高效液相法测定补中益气丸中甘草苷和橙皮苷含量

刘福宝 梁良 王喆 刘丽芳 边虹铮 王乐 赵永芳

·药物研究·

高效液相法测定补中益气丸中甘草苷和橙皮苷含量

刘福宝 梁良 王喆 刘丽芳 边虹铮 王乐 赵永芳

目的建立测定补中益气丸中甘草苷含量的方法。方法采用高效液相色谱法。C18柱，乙腈-0.05%醋酸溶液(20∶80)为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长276 nm，柱温：室温。结果在0.025～0.150 μg范围内，甘草苷进样量与峰面积值呈良好的线性关系(r=0.9999)；平均回收率为99.25%，RSD为1.3%(n=9)。结论该方法灵敏度高、重复性好，可用于补中益气丸中甘草苷含量的测定。

补中益气丸；高效液相色谱法；甘草苷；含量测定

补中益气丸源自李东垣《脾胃论》中的“补中益气汤”，由君药黄茂，臣药党参、白术、甘草，佐药当归、陈皮，使药升麻、柴胡组成。具有补中益气、升阳举陷，健脾润肠等功效。药理学研究表明补中益气丸对免疫系统、消化系统、泌尿系统等均有良好的调节作用，并能增强机体非特异性抵抗力、抗菌、抗病毒等。补中益气丸在2010年版药典一部的质量标准中只有黄芪甲苷的含量测定，为更好的控制产品质量，完善和提高质量标准，本文利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)对补中益气丸中的甘草苷进行了含量测定方法学研究。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外检测器(日本岛津公司)；日本岛津色谱工作站(Lcsolution Lite)；数控超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)；BP211D电子天平(SARTORIUS AG)。色谱纯乙腈；水为纯净水；其它试剂均为分析纯；甘草苷(批号：110781-200612，中检所)；补中益气丸(天津某药厂，批号：110801)。

1.2 甘草苷的含量测定

1.2.1 色谱条件与系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈- 0.05%醋酸溶液(20∶80)为流动相；检测波长为276 nm；理论板数按甘草苷峰计算应不低于4 000。

1.2.2 干扰性试验：按照处方制备不含炙甘草的阴性样品，按拟定的含量测定方法制备阴性对照液，进样分析。

1.2.3 线性关系试验：取甘草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为5.0 μg/ml，10.0 μg/ml，15.0 μg/ml，20.0 μg/ml和30.0 μg/ml的溶液，分别吸取5 μl进样分析。在上述色谱条件下，记录色谱图，测定峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标，以峰面积值为纵坐标作图，制得甘草苷回归方程。

1.2.4 回收率试验：称取已知含量的样品约0.75 g，平行9份，其中3份分别加入浓度为24.48 μg/ml甘草苷对照品溶液各5 ml，3份分别加入41 μg/ml甘草苷对照品溶液各5 ml，3份分别加入57.24 μg/ml甘草苷对照品溶液各5 ml，照“供试品溶液制备”项下操作，测定，以下式计算方法的回收率。

1.2.5 溶液稳定性试验：称取样品约1.5 g，精密称定，照确定的方法制备供试品溶液，取上述供试液，分别于0、2、4、8、12 h时，进样5 μl，测得样品中甘草苷峰面积值。

1.2.6 精密度试验：精密吸取浓度为15.0 μg/ml的甘草苷对照品溶液各5 μl，重复进样5次，测定其峰面积。

1.2.7 重复性试验：按拟定的含量测定方法，对同一批样品，分别制备5份供试品溶液，分别进样5 μl，测定峰面积值并计算含量。

2 结果

2.1 干扰性试验 按照处方制备不含炙甘草的阴性样品，按拟定的含量测定方法制备阴性对照液，进样分析。结果显示对照品溶液和供试品溶液甘草苷峰相同保留时间位置阴性未见有峰干扰，说明补中益气丸中其他药材及辅料对本方法测定甘草苷的含量无干扰。

2.2 线性关系试验 实验条件下，以对照品进样量(μg)为横坐标，以峰面积值为纵坐标作图，制得甘草苷回归方程为：Y=10080X+2612.5，r=0.9999；以上结果表明：在0.025～0.150 μg范围内，甘草苷进样量与峰面积值呈良好的线性关系，实际样品测定结果准确、可靠。实验中对样品的测定采用外标一点法计算甘草苷的含量。

2.3 回收率试验 试验结果表明，平均回收率为99.25%，RSD为1.3%，加样回收率良好。见表1。

表1 甘草苷含量回收率试验结果

2.4 溶液稳定性试验 实验条件下，测得样品中甘草苷峰面积值。试验结果证明，样品溶液在12 h内基本保持稳定。见表2。

表2 供试品溶液稳定性试验结果

2.5 精密度试验 实验条件下测定其峰面积，试验结果表明，精密度良好，RSD为1.4%。见表3。

表3 精密度试验结果

2.6 重复性试验 实验条件下测定峰面积值并计算含量。见表4。

3 讨论

中药组方成分复杂，中药的质量控制亦是世界范围内的热点问题。由于客观条件所限，仿照西药的标准，设定单一的成分作为质量控制的标准是目前的主流方式，但具有很大局限性，不能全面评价中药组方的药理学作用和临床疗效。补中益气丸源自于经典名方，能增强机体非特异性抵抗力、抗菌、抗病毒等[1]。目前国家标准只是规定了黄芪中黄芪甲苷的含量限度，检测手段单一，不能全面反映含有多种成分的补中益气丸的质量，在一定程度上影响其临床评价。有文献报道了芒柄花黄素、橙皮苷及甘草酸的含量测定方法[2-4]，尚未见甘草苷的含量测定，本文建立了甘草苷的HPLC含量测定方法，方法简单易行，重现性好，回收率和精密度较高，方法结果可靠，为补中益气丸的质量研究提供了重要依据。

1 孙国祥,蔡新凤.补中益气丸高效液相色谱数字化指纹图谱研究.中南药学，2010,8:226-230.

2 董秀丽,李洪娟.HPLC法测定补中益气丸中芒柄花黄素的含量.中国药房,2012,23:3440-3441.

3 李洪刚,熊胜元,杨修齐,等.高效液相色谱法测定补中益气丸中甘草酸含量.中国药业,2005,14:43.

4 徐端琼.高效液相色谱法测定补中益气丸中橙皮营的含量.海峡药学,2007,19:48-50.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.15.055

054000 河北省邢台市疾病预防控制中心(刘福宝)；河北省疾病预防控制中心(梁良、王喆)；河北化工医药职业技术学院(刘丽芳、边虹铮、王乐)；河北省任丘市人民医院内三科(赵永芳)

梁良，050021 石家庄市，河北省疾病预防控制中心；

E-mail：1127514740@qq.com

R 932

A

1002-7386(2014)15-2365-03

2014-01-13)