左归丸中马钱苷含量测定方法的研究

王 猛 孙 妍

（哈尔滨一洲制药有限公司·150086）

左归丸由熟地黄、山茱萸、川牛膝、山药、枸杞、菟丝子等组成。山茱萸主要用于补益肝肾，收敛固涩、固精缩尿止带、止崩、止汗，此外还可用于生津止渴等症，还具有抗炎、抗菌、抗氧化、降脂等功效。山茱萸中含有挥发性成分、环烯醚萜类成分、鞣质和黄酮等4 大类成分，其中环烯醚萜类成分具有抗炎、抗氧化的作用，还对心脑血管、神经系统都具有很好的疗效，而环烯醚萜类成分中的马钱苷最具有代表性，在中国药典中已经记载了马钱苷作为山茱萸中药的质量控制指标之一。本实验采用了高效液相色谱法对左归丸中的马钱苷进行了含量测定方法的研究。

1 仪器与试剂

Waters2695e 高效液相色谱仪(美国沃特世公司，自动进样器)；empower 色谱工作站；紫外检测器2489；METTLER AE240 电子分析天平；AS20500BDT 型超声波清洗器；SunfireC18 色谱柱(150mm×4.6mm，5um)。

马钱苷对照品(中国药品生物制品检定所111640－200604) 甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯；左归丸批号(101003、110202、110614 )。

2 测定方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS（5μm，4.6mm×150mm）；流动相：乙腈－0.1%磷酸溶液(15：85；流速：1.0ml/min；检测波长：236nm。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取马钱苷对照品适量，加甲醇制成每1ml 含50ug 的溶液，即得。

2.3 提取方法的确定

2.3.1 提取溶媒的确定 在供试品溶液的制备过程中，分别选用了甲醇、乙醇、50%甲醇进行回流提取，结果表明50%甲醇提取分离效果、峰形及含量为最好，所以选择50%甲醇为提取溶剂。

2.3.2 提取时间的选择 取供试品适量，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇超声处理15分钟使溶散，分别加热回流提取0.5、1、1.5、2 小时，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。含量测定结果表明：四种提取时间的含量无明显差异，为节约成本及缩短处理时间，故选用50%甲醇加热回流提取1 小时。

2.3.3 供试品溶液的制备 取供试品，研细，称取1.0g，置干燥具塞锥形瓶中，密封，加50%甲醇25ml超声处理15min使溶散，加热回流提取1 小时，放冷，滤过，即得。

2.4 专属性考察

依照处方取除山茱萸以外的药材，按样品制备工艺制备阴性对照样品，照2.3.3 供试品溶液的制备方法制成阴性对照液，依上述方法测定，结果在供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置检测出马钱苷，阴性对照液无干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 标准曲线的制备

分别精密量取上述对照品溶液0.5、1、2、4、6、9、10ul，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。以峰面积(Y)为纵坐标，以进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程：Y=117358.6609X+15499.26087 r=0.9992。结果表明马钱苷的进样量在0.00271～0.04878ug。

2.6 精密度考察

精密吸取马钱苷对照品溶液10ul，按照上述的色谱条件，连续进样6 次，记录色谱峰.结果，以马钱苷峰面积计算RSD ＝1.0%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性考察

称取同一批号的样品6 份，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算供试品中马钱苷含量，其RSD ＝1.7%，表明本方法的重复性良好。

2.8 稳定性考察

取同一供试品溶液分别在制备后0、1、4、8、12、16、24小时进样10ul，测定峰面积，以马钱苷峰面积计算RSD ＝2.5%，结果显示，供试品溶液在24 小时内基本稳定。

2.9 加样回收率考察

精密称取已知含量的同一批的样品6 份，每份约0.5g，每份分别精密加入5ml 的马钱苷对照品溶液，在精密加入20ml 的甲醇，按照供试品溶液的制备方法进行制备，结果平均回收率为99.64%，RSD ＝1.5%，见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.10 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定左归丸三批样品中马钱苷的含量，结果三批样品的含量分别为0.4887mg·g－1、0.4904mg·g－1、0.4856mg·g－1。

3 讨论

本实验表明此方法可用于左归丸中马钱苷含量测定，左归丸中马钱苷的含量为每克不低于0.4856mg。

[1] 卫生部药品标准[S].中药成方制剂.第一册，1993：54－54.

[2] 中国药典[S].一部，2010：26-26.

[3] 樊琪.左归丸中毛蕊花糖苷含量测定[J].中国科技纵横，2012，(6)：254-254.

[4] 常玲彬.山茱萸多糖提取工艺优化及马钱苷含量测定[J].甘肃农业科技，2011(11)，26-29.

[5] 宴桂敏，林燕飞，孙静芸,等.山茱萸中马钱苷的样品处理方法改进[J].中国药业，2005（10）：38-39.