不同产地金银花主要活性成分的含量比较

广西中医药大学，广西 南宁 530001

不同产地金银花主要活性成分的含量比较

梁爽

广西中医药大学，广西 南宁 530001

目的比较不同产地的金银花中主要活性成分绿原酸及木樨草苷的含量。方法超声波提取供试品，采用高效液相色谱法和化学分析法对5个产地金银花主要活性成分的含量进行测定。结果5个产地金银花中绿原酸含量：湖南>河北>山东>河南>湖北；木樨草苷含量：山东>河南>河北>湖北>湖南。结论不同产地金银花药材中有效成分绿原酸及木樨草苷的含量存在很大差异，本试验为不同生产目的选用不同产地的金银花药材提供了实验依据。

金银花；绿原酸；木樨草苷；HPLC；含量比较

金银花为中国药典2010版一部收载品种[1]，有良好的药用植物资源，又名忍冬花(《新修本草》)、银花(《温病条辨》)、鹭鸶花(《植物名实图考》)、双花(《中药材手册》)。本品为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾[2]。性寒，味甘，归肺、心、胃经，具有清热解毒、凉散风热之功，常用于痈肿疔疮、喉痹丹毒、血热毒盛，为临床常用药。金银花主要成分为绿原酸，木樨草苷，具有抗病毒、抗炎、解热、调节机体免疫力、降血脂等多种药理作用[3-7]，其含量的高低是目前衡量金银花品质优劣的指标之一[8]。本实验建立高效液相色谱法对其中主要活性成分的含量进行测定，对金银花质量研究具有很重要的意义。

1 材料、仪器与试剂

1.1 材料 绿原酸标准品(110763-200212)，木樨草苷对照品(111720-200604)，均由中国药品生物制品检定所提供。山东、河南、河北、湖南、湖北产地的金银花样品来自安徽亳州中药材大市场，经刘汉珍老师鉴定为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾。

1.2 仪器与试剂 KQ-250DE 数控超声波清洗器，由昆山市超声仪器有限公司生产；Waters1525型高效液相色谱仪，由美国Waters公司生产； Waters2487型紫外检测器，由美国Waters公司生产。甲醇，乙醇，冰醋酸，磷酸，乙腈等均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

2.1.1 绿原酸色谱条件与系统适用性试验 流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；检测波长：327nm；流速：0.8～1ml·min-1；进样量：对照品、供试品进样均为20μL；柱温为常温。在此色谱条件下, 理论塔板数不小于2000, 峰形较好。

2.1.2 木樨草苷色谱条件与系统适用性试验 流动相A：甲醇；流动相B： 0.5%冰醋酸；按表1梯度洗脱检测波长：350nm；流速：0.8～1 ml·min-1；进样量：20μl；柱温为常温。在此色谱条件下, 理论塔板数不小于2000, 峰形较好。

表1 梯度洗脱条件

2.2 对照品溶液的制备

2.2.1 绿原酸对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用50%甲醇稀释制成每毫升含0.2mg的溶液即得。

2.2.2 木樨草苷对照品溶液的制备 精密称取木樨草苷对照品5.5mg，置50mL锥型瓶中，加70%乙醇制成每毫升含0.11mg的溶液即得。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 绿原酸供试品溶液的制备 精密称取金银花样品粉末0.5g，置于100mL具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50mL，超声波处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，将溶液放入离心管里，离心10～15min后停止离心，待离心机停止转动后取出，精密量取上清液5ml，置25ml棕色瓶中，加入50%甲醇至刻度定容，摇匀，即得。

2.3.2 木樨草苷供试品溶液的制备 精密称取金银花样品粉末3g，置100ml具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50ml，超声波处理60min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，将溶液放入离心管里，离心10～15min后停止离心，待离心机停止转动后取出，精密量取上清液5ml，置25ml棕色瓶中，加入70%乙醇至刻度定容，摇匀，即得。

2.4 线性关系考察

2.4.1 精密吸取绿原酸对照品溶液1.0、4.0、8.0、12.0、16.0μl注入液相色谱仪,测定峰面积,以绿原酸进样量(μg) 为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为Y=2E+06X-55568，r=0.99985。结果表明绿原酸在0.20～3.2μg之间与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.2 精密吸取木樨草苷对照品溶液2.0、6.0、10.0、16.0、20 μl注入液相色谱仪, 测定峰面积, 以木樨草苷进样量(μg) 为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线, 其回归方程为Y =4E+06X-33367，r = 0.9 997。结果表明木樨草苷在0.22～2.2μg之间与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

2.5.1 精密吸取绿原酸对照品溶液10μL, 重复进样5次，记录峰面积，结果精密度良好，RSD为2.516%。

2.5.2 精密吸取木樨草苷对照品溶液10μL,重复进样6次，记录峰面积，结果精密度良好，RSD为2.243%。

2.6 重复性试验

2.6.1 精密吸取5份同一批金银花提取液,同2.3项下方法制备供试品溶液, 进样分析, 计算金银花中绿原酸的含量，结果重复性良好，RSD为2.393%。

2.6.2 精密吸取5份同一批金银花提取液, 同2.3项下方法制备供试品溶液, 进样分析, 计算金银花中木樨草苷的含量，结果重复性良好，RSD为1.896%。

2.7 稳定性试验

2.7.1 精密吸取金银花提取液, 同2.3项下方法制备供试品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分别进样20μL分析, 计算绿原酸的含量, 结果稳定性良好，RSD为2.792%。

2.7.2 精密吸取金银花提取液, 同2.3项下方法制备供试品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分别进样20μL分析, 计算木樨草苷的含量, 结果稳定性良好，RSD为2.789%。

2.8 加样回收率试验

2.8.1 精密吸取同一批已知绿原酸提取液10μL,共5份，每份分别加入对照品(0.2mg·μL-1)10μL,分别进样分析,由测得量与加入量计算回收率, 结果平均回收率为99.56%，RSD为2.235%，表明回收率良好。

2.8.2 精密吸取同一批已知木樨草苷提取液10μL,共5份，每份分别加入对照品(0.11 mg·μL-1)10μL,分别进样分析,由测得量与加入量计算回收率,结果表明回收率良好。

2.9 样品含量测定

2.9.1 按色谱条件进样20μL，以峰面积值求得绿原酸的质量,再计算出金银花中绿原酸的含量,山东、河北、河南、湖南、湖北金银花中绿原酸含量为3.921%、4.372%、3.558%、5.215%、1.177%。

2.9.2 按色谱条件进样20μL，以峰面积值求得木樨草苷的质量,再计算出金银花中木樨草苷的含量, 山东、河北、河南、湖南、湖北中各金银花中木樨草苷的含量为0.142%、0.063%、0.088%、0.033%、0.057%。

3 结论

不同产地金银花中绿原酸含量有较大差别，5个产地金银花中绿原酸含量是湖南﹥河北﹥山东﹥河南﹥湖北；木樨草苷含量为山东﹥河南﹥河北﹥湖北﹥湖南。以绿原酸，木樨草苷含量为检测指标，建立了绿原酸，木樨草苷含量测定的HPLC方法，并进行了方法学考察,结果表明，湖南金银花中绿原酸成分的含量高于其他产地绿原酸的含量，山东金银花中木樨草苷成分的含量高于其他产地的木樨草苷的含量。为进一步综合开发金银花、扩大金银花的生药资源奠定基础，为金银花的质量控制规范化和标准化提供了依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2010:205-206,28-29．

[2]王发国,叶华谷,马其侠,等.金银花及其药理作用[J].生物学通报,2004,39(5):17-18.

[3]刘琪.金银花化学成分及药理作用分析[J].科技创新与应用,2012,(2):45.

[4]季志平,朱萱萱,倪文澎,等.金银花提取物抗病毒的作用研究[J].中国医药导刊,2009,11(1):92．

[5]王林青,崔保安,张红英,等.中药金银花提取物抗炎作用研究[J].中国畜牧兽医,2008,35(8):82．

[6]谢新华,蒋绍祖,邹晓琴,等.金银花对发热新西兰兔解热作用机制的研究[J].时珍国医国药,2009,20(3):691．

[7]王妍,石学魁,宋宝辉.金银花增强小鼠免疫功能的研究[J].牡丹江医学院学报,2010,31(2):49．

[8]王清,朱置营,张赤兵,等.金银花提取物抗菌作用实验研究[J].中国医药导刊,2008,10(9):1425-1430.

ComparativeStudyonthemainactiveingredientcontentofloniceraeflosfromDifferentProducingAreas

Liang shuang

Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Province,Nanning 530001, China

Objective To compare the content of chlorogenic acid and luteolin glycosides in lonicerae flos from different origin. Methods Test samples have been extracted by ultrasonic, the content of main active ingredients from five origin has been measured by HPLC and chemical analysis. Results the content of chlorogenic acid in five origin: Hunan> Hebei> Shangdong > Henan> Hubei; the content of luteolin glycosides：Shandong> Henan> Hebei> Hubei> Hunan. Conclusion The content of chlorogenic acid and luteolin glycosides is different in different origin, the study provide an experimental basis on selecting flos lonicerae for different production purposes.

Flos lonicerae;chlorogenic acid;Luteolin glycosides;HPLC;Compare of content

R284

A

1007-8517(2014)09-0004-02

2014.03.12)