气相色谱法测定草果挥发油及其桉油精的含量

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1.云南农业大学农学与生物技术学院，云南 昆明 650201；2.云南农业大学云南省优势中药材规范化种植工程研究中心，云南 昆明 650201

气相色谱法测定草果挥发油及其桉油精的含量

沈勇1吴静1熊娇1吕丹1谢世清2杨生超2字淑慧1杨志清1,2*

1.云南农业大学农学与生物技术学院，云南 昆明 650201；2.云南农业大学云南省优势中药材规范化种植工程研究中心，云南 昆明 650201

目的检测云南不同产区草果挥发油的含量，并建立测定草果挥发油中桉油精含量的气相色谱方法。方法采用水蒸气蒸馏法进行挥发油的提取，用GC法桉油精进行含量测定。结果不同产区草果挥发油及桉油精含量差别较大；桉油精在0.381 1～3.811 5 μg范围内呈良好线性关系(r>0.999 5)，平均回收率(n=6)为99.53%，RSD=1.28%。结论该方法简便、准确，分离快速，可为草果挥发油的质量控制提供依据。

草果；挥发油；桉油精；气相色谱

草果为姜科豆蔻属植物草果Amomumtaso-koCrevost et Lemaire的干燥成熟果实[1]，主产于云南、广西、贵州等省区[2]，具有燥湿祛寒，除痰截疟的功效。草果是药食两用大宗中药材，其作为香料的用量要远大于药用。2010年版《中国药典》把测定挥发油总量作为评价草果品质的重要指标，其挥发油主要有α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精、香叶醇、柠檬醛、反-2-十二烯醛等[3、4]。其中桉油精含量较高并具有解热、消炎、抗菌、防腐、平喘及镇痛等作用，常作为药品和日化产品的原料使用。目前草果挥发油的研究多集中于化学成分的鉴别[4-6]和指纹图谱[7、8]，对不同产地挥发油的含量及其成分定量分析相对较少。本试验对产于云南不同地区的草果进行挥发油含量的检测，同时建立了测定其挥发油中桉油精的气相色谱法(GC)，具有简便、准确、快速分离的特点，为草果挥发油成分的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

Agilent 6890毛细管气相色谱仪，HP CORE色谱工作站，氢火焰离子检测器(FID),梅特勒托利多AE240型电子天平(瑞士Mettler Toledo 公司)，中药高速粉碎机(浙江永历制药机械有限公司)。桉油精对照品(批号：110788-201004，上海同田生物技术有限公司)；所用试剂均为分析纯。

草果样品采自云南省，经中国科学院昆明植物研究所雷立功副研究员鉴定为姜科豆蔻属植物草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemair.

2 方法与结果

2.1 色谱条件 毛细管柱Agilent 19091N-213 HP-INNOWAX Polyethlene Glycol(30.0 mm×320 μm,0.50 μm) ，FID检测器；进样口温度200℃；检测器温度250℃；柱温以60℃为起始温度，保持4 min，以5℃/min的速率升至180℃；不分流，进样量1 μl。对照品及草果挥发油样品溶液色谱图见图1。桉油精色谱峰的保留时间为10.45 min。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取桉油精适量，用正己烷制成每1 ml含桉油精38.1 mg的溶液作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取临用前粉碎过40目筛的样品粉末约100 g，精密称定，按《中国药典》2010年版(一部)附录XD甲法[1]提取各样品的挥发油，加适量无水硫酸钠脱水，振摇，静置，过夜。精密量取脱水后的样品50 μl于5 ml量瓶中，加正己烷定容至刻度，摇匀，即得。

2.4 线性关系考察 精密量取“2.2”项下桉油精对照品溶液10、20、40、80、100 μl，分置1 mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀。精密吸取1.0 μl注入气相色谱仪。以色谱峰峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X，μg)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：Y=108 3.7X+181.4，r=0.999 8。结果表明：桉油精进样量在0.381 1～3.811 5 μg之间具有良好线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液1.0 μl，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，桉油精峰面积的RSD为0.26%。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液按“2.1”项下色谱条件分别在0，2，4，6，12，24 h后进样测定，桉油精峰面积的RSD为1.42%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批草果药材粉末6 份，平行称定，按“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液6份，按“2.1”项下色谱条件测定，桉油精的平均含量为 4.831 5 mg·g-1，RSD(n=6)为0.92%。表明方法的重复性较好。

2.8 回收率试验 精密称取桉油精，配成浓度为47.53 mg·ml-1的对照品溶液，取已知含量的同一批草果药材粉末约50 g，平行试验6份，精密称定，分别加入混合对照品溶液5 mL，按“2.3”项下方法制备供试溶液，精密吸取1 μL注入气相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定。桉油精的平均回收率(n=6)为99.53%，RSD为1.28%。

2.9 样品含量测定 取不同产地草果药材粉末约100 g，精密称定，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，按“2.3”项下制成供试品溶液，依法进样测定，用外标法计算桉油精的百分含量。结果见表1。

表1 5个产区草果挥发油及桉油精的含量(n=3)

3 讨论

草果为药食两用大宗中药材，2010年版《中国药典》把测定挥发油总量作为评价草果品质的重要指标。本实验对云南不同产区草果挥发油和桉油精的含量分别进行检测，结果两项检测指标含量差别较大，红河和腾冲地区两项指标含量相对较高。

试验采用气相色谱法对草果挥发油中桉油精的含量进行检测，经过方法学考察，筛选出较佳的实验参数，色谱条件简单，方法可靠，分离效果好，可为草果挥发油的质量评价提供依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010:222-223.

[2]徐国钧.常用中药品种整理和研究(第三册)[M].福州:福建科学技术出版社，1997:217.

[3]赵怡，张国英，肖中华，等.超临界流体萃取法提取草果挥发油化学成分研究[J].中国药学杂志，2004，39(199):705-706.

[4]林敬明，郑玉华，许寅超，等.超临界CO2流体萃取草果挥发油成分分析[J].中药材，2000，23(3):145-148.

[5]朱缨，俞迪佳，吴健.草果挥发油成分的气相色谱-质谱联用分析[J].中国药业，2012，21(21):4-5.

[6]赵怡，张国英，肖中华，等.超临界CO2流体萃取法提取草果挥发油化学成分的研究[J].中国药学杂志，2004，39(9):705-706.

[7]丁艳霞，崔秀明，李雪玲，等.草果挥发油的GC-MS指纹图谱[J].光谱实验室，2006，23(1):81-84.

[8]吴惠勤，黄晓兰，黄芳，等.草果挥发油的气相色谱-质谱指纹图谱[J].质谱学报，2004，25(2):92-95.

DeterminationofvolatileoilandeucalyptolinAmomumtaso-ko

SHEN Yong1,WU Jing1,XIONG Jiao1,LV Dan1,XIE Shi-qing2,YANG Sheng-chao2,YANG Zhi-qing1,2

1.College of Agriculture and Biotechnology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201,China;2.Yunnan Research Center on Good Agriculture Practice for Dominant Chinese Medicinal Meterials, Kunming 650201,China

ObjectiveTo determine the content of volatile oil and establish a GC method for the determination of eucalyptol in volatile oil from Amomum taso-ko Crevost et Lemaire in different regions of Yunnan province.MethodsThe essential oil was extracted by steam distillation. The content of eucalyptol were measured by GC.ResultsThere is much difference in the content of volatile oil and eucalyptol from Amomum taso-ko in different regions of Yunnan province. Linearity of each standard was established in the concentration range of 0.381 1～3.811 5 μg with correlation coefficient r>0.999 5.Average recoveries (n=6) of eucalyptol were 99.53% with a RSD of 1.28%.ConclusionThe developed method is simple, accurate, well separated and quick, which can be used as quantitative analysis of Amomum taso-ko Crevost et Lemaire.

Amomum taso-ko;volatile oil;eucalyptol;GC

云南省科技计划项目(编号：2011CG015)；云南农业大学高原山地作物可持续生产系统研究省创新团队“高原山地特色作物种质创新及利用”(编号：云科人发[2012]18号)。

沈勇(1976-)，男，云南大理人，讲师，博士，主要从事药物化学和药物开发研究。 E-mail：pharmsy@sina.com

杨志清(1968-)，女，云南普洱人，副教授，硕士，主要从事药用植物栽培与资源评价研究。 E-mail：yzq1468@126.com

R284.1

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1007-8517(2014)11-0014-02

2014.04.06)