430 g，用蒸馏水浸泡30 min，按比例分别加入10倍量水，煎煮5 h，将药液倒出；再加入8倍量水，煎煮3 h，收集水煎液，过滤，浓缩至正好通过12号灌胃针。实际试验时，刨附片、炮天雄的浓度分别为0.63、0.68 g生药/mL。

1.2 实验动物 昆明种小鼠，SPF级，体重(20±2)g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，合格证号：SCXK(川)2008-11，检疫后备用。实验环境：成都中医药大学国家中医药管理局中药药理科研三级实验室(TCM-2009-315)。

1.3 实验方法 取19～23g健康昆明种小鼠60只，雌雄各半。适应环境后按体重随机分为正常组、刨附片组、炮天雄组，每组20只，雌雄各半。参照《中医药动物实验方法学》进行试验[2]。禁食不禁水12h后，各组24h内一次性给药，其中刨附片、炮天雄组分别灌胃刨附片水煎液25.2g生药/kg、炮天雄水煎液27.2g生药/kg；正常对照组灌胃去离子水，给药体积40mL/kg。给药后观察并记录小鼠的行为活动、饮食、大便等情况及急性毒性反应和死亡数，连续观察14d。于给药前及给药后第1、3、7、14天称体重，并逐日测定摄食量。试验结束时，处死各组小鼠，解剖观察其内脏器的情况。

2 结果

2.1 对一般状态的影响 连续观察14d，各组小鼠在给药后的30min内活动稍有减少，为一次性大剂量给药所致。随后，刨附片组和炮天雄组小鼠与空白对照组小鼠表现无差异，均发育健康，肌肉丰满，眼睛明亮而灵活、无异常的分泌物，肛周洁净，摄食正常，四肢健壮，自发活动正常，体重逐渐增加。鼻孔未见异常分泌物，未见呼吸困难、呼吸急促、喘息、紫绀、呼吸暂停等。皮肤无水肿或红斑，被毛浓密而有光泽、紧贴其身，正常活动，肌力正常，正常反射、翻正反射存在，运动协调，无痉挛、足尖步态、踏步、忙碌、低伏、肌束震颤等；无抽搐、昏厥、角弓反张等惊厥表现；眼睛无异常分泌物，无缩瞳、散瞳、眼球突出、眼睑下垂、血泪、结膜浑浊、虹膜炎、结膜炎等，角膜反射、对光反射正常，无异常反射；无皮肤发红或苍白，尾、舌、耳、足垫、结膜、阴囊无发红；无体凉、体热、心动过速、心动过缓等；无口周毛潮湿、毛囊竖毛肌收缩等；无呕吐及腹泻，大便正常，不干，无水样便，尿量、尿色正常。

2.2 对体重的影响 刨附片组和炮天雄组雌性小鼠、雄性小鼠体重增长一致，各组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1～表3。

2.3 对摄食量的影响 试验开始后，每日测定各组小鼠摄食量，制备相应曲线；结果可见，刨附片组、炮天雄组的雌性小鼠、雄性小鼠摄食量变化曲线与空白对照组变化趋势一致，无明显异常，表明药物对小鼠的摄食无影响，这与小鼠体重变化一致的结果相符。结果见图1。

表1 炮天雄、刨附片灌胃小鼠急性毒性试验对小鼠体重的影响

表2 炮天雄、刨附片灌胃小鼠急性毒性试验对雌性小鼠体重的影响

表3 炮天雄、刨附片灌胃小鼠急性毒性试验对雄性小鼠体重的影响

3 讨论

附子为传统有毒中药，但由于其良好的临床疗效而应用广泛，且在常年的应用过程中形成了一系列有效的控毒方法[3]。尤其是随着对附子毒性物质基础的研究、毒理学和毒作用机制研究及控毒方法体系的研究，彭成教授提出了“毒性物质基础-毒作用机制-控毒方法体系”的有毒中药安全性评价模式，针对双酯型生物碱是附子的主要毒性成分和双酯型生物碱遇热遇水不稳定的特性，建立了控毒方法体系，使乌头类有毒中药的毒性控制进入到现代方法学的层面[4]。其中，炮制是控制附子毒性的重要方法之一，在不同炮制方法下目前有数十种附子炮制品，其中药用的主要有黑顺片和白附片，新型精制饮片有黑顺片配方颗粒、白附片配方颗粒、淡附片配方颗粒，保健品有炮天雄和刨附片。炮制可有效降低附子毒性，研究团队前期研究表明，附子不同炮制品泥附子、黑顺片、白附片的醇提物灌胃小鼠的LD50分别为22.169、49.853、42.550g生药/kg，毒性表现主要在消化系统、心血管系统和神经系统，可见经炮制后的黑顺片和白附片毒性较泥附子明显降低[5]。炮制减毒的物质基础是通过炮制减少了附子中双酯型生物碱的含量[6]。陕西周至县等地食用附子十分强调久煎[1]，亦是通用此法。

炮天雄、刨附片是现代附子保健品，其在加工工艺中毒性成分被大量水解而丢失；同时，本课题在制备其水煎液时考虑到其食用中久煮的特点，第一次煎煮5h，第二次煎煮3h，使其所含双酯型生物碱大量水解，因此其毒性明显降低，在本试验剂量下，刨附片、炮天雄给予灌胃小鼠最大给药量25.2、27.2g/kg，未引起明显毒性反应和动物死亡，分别相当于附子人用量的100倍以上，表明食用安全。但值得注意的是，为保证食用安全，首先，炮天雄、刨附片在食用中应强调久煮；其次，根据中药“十八反”的认识，不宜与含有半夏、瓜蒌、贝母、白蔹、白及同服；第三，本保健品为温阳之品，素体阴虚或阳亢体质者不适宜。

[1]考玉萍，张化为.大剂量食用附子安全性和有效性研究[J].陕西中医，2013，34(4)：478-480.

[2]彭成.中医药动物实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2008：183.

[3]陈学习，彭成.附子毒性控制的多因互探析[J].中华中医药学刊，2007，25(4)：680-681.

[4]彭成.中药毒理学的构建与内涵[J].中药与临床，2013，4(1)：1-4.

[5]谢晓芳，彭成，易进海，等.附子不同炮制品提取物急性毒性的比较研究[J].中药与临床，2012，3(3)：29-34.

[6]叶强，郭一平，彭成.炮制方法对附子生物碱类成分的影响[J].华西药学杂志，2013，28(3)：275-277.

AcuteToxicityStudyofHealthProductsofAconitiLateralisRadixPaoTianxiongandBaoFupian

XIE Xiao-fang1,2,LI Meng-ting1,DAI Liang-ping1,ZHANG Xue1,2,PENG Cheng1,2,RAO Chao-Long

1.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Sichuan Province,Chengdu 610075,China;2.State Key Laboratory BreedingBase of Systematic Research,Development and Utilization of Chinese Medicine Resources,Sichuan Province, Chengdu 611137,China

objectiveTo observe the acute toxicity of Pao tianxiong (PTX) and Pao fupian(PFP)with administration by gavage.MethodsAfter fasting for 12h,the mice were given different drugs for once in 24h. The doses of PFP and PTX are 25.2g crude drug/kg(bw) and 27.2g crude drug/kg(bw).Mice in the control group was given distilled water.The given volume was 40ml/kg.Then,all the animals were monitored closely for 14 days on their normal behaviors, body weight, food consumption, death et al.ResultsNo death happened in both PTX-treated group and PFP-treated group; meanwhile,the behaviors,body weight and food consumptions in the drug-treated groups had no difference with the controlled group.ConclusionPFP and PTX don’t induce acute toxicities on mice by gavage and the maximum doses are 25.2,27.2g/kg in crude medicinal, which are more than 100 times dose of Aconiti Lateralis Radix on adult human in clinic.

Pao fupian；Pao tianxion；Acute toxicity

R285

A

1007-8517(2014)20-0018-02

2014.07.03)