体外受精优质囊胚培养与D2D3胚胎卵裂球数及碎片评级的相关性

严凤英，李晓洁，吕 群，张小建

(四川省人民医院 妇产科，四川 成都，610072)

辅助生育技术是治疗不孕不育症的有效方法,其给越来越多的不孕不育症患者带来了希望。体外受精-胚胎移植(IVF-ET)是其重要代表[1-2]。胚胎在体外培养至囊胚期可行囊胚移植。囊胚培养可经筛选而发展为优质胚胎，但其也减少了可移植胚胎的利用率。本研究观察优质囊胚培养与D2D3胚胎卵裂球数及碎片评级的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析本院2013年11月—2014年1月行囊胚培养的IVF-ET患者临床资料，年龄21～44岁，平均年龄(31.1±5.2)岁。入选标准: ① 患者为输卵管、排卵障碍及男性等因素引起; ② 胚胎均为受精后2原核不符合移植和冷冻标准，包括D3发育迟缓的4～6个细胞。D3发育过快的≥10个细胞。D3发育正常7～9个细胞的胚胎; ③ 无严重重要脏器功能衰竭者; ④ 患者均签署治疗知情同意书。排除标准: ① 染色体异常和子宫畸形等患者; ② 严重重要脏器功能障碍者; ③ 未签署治疗知情同意书者。

1.2 方法

采用G2囊胚培养液对所选囊胚进行培养。将其放置35 mm的培养皿中，40 μL液滴覆盖矿物油。将其放于37 ℃、6% CO2培养箱中培养。

1.3 胚胎评分

将胚胎分为4个等级。Ⅰ级:胚胎卵裂球均匀、规则，透明带完成且折光良好。碎片≤5%；Ⅱ级：卵裂球稍欠均匀、轻度不规则。折光度稍变化，碎片≤20%; Ⅲ级：卵裂球欠均匀，透明带完整。碎片≤50%，有一定折光性；Ⅳ级：胚胎内碎片≥50%。碎片外卵裂球具有活力。优质胚胎：D2为4个细胞数、D3为7～9个细胞数的Ⅰ、Ⅱ级胚胎。根据Gamder囊胚分级法对形成的囊胚进行分级。将囊胚分成1～6级: 3～6级囊胚需对内细胞团(ICM)进行评分。将其分为A级、B级、C级。将5～6 d囊胚评分≥3级，且其ICM为A或B级定为优质囊胚[3]。

2 结 果

2.1 优质囊胚与D3胚胎卵裂球数

D3≥10个细胞的优质囊胚形成率为38.9%，7～9个细胞43.1%，比较无显著差异(χ2=0.96，P>0.05)。7～9个细胞的优质囊胚形成率为43.1%，显著高于4～6个细胞10.3%，比较有显著差异(χ2=97.53，P<0.05)，见表1。

表1 优质囊胚与D3胚胎卵裂球数关系[n(%)]

2.2 优质囊胚与D2胚胎卵裂球数

D24个细胞的优质囊胚形成率为43.6%，显著高于5个细胞28.9%，比较有显著差异(χ2=10.22，P<0.05)，同时其也显著高于2～3个细胞数12.3%，比较有显著差异(χ2=63.78，P<0.05)。5个细胞的优质囊胚形成率为28.9%，6个细胞23.4%，比较无显著差异(χ2=0.77，P<0.05)，见表2。

表2 优质囊胚与D2胚胎卵裂球数关系[n(%)]

2.3 优质囊胚与D3、D2胚胎碎片

Ⅰ、Ⅱ级D3胚胎碎片的优质囊胚形成率为36.4%，显著高于Ⅲ、Ⅳ级6.1%，比较有显著差异(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ级D2胚胎碎片的优质囊胚形成率为35.3%，显著高于Ⅲ、Ⅳ级4.7%，比较有显著差异(P<0.05)，见表3。

表3 优质囊胚与D3、D2胚胎碎片的关系

3 讨 论

辅助生殖技术是治疗不孕不育的常用方法。多胎妊娠发生率为30%，明显高于自然妊娠[4-5]。人类胚胎以囊胚形式植入母体。卵子受精后第5～7天即可形成囊胚，其同时也是胚胎体外培养的终末阶段。胚胎从卵裂期至囊胚经历较大变化。其包括细胞融合、囊胚腔形成、囊胚腔扩张和内细胞团孵出[6-7]。染色体异常及发育潜能低者可停止发育。条件较好的胚胎才有发育为囊胚的潜能。胚胎在体外发育至囊胚期可行囊胚移植。其可明显提高胚胎种植率。同时还可明显降低多胎妊娠的发生率。但囊胚移植既有优势，也有不足之处[8-9]。囊胚培养可经筛选而发展为优质胚胎，但其也减少了可移植胚胎的利用率。囊胚培养可有效地筛选优良胚胎，进而提高囊胚着床率及妊娠率。临床可根据胚胎形态学特征进行评价、分级。研究[10-11]显示，胚胎卵裂球数及碎片评级与优质囊胚密切相关。胚胎碎片的增多可降低囊胚形成率，同时碎片会影响细胞之间的连接，进而干扰细胞融合、囊胚腔的形成。碎片可释放有毒物质而损伤邻近的细胞。

本研究探讨IVF治疗周期中体外培养优质囊胚形成情况，同时分析其与D2D3胚胎卵裂球数及碎片评级关系。结果显示: D3≥10个细胞的优质囊胚形成率为38.9%，7～9个细胞43.1%，比较无显著差异(P>0.05)。7～9个细胞的优质囊胚形成率为43.1%，显著高于4～6个细胞10.2%，比较有显著差异(P<0.05); D24个细胞的优质囊胚形成率为43.6%，显著高于5个细胞28.9%，比较有显著差异(P<0.05)，同时其也显著高于2～3个细胞数12.3%，比较有显著差异(P<0.05)。5个细胞的优质囊胚形成率为28.9%,6个细胞23.4%，比较无显著差异(P>0.05); Ⅰ、Ⅱ级D3胚胎碎片的优质囊胚形成率为36.4%，显著高于Ⅲ、Ⅳ级6.1%，比较有显著差异(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ级D2胚胎碎片的优质囊胚形成率为35.3%，显著高于Ⅲ、Ⅳ级4.7%，比较有显著差异(P<0.05)。因此，延长体外受精培养可有效筛选发育潜力的胚胎。D3胚胎卵裂球数越多，优质囊胚越多。D2胚胎4个细胞，囊胚发育能力较好。Ⅰ、Ⅱ级D2、D3胚胎碎片的优质囊胚形成率较高。优质囊胚形成与D2、D3胚胎卵裂球数及碎片评级密切相关，这一结果与国内相关研究相一致[12-13]。这表明囊胚发育潜能的关键因素在于D3胚胎发育速度，发育速度过快的胚胎更易形成优质囊胚。10个或以上细胞的D3胚胎也易形成优质囊胚。

综上所述，延长体外受精培养可有效筛选发育潜力的胚胎。D3胚胎卵裂球数越多，优质囊胚越多。D2胚胎4个细胞，囊胚发育能力较好。Ⅰ、Ⅱ级D2、D3胚胎碎片的优质囊胚形成率较高。优质囊胚形成与D2、D3胚胎卵裂球数及碎片评级密切相关。

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