急性主动脉夹层患者血浆细胞因子及内毒素水平测定*

李 明，法宪恩，杨景学，赵根尚，王宏山，黄真锋

郑州大学第二附属医院心血管外科 郑州 450014

急性主动脉夹层患者血浆细胞因子及内毒素水平测定*

李 明，法宪恩#，杨景学，赵根尚，王宏山，黄真锋

郑州大学第二附属医院心血管外科 郑州 450014

#通讯作者，男，1962年8月生，博士，主任医师，研究方向：心血管外科，E-mail：faxianen@163.com

急性主动脉夹层；全身炎性反应综合征；细胞因子；内毒素

目的：探讨急性主动脉夹层患者血浆细胞因子及内毒素水平的变化及其与疾病预后的关系。方法选取郑州大学第二附属医院心血管外科2005年1月至2012年12月收治的急性主动脉夹层患者85例，入院后均行急诊手术治疗。根据预后分为死亡组(16例)和生存组(69例)。分别于入院时(T1)、入院后12 h(T2)、入院后24 h(T3)取患者血液分离血浆，测定血浆中IL-6、IL-10、TNF-α及内毒素水平。结果与生存组比较，死亡组IL-6、TNF-α、内毒素水平在各时间点均增高(F组间=3.914、5.973、9.156，P均<0.05)；生存组与死亡组内各时间点IL-6、TNF-α、内毒素水平比较，差异均有统计学意义(F时间=5.135、11.548、8.875，P均<0.05)，且与T1比较，生存组T3的IL-6、TNF-α水平，死亡组T2的IL-6水平，死亡组T3的IL-6、TNF-α、内毒素水平均升高(P均<0.05)。2组间IL-10水平比较及组内各时间点间比较，差异均无统计学意义(F组间=1.674，F时间=2.901，P均>0.05)。结论急性主动脉夹层病情进展迅速， IL-6、TNF-α及内毒素水平的急剧增加可能提示患者预后不佳。

急性主动脉夹层病情进展迅速，病死率高，疾病发展过程中时常伴有严重的全身炎性反应综合征 (systemic inflammatory response syndrome，SIRS)，甚至造成多器官功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)[1]。该研究比较了急诊手术后不同预后急性动脉夹层患者术前血浆细胞因子及内毒素水平的变化，探讨二者对预后判断的作用。

1 对象与方法

1.1研究对象研究对象为郑州大学第二附属医院心血管外科2005年1月至2012年12月收治的急性主动脉夹层患者，排除术前死亡者，共选取入院后顺利进行急诊手术者85例，其中男51例，女34例；年龄35～67岁；发病至急诊手术时间18～43 h。根据手术后预后分为生存组(69例)及死亡组(16例)。2组患者发病至入院时间、年龄、性别构成、入院时收缩压及舒张压相比，差异均无统计学意义，见表1。

表1 生存组与死亡组患者一般情况比较

1 mmHg=0.133 kPa。

1.2 2组患者血浆IL-6、IL-10及TNF-α水平的测定所有患者分别于入院时(T1)、入院后12 h(T2)、入院后24 h(T3)抽取血液，分离血浆备用。采用ELISA法进行IL-6、IL-10及TNF-α水平的测定，试剂盒均由上海西唐生物科技有限公司提供。主要步骤：在标准品孔和样品孔中分别加入生物素标记液，孵育反应，洗板机清洗。在标准品孔和样品孔中加入酶标记液，孵育反应，再次洗板机清洗。每孔加入底物液，37 ℃下避光孵育。加入终止液，终止反应。上酶标仪于450 nm处读取各孔的吸光度值，在标准曲线上查找样品对应的水平。

1.3 2组患者血浆内毒素水平的测定采用鲎试剂盒(北京金山川公司)进行血浆中内毒素水平的测定。主要步骤：吸取抗凝血浆，水浴、振荡，取其上清液，加入缓冲液，然后加入鲎试剂，水浴后依次加入亚硝酸钠、氨基硫磺胺、萘乙二胺，在721分光光度比色仪上进行比色，根据吸光度值查对内毒素标准曲线，得到血浆内毒素水平。

1.4统计学处理应用SPSS 11.5进行统计分析，2组患者血浆细胞因子及内毒素水平的比较采用重复测量数据的方差分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2组患者血浆细胞因子及内毒素水平见表2。由表2可知，与生存组比较，死亡组IL-6、TNF-α、内毒素水平在各时间点均增高；生存组与死亡组内各时间点IL-6、TNF-α、内毒素水平比较，差异均有统计学意义，且与T1比较，生存组T3的IL-6、TNF-α水平，死亡组T2的IL-6水平，死亡组T3的IL-6、TNF-α、内毒素水平均升高。2组间IL-10水平比较及组内各时间点间比较，差异均无统计学意义。

表2 生存组与死亡组患者血浆IL-6、TNF-α、内毒素及IL-10水平比较 mg/L

*：组内与T1比较，P<0.05。

3 讨论

急性主动脉夹层病情进展迅速,病死率高，发病后可迅速引起SIRS，甚至造成MODS[1]。急性主动脉夹层可造成真腔及假腔形成，持续的血流进入假腔，促使假腔向下游发展。随着夹层剥离进展，假腔容积不断增加，压迫真腔，减少下游器官血液供应，导致了包括肠道在内的全身性组织缺血[2-3]，造成血浆细胞因子及内毒素水平增加。除假腔占位外，主动脉夹层发生后引起的应激也可能会导致内毒素及细胞因子移位至血液中，促进SIRS的发生发展。该研究中作者发现，不论是死亡组还是生存组，在主动脉夹层发生后血浆内毒素及促炎因子(IL-6、TNF-α)水平均急剧增高，说明主动脉夹层产生后确实存在细胞因子及内毒素的暴发，从而引起SIRS。

已有的研究表明，损伤[4-5]或者严重的疾病，甚至不洁的操作[6]均可造成细胞因子及内毒素水平的增加，而这些炎性因子水平的变化同时也能反映出患者病情的严重性[7]。连续测定血液中内毒素及炎性因子的水平可以帮助预测患者预后，提高医师对此类患者的重视，给予早期治疗、早期干预[8]。合适的炎性介质不仅可以反映主动脉夹层患者全身炎性反应的剧烈程度、炎性介质随时间变化的规律，还可预测患者的预后。近年来，较多文献报道了急性主动脉夹层患者全身炎性反应的变化规律。Wen等[9]分析了血液炎性介质水平与患者预后的关系；Nomura等[10]对比了有残余夹层和无残余夹层患者血液炎性介质水平的差异。上述研究均证实细胞因子与急性主动脉夹层关系密切。该实验发现，死亡组促炎因子(IL-6、TNF-α)及内毒素水平各时间点均高于生存组，而抗炎因子(IL-10)水平2组间比较差异无统计学意义，说明主动脉夹层形成后确实存在内毒素及促炎因子的急剧增加，而抗炎因子不能随着增长从而减弱SIRS，可能是造成患者预后不佳的原因[11]。及早地干预促炎因子、增加抗炎因子可能会增加患者的生存率[12-14]。可见IL-6、TNF-α及内毒素的急剧增加可能提示急性主动脉夹层患者预后不佳，因此临床医师应提高对该类疾病治疗的重视。

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(2013-04-14 收稿 责任编辑 姜春霞)

Detection of cytokines and endotoxin in plasma of patients with acute aortic dissection

LIMing，FAXian’en,YANGJingxue,ZHAOGenshang,WANGHongshan,HUANGZhenfeng

DepartmentofCardiovascularSurgery,theSecondAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014

acute aortic dissection; systemic inflammatory response syndrome; cytokine; endotoxin

Aim: To identify the relationship between cytokines and endotoxin changes of patients with acute aortic dissection and prognosis. Methods: A total of 85 patients with acute aortic dissection from Department of Cardiovascular Surgery of the Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University from January 2005 to December 2012 were divided into death group and survival group according to prognosis. At the time of admission(T1), 12 hours after admission(T2), 24 hours after admission(T3), IL-6, IL-10, TNF-α and endotoxin levels in plasma were measured. Results: Compared with the survival group, the levels of IL-6, TNF-α and endotoxin in the death group at each time point were significantly higher(Fgroup=3.914，5.973，9.156，P<0.05). There were significant differences of IL-6,TNF-α and endotoxin levels among three time points in two groups (Ftime=5.135，11.548，8.875，P<0.05). And compared with T1, IL-6 and TNF-α levels in the survival group at T3, IL-6 level in the death group at T2, IL-6, TNF-α and endotoxin levels in the death group at T3 were significantly higher (P<0.05). There was no significant difference in IL-10 level between two groups and among three time points (Fgroup=1.674，Ftime=2.901,P>0.05).Conclusion: Acute aortic dissection progresses rapidly, and dramatic increase of IL-6, TNF-α and endotoxin may indicate poor prognosis.

*河南省卫生科技创新人才工程项目 20100120；河南省医学学术技术带头人出国培训计划项目 201201053

R654.3

10.3969/j.issn.1671-6825.2014.01.022