慢性重型乙型肝炎患者外周血DNT细胞及T细胞亚群的表达及意义

刘坤 杨亚萍 刁青 陈璀 孙谢文

·论著·

慢性重型乙型肝炎患者外周血DNT细胞及T细胞亚群的表达及意义

刘坤 杨亚萍 刁青 陈璀 孙谢文

目的研究外周血CD+3CD-4CD-8(DNT)细胞及T细胞亚群在慢性重型乙型肝炎患者的表达及意义。方法正常对照者32例、慢性乙型肝炎(CHB)40例、慢性重型乙型肝炎(CSHB)35例患者为研究对象，采用流式细胞仪检测各组外周血DNT细胞及T细胞亚群。结果CHB组和CSHB组DNT细胞占T淋巴细胞的百分比与对照组比较明显增高(P<0.05)；而CSHB组增高程度更为显著，与CHB组比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。HBV DNA载量与DNT细胞占T淋巴细胞的百分比呈正相关(r=0.742，P<0.05)。CHB组与对照组比较，仅CD+4亚群明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；CSHB组和CHB组比较，CD+4亚群及CD+4/CD+8明显降低，CD+8亚群明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性重型乙型肝炎患者DNT细胞显著增高及T细胞亚群比例异常可能是慢性乙型肝炎发生发展的重要因素。

慢性重型乙型肝炎；DNT细胞；T细胞亚群

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年6月至2013年10月期间我院收治的慢性HBV感染者75例，其中，男55例，女20例；年龄16～73岁，中位年龄40.8岁；CHB患者40例和CSHB患者35例。均符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》对慢性乙型肝炎的诊断标准[5]。所有患者6个月内均未接受抗病毒治疗。排除其他病毒引起的肝炎、HIV阳性者及肝癌、酒精性肝病等。同时选取我院健康体检者32例为对照组，其中男20例，女12例；年龄21～68岁，中位年龄39.8岁；均经查体证实HBsAg阴性，肝功能正常。

1.2 检测方法

1.2.2 HBV DNA载量测定：使用美国ABI7300型基因扩增仪，采用实时荧光定量PCR法检测标本，试剂盒由上海生工生物工程技术有限公司提供。HBV DNA≤103copies/ml为阴性，HBV DNA>103～105copies/ml为低载量，HBV DNA 105～107copies/ml为中载量，HBV DNA>107copies/ml为高载量。

2 结果

2.1 3组DNT细胞分布比较 CHB组和CSHB组DNT细胞绝对数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。DNT细胞占T淋巴细胞的百分比与对照组比较明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)；而CSHB组增高程度更为显著，与CHB组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1各组DNT细胞分布比较

组别DNT细胞绝对数(个/mm3)DNT(%)1对照组(n=32)118±596±4 CHB组(n=40)112±558±4*CSHB组(n=35)124±6211±5*#

注：与对照组比较，*P<0.05；与CHB组比较，#P<0.05

2.2 不同HBV DNA载量与HBV患者DNT细胞分布比较 阴性组与对照组比较，DNT细胞占T淋巴细胞的百分比差异无统计学意义(P>0.05)；随着HBV DNA载量增高，DNT细胞百分比逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2不同HBV DNA载量与HBV患者DNT细胞分布比较

组别DNT对照组(n=32)6±4阴性组(n=8)6±4低载量组(n=12) 8±4*#中载量组(n=32) 10±5*#△高载量组(n=23) 11±5*#☆

注：与对照组比较，*P<0.05；与阴性组比较，#P<0.05；与低载量组比较，△P<0.05；与中载量组比较，☆P<0.05

2.3 HBV DNA载量与HBV患者DNT细胞分布的相关性 HBV DNA载量的对数值与DNT细胞占T淋巴细胞的百分比呈正相关(r=0.742，P<0.05)。

组别CD+4CD+8CD+4/CD+8对照组(n=32)42±4 25±31.7±0.4CHB组(n=40)38±4*25±31.5±0.4CSHB组(n=35)30±4*# 33±4*#0.9±0.3*#

注：与对照组比较，*P<0.05；与CHB组比较，#P<0.05

3 讨论

慢性乙型肝炎患者由于病毒持续复制可诱导机体产生各种细胞因子、炎性介质及宿主免疫病理反应，这些复杂作用最终造成大块肝组织坏死进而发生为慢性重型乙型肝炎、肝衰竭甚至多脏器功能衰竭，患者病死率高达40%～60%。研究表明，淋巴细胞介导的细胞免疫功能紊乱是影响慢性乙型肝炎病变发展及预后的重要因素，其中免疫调节细胞在这一病理损伤过程中发挥重要作用[6]。

总之，慢性重型乙型肝炎患者存在DNT细胞高表达及T淋巴细胞比例失衡，这是导致机体免疫功能低下，感染慢性化的主要原因。

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3 Juvet SC,Han M,Vanama R,et al.Autocrine IFNγ controls the regulatory function of lymphoproliferative double negative T cells.PLoS One,2012,7:e47732.

4 D’Acquisto F，Crompton T.CD3+CD4-CD8-(double negative) T cells:saviours or villains of the immune response.Biochem Pharmaco，2011，82:333-340.

5 中华医学会肝病学分会和感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南.实用肝脏病杂志，2011，14:81-89.

6 Chisari FV,Isogawa M,Wieland SF.Pathogenesis of hepatitis B virus infection.Pathol Biol (Paris),2010,58:258-266.

7 Kim EY,Juvet SC,Zhang L． Regulatory CD4(-)CD8(-) double negative T cells.Methods Mol Biol,2011,677:85-98．

8 陆玉蕾,王晓晶,严伟明,等.TCRγδ+CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞在3型鼠肝炎病毒诱导的小鼠慢性病毒性肝炎发病中的作用.实用肝脏病杂志,2012,15:339-342.

ExpressionandsignificanceofdoublenegativeTcellsandlymphocytesubtypeinpatientswithchronicseverehepatitisB

LIUKun,YANGYaping,DIAOQing,etal.DepartmentofLiverDiseases,TheThirdHospitalofQinhuangdaoCity,Hebei,Qinhuangdao066001,China

ObjectiveTo investigate the expression and significance of CD+3CD-4CD-8(DNT)cells and lymphocyte subtype in patients with chronic severe hepatitis B.MethodsThe serum samples from 32 healthy subjects,40 patients with chronic hepatitis(CHB)and 35 patients with chronic severe hepatitis B (CSHB) were collected in this study.The DNT cells and lymphocyte subtype in peripheral blood were detected by flow cytometry.ResultsThe percent of DNT cells in CHB and CSHB groups [(8.44±4.25)% and (10.78±5.33)%,respectively] were significantly higher than those in control group [(6.23±3.77)%,P<0.05],moreover,the increase extent in CSHB group was more obvious than that in CHB group (P<0.05).The HBV DNA load was positively correlated to DNT cells (r=0.742,P<0.05).The CD+4+ T lymphocytes in CHB group were significantly decreased,as compared with those in control group (P<0.05).The percentages of CD+4T lymphocytes and the ratio of CD+4/CD+8in CSHB group were significantly decreased,however,CD+8T lymphocytes were significantly increased,as compared with those in CHB group (P<0.05).ConclusionThe obvious increase of DNT cells and the abnormality of T lymphocyte subset percentage in patients with chronic severe hepatitis B may be one of important reasons for the pathogenesis and development of chronic hepatitis B．

chronic severe hepatitis B;double negative T cells;T-lymphocytes subsets

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.15.002

066001 河北省秦皇岛市第三医院肝病科

R 512.62

A

1002-7386(2014)15-2248-03

2014-01-07)