癌基因c-fos、c-myc蛋白在皮肤鳞状细胞癌皮损中的表达及意义

耿春杰 张国强 王正想 李美洲 高顺强

·论著·

癌基因c-fos、c-myc蛋白在皮肤鳞状细胞癌皮损中的表达及意义

耿春杰 张国强 王正想 李美洲 高顺强

目的研究关于c-fos、c-myc两个癌基因在皮肤鳞癌发生和发展过程中的表达情况。方法选择79例皮肤鳞癌病例，应用免疫组织化学的方法检测c-fos、c-myc的表达情况，并比较与正常皮肤组织的表达情况进。结果在正常皮肤组织中c-fos、c-myc两个癌基因不表达，而在皮肤鳞癌中两者分别有70.9%和78.5%阳性表达，癌组织的分化程度与两者表达水平密切相关(P<0.05)，分化程度越高的肿瘤c-fos表达水平越高，而在分化程度越高的肿瘤中c-myc表达水平越低。结论可用c-fos、c-myc的表达水平判定皮肤鳞癌及分化程度及指导临床预后。

癌基因蛋白质c-fos；癌基因蛋白质c-myc； 鳞状细胞癌；皮肤肿瘤

皮肤鳞状细胞癌相对肺部等其他部位的鳞癌发病率较低，但在皮肤恶性肿瘤中发病率最高，其发病率在我国占皮肤科恶性肿瘤的78.5%～90.9%,严重威胁着人们的身体健康[1]。本文探讨了c-fos和c-myc蛋白在皮肤鳞癌中的表达与病理分化程度关系，以寻找有效可行的早期诊断和预后指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 标本来自河北医科大学第四医院皮肤科2000至2010年间手术切除皮肤鳞癌的标本79例，其中男51例，女28例；年龄28～83岁，平均年龄(65±3)岁。其中高分化鳞癌27例， 中分化鳞癌30例， 低分化鳞癌22例。随机选择8例非肿瘤性患者正常皮肤标本作为对照。

1.2 方法 蜡块标本，病理科切片。经常规脱蜡、水化后，微波抗原修复。选用中杉金桥公司兔抗人c-fos和c-myc多克隆抗体。采用DAB染色切片。阴性对照用 PBS(磷酸盐缓冲液)代替一抗。

1.3 结果判断 阳性表达为细胞核或细胞浆出现棕-深棕色颗粒，c-fos阳性颗粒主要位于细胞核内，c-myc在细胞核内及细胞浆中均见阳性颗。根据细胞着色深浅将其表达强弱分为：(1)阳性(++):细胞内棕色颗粒为≥50%;(2)阳性(+):细胞内有明显棕色颗粒但<50%；(3)阴性(-):细胞内无明显棕色颗粒；每张标本于高倍镜下随机选择5个视野，观察阳性颗粒细胞占总体细胞的比例。

1.4 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计数资料比较用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 C-fos、c-myc蛋白的表达情况 试验组表达率分别为70.9%(42/73)和78.5%(55/73)，对照组中均未见两种蛋白表达，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。见图1～4。

2.2 C-fos蛋白的表达与皮肤鳞癌的分化程度呈正相关(r=0.42，P<0.05)，分化程度降低C-fos表达也随之降低，而c-myc蛋白的表达则相反，与皮肤鳞癌的分化程度呈负相关(r=-0.87，P<0.05)。不同分化程度的皮肤鳞癌中蛋白表达差异有统计学意义(χ2值分别为7.26和7.47，P<0.05)。见表1、2。

表1 C-myc蛋白表达与皮肤鳞癌癌细胞分化程度的关系 例

表2 C-fos蛋白表达与皮肤鳞癌癌细胞分化程度的关系 例

3 讨论

原癌基因是一类重要“看家基因”，它在正常细胞内普遍存在，并且调控细胞增殖和分化。它只有在受到各种因素(物理、化学、生物)的作用下被活化失控时，才能产生基因突变或过度表达，才会使正常细胞转化为恶性细胞，肿瘤抑制基因和原癌基因控制正常细胞的生长和分化失调是导致人体恶性肿瘤发生的重要因素。基因产物表达异常和过度表达可引起肿瘤的恶性表型[1]。核蛋白癌基因中的研究热点是转录因子类的原癌基因核蛋白c-fos， c-myc与肿瘤的关系，c-myc是一种核内转录因子,人c-myc定位于8q24,由3个外显子和2个内含子组成,在静止期几乎不表达，它是快速早期反应的细胞内的一类信使,早期由静止状态进入增殖状态的细胞,各种因素的作用下c-myc表达明显增加，同时它是早期细胞增殖的必备基因,调控转录的反式作用因子是其在细胞增殖过程中的表达产物,这个因子也是细胞增殖信号传导的必不可少的因子[2]，另外c-myc还参与了多种基因表达和多种信号传递的启动,由于该基因内含多个转录因子的结合位点,因而它也是一种可调控基因,受到多种信号通路的调控[3,4]。

图1 C-fos在皮肤鳞癌中的表达(SP×400)

图2 C-myc在皮肤鳞癌中的表达(SP×400)

图3 C-fos在正常皮肤中不表达(SP×100)

图4 C-myc在正常皮肤中不表达(SP×100)

现已发现c-myc基因对睾丸、结肠、直肠、乳腺等恶性肿瘤的细胞分化具有作用[5-7]，但关于c-myc蛋白在皮肤鳞癌组织中的表达研究较少。另外虽然c-myc基因及c-myc蛋白定位于细胞核内，但由于c-myc蛋白不稳定，常规固定方法易出现胞浆弥散，故本实验中，免疫组化则出现胞浆着色。c-fos是编码核蛋白的癌基因，属于立早基因(early response genes，ERG)的成员，由5个外显子组成，表达产物Fos由381个氨基酸组成，此类基因受到各种因素(物理、化学、生物)的作用下，生成的转录因子，作用于正常细胞的生长、发育和分化[8]。Fos基因蛋白已知有四种 (c-fos、Fos B、Fra-1及Fra-2)参与构成转录激活因子(Ap-1)，其中c-fos为主，其表达产物也定位于细胞核，另外以c-fos二聚体形式的Ap-1生物学活性最强。据相关报道，细胞增殖与Ap-1密切相关，在肿瘤转化乃至逆转中均起关键作用[9]。本研究用免疫组化方法发现，c-fos、c-myc蛋白在正常皮肤组织中不表达，在皮肤鳞癌中的表达分别为70.9%和78.5%。表明皮肤鳞癌的发生发展与癌基因c-fos、c-myc关系密切,这与黄炳臣等[10]的研究结果相似。同时，在高分化鳞癌中c-fos的表达明显比低分化鳞癌高，而c-myc正好相反，在低分化鳞癌表达较高(P<0.05)，由此可见，在临床上判定皮肤鳞癌分化程度可用这两种基因的表达水平作为评判的指标，另外，两者可以为诊断早期皮肤鳞癌提供了一个新标记。此外c-myc表达高阳性者及c-fos表达低阳性者预后较差。通过对c-fos和c-myc的表达情况的研究发现，二种核蛋白癌基因的表达无正相关关系，与Kanda等[11]认为c-myc在高分化者中表达水平高的文献报道相反。本研究发现高分化者中表达水平较低，与崔雪林[12]结果一致，进一步说明c-myc癌基因激活将引起细胞向恶性转变，导致肿瘤发生。刘冬梅等[13]研究了c-fos,c-myc基因表达与外阴鳞癌的关系，结果c-fos表达阳性率随外阴浸润程度加深而降低,c-myc表达阳性率随外阴癌浸润程度加深而升高，与本研究结果也吻合。

两种核蛋白的癌基因的表达增强的方向不同，其作用机制可能有别，可能是细胞增殖的触发点不同,具体机制有待进一步深入研究。由于c-fos是立早基因，仅细胞周期早期发挥作用，肿瘤细胞形成后，其增殖就靠自主生长能力，因此出现癌组织内c-fos表达下降的情况，由此猜想c-myc可能是主要对细胞周期中晚期肿瘤细胞起作用，因而表现出随着皮肤鳞癌分化程度的降低，c-fos表达逐渐减少，而c-myc表达逐渐增多。另外它们在皮肤鳞癌的发生中都是高表达，只是阶段不同，因此也可能存在相互作用，并最终影响其他基因的表达，使细胞增殖失控，发生癌变。采用免疫组化学技术对c-fos和c-myc进行定位研究，有助于了解其功能，还可能有助于寻找新的高特异性的导向载体，在皮肤鳞癌的治疗方面发挥作用。

1 Levin WJ,Press MF,Gaynor RB,et al.Expression patterns of immediatie early transcription factors in human npn-small cell lungcancer.Oncogene,1995,11:1261.

2 Patel JH,McMahon SB.Targeting of MIZ-I is essential for MIC mediated apoptosis.Biol Chem,2005,12:1074-1084.

3 Marinkovic D,Marinkovic T,Kokai E,et al.Identification of novel Myc targetgeneswith a potential role in lymphomagenesis.Nucleic Acids Res,2004,32: 5368-5378.

4 He C,HuH Q,Braren R,et al.c-myc in the hematopoietic lineage is grucial for its angiogenic function in themouse embryol.Development,2008,135:2467-2477.

5 Watson JV,Stewart J,Evan GI,et al.The clinical significant of flow cytometric C-myc oncoprotein quantitation in testicular cancer.Br J Cancer,1986,53:331.

6 Sikora K,Chan S,Evan G,et al.C-myc oncogene expression in colorectal cancer.Cancer,1987,59:1289.

7 Tauchi K,Tsusumi Y,Hari S,et al.Expression of heat shock protein 70 and C-myc protein in human breast cancer:an immunohistochemical study.Jpn J Clin Oncol,1991,21:256.

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9 Kanen L,Kate A,Koger B.DNA-bound fos proteins activate transcription in yeast.Cell,1988,52：179-184.

10 黄炳臣,黄永秩,罗春英,等.肝细胞癌中c-myc和c-fos表达及其意义.临床与实验病理学杂志，2010,8,26:484-486.

11 Kanda Y,Nishiyama Y,Shimada Y,et al.Analysis of gene amplification and overexpression in human esophageal carcinoma cell lines.Int J Cancer,1994,58:291.

12 崔雪林，沈魁，赵日省，等.C-myc癌基因产物在胰腺癌组织中的表达及其临床意义的研究.中国医科大学学报，1993，22:186-189.

13 刘冬梅，武昕.c-fos,c-myc基因表达与外阴鳞癌的关系研究.辽宁医学杂志，2011,25：120-121.

Expressions and significance of c-fos and c-myc protein in skin squamous cell carcinoma

GENGChunjie*,ZHANGGuoqiang,WANGZhengxiang,etal.*DepartmentofDermatology,TheThirdHospitalofXingtaiCity,Hebei,Xingtai054000,China

ObjectiveTo investigate the changes of expression levels of c-fos,c-myc during pathogenesis and development of skin cell squamous carcinoma.MethodsThe expression levels of c-fos,c-myc were detected by immunohistochemistry in 79 cases of skin squamous cell carcinoma,and the results were compared with those in normal tissues.ResultsThe c-fos and c-myc were not expressed in normal skin,however,which were expressed in skin squamous cell carcinoma,the positive rates of c-fos and c-myc were 70.9% and 78.5%,respectively.The expression levels of c-fos and c-myc were closely correlated to the differentiation degree of tumor tissue (P<0.05).The higher differentiation degree of tumor tissue,the higher expression levels of c-fos,however,the higher differentiation degree of tumor tissue,the lower expression levels of c-myc.ConclusionThe detection of expression levels of c-fos and c-myc can evaluate differentiation degree of skin squamous cell carcinoma and clinical prognosis.

oncogene protein c-fos; oncogene protein c-myc；carcinoma of squamous cell; skin neoplasms

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.06.006

054000 河北省邢台市第三医院皮肤科(耿春杰)；河北医科大学第四医院(张国强、李美洲、高顺强)；河北省沧州市中心医院皮肤科(王正想)

高顺强，050011 河北医科大学第四医院皮肤科；

E-mail: gshunqiang@medmail.com.cn

R 739.5

A

1002-7386(2014)06-0822-03

2013-10-23)