芪夏消瘿合剂对SD大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的影响*

李 玲 陈晓雯

（安徽中医学院第一附属医院，安徽 合肥 230031）

芪夏消瘿合剂对SD大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的影响*

李 玲 陈晓雯△

（安徽中医学院第一附属医院，安徽 合肥 230031）

目的 观察芪夏消瘿合剂对SD大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）的影响。方法 将30只SD大鼠随机分为3组：正常对照组、EAT组、中药治疗组。对照组饮用自来水，其他各组实验SD大鼠饮用配制的0.05%碘化钠水溶液，并且在高碘的基础上皮下注射完全弗氏佐剂、甲状腺球蛋白和不完全弗氏佐剂，建立EAT动物模型。中药治疗组在不同的时间灌胃给予芪夏消瘿合剂治疗，观察大鼠甲状腺自身抗体水平的变化，并取完整甲状腺组织进行HE染色，观察其形态变化。结果 （1）造模第8周末，检测SD大鼠甲状腺球蛋白（TgAb）和甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）。EAT组和治疗组的TGAb和TPOAb水平与对照组相比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；EAT组和治疗组之间 TGAb和 TPOAb水平相当（P＞0.05，检验效能＞0.999）；（2）实验第12周末，EAT模型组SD大鼠TGAb和TPOAb水平明显高于正常对照组（P＜0.01）；中药治疗组虽未能使TGAb和TPOAb水平恢复正常，其值明显低于EAT组 （P＜0.01）。结论 芪夏消瘿合剂能够改善EAT大鼠的免疫功能紊乱状况。

芪夏消瘿合剂 自身免疫性甲状腺炎 甲状腺自身抗体 实验研究

桥本甲状腺炎（HT）目前是公认的一种器官特异性的自身免疫性甲状腺疾病（AIT），为甲状腺炎中常见的一种类型。其发病机制复杂，主要为自身免疫功能异常，使机体细胞免疫反应和体液免疫反应发生紊乱，从而产生大量的针对甲状腺组织的自身抗体，造成甲状腺在组织形态学上的改变以及功能上的改变。本实验观察芪夏消瘿合剂对大鼠模型的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用SPF级雌性SD大鼠30只，体质量 100～120 g，动物合格证号：SCXK（皖）2011-002。 8～10周龄。标准饲料（碳水化合物60%、脂肪11%、蛋白质29%）喂养，材料均购自安徽医科大学动物实验中心。

1.2 试剂及药物 （1）完全弗氏佐剂（CFA）、不完全弗氏佐剂 （IFA）（美国Sigma公司）、猪甲状腺球蛋白（PTg），碘化钠（上海宝新化工科技有限公司），芪夏消瘿合剂（购自安徽中医学院第一附属医院），甲状腺球蛋白（TgAb）和甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）放射免疫检测试剂盒（北京北方生物技术研究所）。（2）芪夏消瘿合剂：黄芪10 g，炒白芍 10 g，夏枯草 10 g，玄参10 g，桔梗10 g，生甘草10 g。由安徽中医学院第一附属医院制剂中心生产，生产批号：20090520，规格：每袋10 g。

1.3 分组与造模 将30只SD大鼠随机分成3组：正常对照组、自身免疫性甲状腺炎（EAT）组、中药治疗组，每组10只。大鼠置于SPF级环境下，饲喂标准基础饲料，自由进食和饮水。除对照组饮用自来水，其余各组大鼠饮用0.05%的碘化钠水溶液 （1L水中加入0.64 g碘化钠配制而成），现配现用，避光放置。SD大鼠均参照文献［1-2］建立EAT动物模型：将经磷酸盐缓冲液（PBS）溶解的PTg与CFA按1∶1比例混合，充分乳化制成油包水乳剂，SD大鼠适应性饲养1周后，于实验第2周对大鼠进行皮下多点免疫注射（100 μg/只，即0.4 mL/只）为初次免疫，连续3周，注射部位分别为足跖、背部皮下、腹腔皮下处。实验第5周开始取PTg与IFA充分混合后作加强免疫，以后每周加强免疫1次，至第8周末结束。

1.4 给药方法 造模成功后，治疗组于第9周开始给予中药灌胃。对照组仅予自来水，EAT组给予配制的0.05%碘化钠水溶液，并且在高碘的基础上皮下注射完全弗氏佐剂、甲状腺球蛋白和不完全弗氏佐剂。每组大鼠以成人9倍的剂量每日灌胃1次，连续灌胃4周，每日灌胃剂量为 0.2 mg/（kg·d），直到实验结束，每周称取体质量1次，并调整灌胃液的剂量。

1.5 标本采集与检测 第12周末处死所有动物，留取相关标本进行实验研究。（1）TgAb和TPOAb水平的检测。造模第8周后，以毛细玻璃管取眶静脉血置于试管中，离心分离获得血清，用放射免疫分析法（RIA）检测血清中的TgAb和TPOAb水平。灌胃至第12周，处死所有实验动物，腹主动脉取血，立即分离血清，保存于-70℃冰箱。（2）甲状腺组织形态的变化。实验结束后，取SD大鼠完整甲状腺组织，固定于10%中性甲醛中，常规石蜡脱水包埋，切片，HE染色，光镜下观察甲状腺组织病理形态改变，包括滤泡大小、上皮形态、上皮及滤泡间的淋巴细胞浸润。

1.6 统计学处理 应用SAS9.2统计软件分析。计量资料以（±s）表示，两组计量资料之间比较采用 t检验，3组及以上计量资料之间比较采用方差分析，计数资料之间比较采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 实验第8周后3组SD大鼠血清TgAb和TPOAb水平比较 见表1。结果示实验造模成功。与对照组比较，EAT组及中药治疗组SD大鼠TgAb和TPOAb水平明显高于对照组（P＜ 0.01）；（2）与 EAT 组比较，中药治疗组的SD大鼠TgAb和TPOAb水平之间差异无统计学意义（P＞ 0.05）。

表1 实验第8周大鼠血清TgAb和TPOAb水平（IU/mL，±s）

表1 实验第8周大鼠血清TgAb和TPOAb水平（IU/mL，±s）

与对照组比较，*P＜0.05。

组别 n TGAb TPOAb对照组 10 0.22±0.08 0.56±0.03 EAT 组 10 41.13±7.41* 40.19±3.61*中药治疗组 10 39.88±6.50* 39.96±4.24*

2.2 实验第12周芪夏消瘿合剂对自身免疫性甲状腺炎大鼠血清TgAb和TPOAb水平的影响 见表2。EAT模型组大鼠TgAb和TPOAb水平明显高于对照组（P＜0.01）；中药治疗组虽未能使TgAb和TPOAb水平恢复正常，但与EAT组比较，其水平明显低于EAT组（P＜0.01）。

表2 实验第12周末各组血清TgAb和TPOAb水平（IU/mL，±s）

表2 实验第12周末各组血清TgAb和TPOAb水平（IU/mL，±s）

与对照组比较，**P＜0.01；与 EAT 组比较，△P＜0.01。

组别 n TgAb TPOAb对照组 10 0.22±0.08 0.56±0.03 EAT 组 10 61.65±4.95** 49.39±7.00**中药治疗组 10 31.19±3.66**△ 30.26±2.84**△

2.3 光镜下观察大鼠甲状腺病理组织形态变化 对照组：甲状腺组织滤泡呈圆形或椭圆形，大小适中，滤泡腔内可以观察到丰富的胶质，未见炎细胞浸润。EAT组：甲状腺组织滤泡大小不等，滤泡壁较薄，上皮细胞数量少，可见广范的炎性细胞浸润。中药治疗组：炎性细胞较EAT组明显减少，滤泡数量明显增多，滤泡腔内胶质染色深。见图1。

3 讨 论

目前本病的治疗上，西医仅予以对症治疗，主要包括抗甲状腺药物治疗、甲状腺激素替代治疗、免疫治疗以及手术治疗等。西医治疗存在副作用大，且容易复发的缺点。中医治疗可以从整体上，调整人体的脏腑功能，提高机体的免疫，使本病的治疗在安全性和疗效稳定性方面均具有独特的优势。

HT根据其症状表现可将其归属于中医学 “瘿病”中的“肉瘿”、“气瘿”或“石瘿”范畴。本病的病因主要与情志、饮食、水土及体质等因素有密切关系。病理因素致气滞痰凝壅结于颈前，日久则血脉瘀阻，终致气血痰瘀四者合而为患。故本病属本虚标实之证，长期情志不调为其主要病因，气滞痰凝血瘀为其基本病机。病变可以涉及肝脾等多个脏腑，治疗的关键是疏肝健脾、活血化瘀、软坚散结。

图1 各组甲状腺病理切片（HE，400倍）

本实验所用药物芪夏消瘿合剂方是由本文通信作者陈晓雯教授根据HT的发病机制，以中医辨病、辨证理论为指导，同时结合大量的文献报道，经过长期的临床实践，总结得出。在长期的临床实践中，收到了良好的疗效。方中黄芪为君药，生用具有健脾补中、升阳举陷、益胃固表、利尿、托毒生肌之功效。白芍苦、酸，性微寒，归肝、脾经，具养血和营、缓急止痛、敛阴柔肝之功效，与黄芪以益气健脾、养阴柔肝，共为为方中之君药。夏枯草、桔梗具有化痰散结之效，玄参味甘、苦、咸，性微寒，入肺、肾经，有凉血滋阴，泻火解毒功效，与夏枯草共清肝火，散郁结相须为用，共为为方中之臣药。生甘草取其补中健脾，又能调和药性，兼使药之用，白芍与甘草配伍，白芍主入肝经，酸敛苦泄，性寒阴柔，能养敛阴，泻肝柔肝，甘草主入脾经，为甘性缓，能和逆气而补脾胃，两药合用，酸甘化阴，肝脾同治，共凑缓肝和脾，益血养阴之功。全方共奏益气健脾、养阴柔肝、化痰消瘿之效。

药理学研究表明，夏枯草、桔梗等能够调节机体的免疫功能［1-2］。夏枯草能够增强肾上腺皮质功能，抑制机体的细胞和体液免疫反应；桔梗对细胞免疫反应有抑制作用，并且能够促进肾上腺糖皮质激素的分泌，有激素样作用。黄芪对机体特异性细胞及体液免疫功能有增强作用，可提高机体的免疫功能、防御能力以及抗瘤能力［3］。白芍主要化学成分为白芍总苷［4］，能降低或升高环磷酰胺诱导免疫功能增强或降低小鼠的免疫功能，有功能依赖性的双向免疫调节作用。这些药物的免疫抑制作用和激素样作用可能就是芪夏消瘿合剂降低AIT模型甲状腺自身抗体的主要原因。

本研究应用SD大鼠的AIT实验模型进行研究，结果表明芪夏消瘿合剂不仅可以改善HT甲状腺自身抗体水平，还可以预防自身免疫性甲状腺疾病的发生和发展，为临床上预防和治疗自身免疫性甲状腺疾病提供了一定的思路，但对其确切的机制仍有待于进一步研究。

［1］侯家玉.中药药理学［M］.北京.中国中医药出版社，2002.

［2］骆和生.中药与免疫（祛痰平喘类药）［M］.广州：广东科技出版社，1990：8.

［3］焦艳，闻杰，于晓红，等.膜荚黄芪茎叶总黄酮对小鼠细胞免疫功能的影响［J］.中国中西医结合杂志，1999，19（6）：356.

［4］张泓.白芍总苷的免疫调节作用计机制［J］.中国药理学与毒理学杂志，1990，4（3）：190.

Influence of Qixiaxiaoying Mixture on the Experimental Autoimmune Thyroiditis

LI Ling，CHEN Xiaowen.The first Affiliated Hospital of Anhui College of Traditional Chinese Medicine，Anhui，Hefei230031，China

Objective:To investigate the influence ofQixiaxiaoying Mixtureon the experimental autoimmune thyroiditis in SD rats.Methods:30 SD rats were randomly divided into three groups including the normal control，theexperimental autoimmune thyroiditis （EAT） group，and the Chinese medicine treatment group.Except the normal controls，two other groups of rats were raised with water containing 0.05%NaI.EAT models were set up by some drugs such as the complete Freund′s adjuvant，the thyroglobulin and the incomplete Freund's adjuvant.Qixiaxiaoying Mixturewere given at different time in order to observe the change of the level about thyroid autoantibodies in the period of experiment.Results:（1）After eight weeks of molding，in EAT group and Chinese medicine treatment group.The differences of the levels of TGAb and TPOAb were not significance between above groups（P＞0.05）.But comparing with normal group，these differences were obviouse（P＜0.01）.（2）In the end of twelfth week，the levels of TGAb and TPOAb in EAT group were higher than those in normal group（P＜0.01）.Although，the Chinese medicine treatment group were failed to make TGAb and TPOAb level to return to normal，the levels of TGAb and TPOAb in Chinese medicine treatment group were lower than those in EAT group （P＜0.01）.Conclusion:Qixiaxiaoying Mixturecan prevent and improve immune function disorder status in SD rats with autoimmune thyroiditis.

Qixiaxiaoying Mixture；Autoimmune thyroiditis；Autoantibodies；Experimental research

R285.5

A

1004-745X（2014）07-1233-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.07.010

安徽省年度科研项目（12070403074）

△通信作者

2013-12-31）