转化生长因子-β1在家兔羊水栓塞后肺损伤中的作用

岳 艳，范 丽，刘伯毅（湖北医药学院附属人民医院妇产科，湖北十堰 442000）

羊水栓塞（amniotic fluid embolism，AFE）是由于羊水进入母体血液循环而引起的一系列严重的临床综合征，发病急，病情进展迅速，病死率高。AFE后患者易出现急性肺损伤与急性呼吸窘迫综合征（ARDS），部分患者死于严重的低氧血症。本研究旨通过动物实验，探讨AFE后肺损伤的机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物模型制作 健康妊娠晚期（24～26d）家兔20只，体质量3.3～4.0kg（湖北医药学院动物实验中心提供）。随机分为两组：对照组（生理盐水组）及羊水组，每组各10只。术前禁食12h，禁水2h。用3%戊巴比妥钠30mg／kg静脉注射麻醉，仰卧固定于兔台上，固定头部和四肢，备皮，常规局部消毒、铺巾，腹正中线切口10cm，暴露子宫并切开子宫，取出胎兔、胎盘，用注射器抽取羊膜腔羊水300mL备用。羊水组家兔经耳缘静脉注射羊水3mL／kg，对照组注射生理盐水3mL／kg，1h后处死动物，切开家兔胸腔，取肺组织备用。

1.2 实验方法

1.2.1 病理学检查 取一小块肺组织用4%多聚甲醛溶液固定5h，用磷酸缓冲液（PBS）冲洗，石蜡包埋、切片、HE染色，在显微镜下观察肺组织病理学变化。

1.2.2 肺组织转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的检测 取肺组织称重，加生理盐水（按100mg肺组织，加生理盐水0.9mL比例），用玻璃匀浆器制备肺组织匀浆，以1 000r／min的速度离心20min，取上清液，置于-20℃冰箱冻存，采用链霉素亲和素-生物素-过氧化酶复合物（SABC）法对肺组织 TGF-β1蛋白表达进行免疫组织化学染色（试剂盒及TGF-β1的单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司）。按照试剂盒操作步骤操作，以PBS代替一抗作阴性对照，阳性染色为细胞质呈棕黄色。采用MIAS-2000医学图像分析系统，进行蛋白半定量分析，以最大灰度值反映TGF-β1蛋白表达量。

1.3 统计学处理 采用SPSS15.0软件进行统计分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 肺组织病理变化 羊水组可见肺间质及肺泡水肿、充血，肺泡可见炎症细胞浸润（图1）。

2.2 肺组织TGF-β1见图2。对照组肺组织TGF-β1呈阴性表达，为（5.02±0.76）μg／L；羊水组肺组织 TGF-β1胞质可见棕黄色染色，呈阳性表达，为（19.85±1.92）μg／L，两组 TGF-β1水平比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

图1 家兔肺组织（HE×200）

图2 家兔肺组织TGF-β1的表达

3 讨 论

本研究中羊水组可见肺间质及肺泡水肿、充血，提示肺部发生肺损伤。近年来，AFE后肺部病理变化受到重视［1］，许多患者AFE后因ALI／ARDS，而出现顽固性低氧血症危及患者生命AFE后肺损伤的机制：（1）羊水进入肺循环导致肺血管痉挛、肺动脉高压、换气功能下降［2］；（2）肺部白三烯、前列腺素、补体等物质释放，导致肺部炎性反应，引起肺损伤［3］；（3）大量中性粒细胞在肺泡腔内黏附、聚集、活化，介导炎性反应加重肺损害［4］。部分研究发现，AFE后肺损伤发病机制及病理生理变化复杂，某些机制不明［5-6］。

TGF-β是一种多功能细胞因子，TGF-β1是TGF-β亚型，能调节多种细胞的增殖、分化、凋亡和合成细胞外基质等，在组织的发生、发育及损伤后修复过程中发挥重要作用［7］。TGF-β1在多种细胞和组织中均有表达，在肺部主要表达于气道上皮及肺泡巨噬细胞，妊娠期可表达于胎盘滋养层细胞、子宫蜕膜细胞、肌层细胞及羊水中，对滋养层细胞和蜕膜细胞内分泌、免疫及黏附分子表达功能及胚胎发育均具有重要的调节作用［8］。AFE后TGF-β1与肺损伤的关系目前并无相关研究，本实验发现，羊水组肺组织TGF-β1明显升高（P＜0.05），而对应的病理切片有炎症细胞浸润和肺实质及间质水肿和充血。表明TGF-β1在AFE后肺损伤发病机制上有重要作用。肺损伤后肺组织TGF-β1表达升高机制尚不明确［9］。升高的TGF-β1引起肺损伤的机制：（1）TGF-β1作用于细胞纤维化的多个环节，刺激各种细胞外基质起作用，使纤维化降解抑制剂的合成增加，基质降解酶减少，导致肺纤维化，加重肺损伤［10］；（2）TGF-β1抑制肺表面活性物质，诱导肺细胞凋亡［11］，导致肺泡壁上皮细胞和血管内皮细胞通透性增高、肺泡炎症和水肿；（3）TGF-β1抑制肺内皮细胞、上皮细胞增殖［12］，使损伤的肺组织得不到及时的修复。

综上所述，AFE肺损伤发生与TGF-β1表达升高密切相关，从而导致肺组织损伤、纤维化，同时因损伤的肺组织不能及时修复，加重肺损伤。抑制TGF-β1表达，可以减轻或预防肺损伤，改善AFE患者预后。

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