异育银鲫胚胎发育的观察与不同温度对其影响的研究

白小宁 张 荷

（1.凤翔县水利局 陕西 宝鸡 721400）（2.贵阳市乌当区畜牧技术服务中心 贵州 贵阳 550018）

异育银鲫（Allogynogenetic silver Crucian Carp）是以黑龙江省方正县双风水库的天然雌核发育银鲫（♀）与江西省兴国县产的红鲤（♂）杂交，刺激卵子雌核发育产生的全雌性后代。这些后代由异源精子刺激银鲫卵子雌核发育而来，并且有促进生长等异精效应，因而称其为异育银鲫。异育银鲫自20世纪80年代初在全国开始推广养殖后，目前已成为淡水养殖中的重要品种，其产量约占常规养殖鱼类总产量的15℅以上，产值占常规养殖鱼类总产值的75℅以上。水温与鱼类的生长和繁殖有着极密切的关系，本实验通过观察异育银鲫胚胎发育各个阶段的特征，以及不同温度环境下对胚胎发育的影响，以期寻找最适的胚胎发育温度，提高孵化率。

1 材料与方法

1.1 试验的时间与地点

试验于2014年3月份至8月份在陕西省安康市水产基地完成。

1.2 亲鱼的选择与培育

选择体质健壮，体重在250g以上的异育银鲫和兴国红鲤雄鱼，分池培育，至各自性腺发育良好。即母本银鲫腹部膨大柔软卵巢轮廓明显，生殖孔突出微红，轻压腹部时有少量卵粒流出；父本兴国红鲤选择第二特征明显，轻压腹部时有乳白色精液流出的亲鱼。

1.3 实验方法

1.3.1 试验分组及亲鱼的繁殖

按不同温度区域分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，Ⅰ组温度为13～17℃；Ⅱ组温度为18～22℃；Ⅲ组温度为23～25℃，每组试验设置三个平行组，平均每组试验约用亲鱼20kg、25尾左右，共用亲鱼60kg、80尾。对三组培育的亲鱼进行繁殖试验，繁殖均按常规技术进行，一次性注射催产剂，自然授精，微流水孵化。观察催产后亲本发情时间及亲本流产、顺产、和难产情况；共进行9次繁殖试验。

1.3.2 胚胎发育观察与记录

亲鱼催产达到效应时间后母本亲鱼产卵，同时父本亲鱼排精，精卵结合后黏附于事先铺设鱼巢上。胚胎发育期间继续进行微流水刺激，每隔2h测量并记录催产池水温。受精卵孵化期间，抽样计算受精率，并定时抽取100个样品进行目测和镜检，观察胚胎发育进程并选择典型时期的胚胎作图并拍照记录，计算孵化率。

1.4 实验仪器与设施

催产剂：LRH-A2激素，PG激素，HCG激素；，连续变倍解剖镜（XTZ-E）；显微镜（YSI.55.DISSOLVEO.OXYGEN Model#55112FT.SW:03A0858.AV）数码摄象系统（Nikon E4500）。

2 结果

2.1 异育银鲫胚胎发育期

异育银鲫胚胎发育过程的分期及各期典型特征如下：

受精卵：卵质分布较均匀，极性不明显。（见图1，正面观。）

卵裂期：首先胚盘突起，原生质集中于卵子的动物极而形成隆起的胚盘，同时受精膜与围卵周隙形成。之后经过多次分裂，将胚盘分成32个卵裂球。（见图2，侧面观。）

囊胚期：胚盾经多次卵裂，细胞越分越小，最后形成囊胚。胚盘处的细胞界线不清，高高隆起在植物极上，形成囊胚层。之后囊胚层逐渐变低，其表层细胞开始向卵黄部分下包。卵黄部位的植物极开始有节奏的变形运动，时而突出，时而凹陷，最后恢复为圆形，每一周期需60～90s。（见图3，侧面观。）

原肠期：胚盘下包，胚盾明显延长，卵黄部分变相运动十分明显，卵黄部位的中间部分有时收缩而使卵黄分成两部分，犹如分成两叶，之后胚盘继续下包至4/5，胚盾变狭窄，神经板形成，胚体转成侧卧，卵黄部分变形运动仍十分明显。最后胚盘完全包围了卵黄部分，胚体开始形成，胚孔开始封闭，卵黄部位变形运动消逝，神经板中线略下凹，脊索呈柱状。（见图4，正面观。）

眼基出现期：胚体前端膨大形成脑部，在前脑两侧，出现一对椭圆形的突起，即眼的原基。体节出现四到五对，神经板头端隆起。之后圆锥状尾部的边缘生长出透明膜状的鳍，胚体有十五到十六对肌节，眼囊清楚，中间出现凹陷，在脑后方两侧各形成一椭圆形淡色的耳囊。胚体肌肉开始微微收缩，眼囊中出现晶体且清晰为形，体节二十对左右。在耳囊下方出现鳃板，为长圆形隆起，尾与胚体长轴成锐角。在卵黄囊前端眼的下方出现一管状心脏，心脏搏动由微弱至有力，心跳每分钟可达35～58次。（见图5，侧面观。）

出膜期：由于尾部不断摆动和头部孵化酶的作用，仔鱼从尾部脱膜而出，肌节三十五对以上，卵黄囊大，形似梨状。第一对鳃裂形成。（见图6，侧面观。）

2.2 不同温度对异育银鲫催产和鱼卵孵化的影响

2.2.1 适宜温度范围

从三个温度区间的试验结果可以看出，适宜的繁殖水温为18～22℃之间，效应时间14～16h，发情后2～4h产卵结束。催产率96.4%，平均绝对产卵量1.2万粒，相对产卵量为4.62万粒/kg。

2.2.2 低温对催产和孵化的影响

Ⅰ组催产试验，水温一直在13～17℃，尽管催产药物剂量加大30～50%，效应时间仍达22～30h，产卵过程持续8～15h，催产率75.3%，平均绝对产卵量0.68万粒，相对产卵量2.72万粒/kg。鱼卵受精率为72%，低于一般情况80%的受精率。孵化率为71%，分别比Ⅱ、Ⅲ两组低20%和16%。

2.2.3 高温对催产和孵化的影响

Ⅲ组催产试验，水温一直在22～27℃，效应时间12～14h，产卵过程持续2～4h。催产率82.3%，平均绝对产卵量1.16万粒，相对产卵量4.46万粒/kg。受精率93%，孵化率87%，接近正常温度的水平。

3 讨论

在18～22℃这一温度范围内异育银鲫性腺发育正常且较为一致，雌鱼产卵顺利，极少发生难产，卵子受精率94%，孵化率91%。在13～17℃的低温情况下不仅催产的效应时间加长，雌鱼卵巢发育进程极不一致，导致产卵时间延迟8～15h，很大一部分应发育到第Ⅴ期的卵子停留在Ⅳ末，致使产卵量只有正常温度的一半，难产和流产亲鱼较多。

在13～17℃低温催产条件下，受精率比较低是由部分鱼卵不够完全成熟导致。孵化率低的原因是，除观察到胚胎发育过程夭折之外，还观察到部分发育成鱼苗，在卵膜中活动，若不用解剖针剖开卵膜，则始终不能破膜而出。一些研究鱼类和两栖类胚胎发育的专家认为，这是由于低温影响，胚体有一种孵化腺体不能分泌卵膜溶解酶而造成的[8]。低于适宜温度下限，温度影响较大，不仅影响产卵、受精和孵化，而且孵出的鱼苗体质较弱，抗病力较低。

在23～25℃的高温下对催产影响不十分严重，主要表现在卵子发育时速加快，较易造成少数鱼卵子过熟而难产，即由Ⅴ期转化成Ⅳ期，或因拉网操作和人工授精不及时而流产，催产率和产卵率稍低于正常温度。说明高于适宜温度上限，温度的影响不十分严重。

表1 不同水温对异育银鲫催产和孵化的影响

因此，人工催产应掌握天气变化规律，选择好繁殖日期，防止寒流侵袭。据报道，在自然条件下，随着温度的变化，银鲫的繁殖时间有所提前或推迟，一般在水温17℃左右开始自然繁殖。一般认为这是银鲫开始繁殖的临界温度，但是在试验过程中，我们发现异育银鲫开始产卵的时间最早可在13～16℃。