彩鲫的仔鱼发育观测试验

白小宁 熊 燕

（1.凤翔县水利局 陕西 宝鸡 721400）（2.云南省渔业科学研究院 云南 昆明 650111）

彩鲫（Color Crucian carp），在分类学上属于鲤形目、鲤科、鲤亚科、鲫属。人工养殖品种，其形态特征与普通鲫鱼相似，个体较小，可食用，体形侧扁，高且厚，腹部圆；头短小，吻钝；口端位，无口须；背鳍和臀鳍最后的不分枝鳍条是后缘有锯齿的硬刺，背鳍基较长，尾鳍叉型或燕尾型；体色鲜艳美丽，有全身纯白、纯红、纯黑、金黄，黑紫或一身五色俱全，具有较强的观赏性。为更有效地开发这一名优新品种，我们对其胚胎发育和仔鱼前期发育作了初步研究与探讨。

1 材料与方法

1.1 试验的时间与地点

试验于2013年7月份到2014年5月份在上述试验基地结合生产进行。

1.2 亲鱼选择

选择体质健壮的1﹢到2﹢，体重在250g以上的体形、体色正常的成年彩鲫雌、雄亲鱼。即雌鱼腹部柔软，有卵巢轮廓，泄殖孔红肿充血，稍压下腹即有成熟卵粒流出；雄鱼轻压下腹有乳白色精液流出，流出精液遇水即散。

1.3 实验方法

1.3.1 受精卵孵化方法

本实验采用人工催产亲鱼和自然授精、自然孵化方法。催产剂为促黄体释放激素（LRH），规格0.1mg/支，共用25支，注入500mL中，用量为每kg注射LRH0.005mg，即每条亲鱼注射1mL药液，雌雄鱼同时一针注射，采用腹腔注射。注射后放回产卵池中，待其自然产卵，置于孵化池中孵化；产卵前在鱼池中架设鱼巢（鱼巢使用柳树根），使亲鱼产卵于其上。

1.3.2 胚胎发育及仔鱼发育观察方法

胚胎发育各期的划分参照李璞关于鲫鱼和金鱼胚胎发育的分期。实验过程中，囊胚期之前每隔0.5h、从囊胚期开始每隔2h取同一组亲鱼产的同一批卵1次，用解剖镜观察胚胎发育状况。每个实验单元每次随机取样10粒卵。以观察数的50%个体达到相应的发育程度来确定胚胎发育各期时间，所有死卵取出计数。仔鱼出膜后统计各单元的出膜个体数并累加死亡卵总数。出膜后每4h左右观察1次。每次观察做详细记录，选取典型时期的胚胎拍照、绘图和固定。采用0.8﹪固定各期标本10个，24h后用水冲洗，逐级保存于70%乙醇中以备复核胚胎细微结构。观察期间每两个小时测一次催产池中水温，溶氧并做记录（见表1）。

1.3.3 器材及设施

催产剂：LRH-A激素；便携式测氧仪（YSI.Incorporateol Yellow Spring;ohio.45387 USA），连续变倍解剖镜（XTZ-E），显微镜（YSI.55.DISSOLVEO.OXYGEN Model#55112FT.SW:03A0858.AV） 和数码摄象系统（Nikon E4500）。

2 结果分析

2.1 胚胎发育

彩鲫的胚胎发育从受精卵到孵化出膜期，根据形态及生理变化特征共分为6期，每期及其特征记述如下（以同组内1/3以上个体显出某期特征作为该期开始，平均水温20.5℃）：

受精卵：彩鲫成熟卵子呈黄色，圆形，有粘性，卵径为2.0mm，卵质分布均匀。受精后的卵子卵膜吸水膨胀，晶莹透亮，卵间隙增大。受精后40min，卵子细胞质开始向动物极集中并逐渐隆起，形成胚盘，黏附于异物上开始发育。

卵裂期：在平均水温为20℃时，受精后1.0h，卵子动物极出现裂纹，胚盘纵向分裂成两个相似的分裂球，进入2细胞期。1.5h后，胚盘沿第一次分裂垂直的方向进行第二次纵裂，此为4细胞期。受精后3.0h，开始发现有多细胞期胚胎，大部分胚胎处于64细胞期。3.7h后，胚胎大多已进入多细胞期，少数已进入囊胚早期。（图版Ⅰ-2）

囊胚期：受精后4.3h，细胞继续分裂，数量不断增多，细胞的大小也相应变小，细胞界限已不很清楚，整个胚体细胞高举于卵黄上，逐步过渡到囊胚期胚胎。至6.0h，开始有少部分胚胎死亡。7.5h后，囊胚细胞覆盖于卵黄的面积扩大，囊胚层上细胞平展于卵黄上方，细胞体积更小。有超过半数的胚胎到达囊胚晚期。（图版Ⅰ-3）

原肠期：受精后10.0h，胚层开始外包，慢慢进入原肠期，早期囊胚层细胞扩展于卵黄上部，其边缘上沿细胞堆集加厚形成胚环。胚环基区上特别加厚部分形成胚盾。12.3h后，发育至原肠中期，囊胚层继续扩展，包围了一半卵黄，胚环向下方移动。原肠胚晚期囊胚层包围了卵黄大部，胚盾继续伸长变窄形成中枢神经系统原基。（图版Ⅰ-4）

神经胚期：受精后15.5h，胚胎进入神经胚早期，卵黄栓尚未完全包被。17.3h后，卵黄被完全包被，卵黄栓消失胚体前端膨大部分形成脑，出现柱状脊索。（图版Ⅰ-5）。

器官形成期：受精后19.50h，胚胎进入器官形成期；20.0h后，头部两侧膨大形成视泡，21.5h后，肌节出现。22.5h后，在眼原基上方脑泡分化成前、中、后脑三部分，胚体出现3～14对体节，出现尾芽，随着尾芽不断发展延伸，卵黄囊由圆变长。28.0h后，出现胚动，进入肌肉效应期，开始胚动的频率很低，随时间的推移逐渐加快。31.0h后，胚胎卷曲延长，卵黄减少。而后3.0h，始见有心脏搏动，平均频率39次/分钟，后逐渐增加到70次/分钟。47.3h见有血液流动，再过2.0h，所有胚胎都开始血液循环（图版Ⅰ-6）。

孵化期：受精后60.0~72.0h，胚胎尾部剧烈扭动从而冲出卵膜。但刚出膜的幼鱼还带有很多卵黄，只能在水中做折线游动（图版Ⅰ-7）。

图版Ⅰ 彩鲫胚胎发育图

2.2 仔鱼发育

刚出卵膜的仔鱼，全长4.4±0.2mm，有肌节25～27对，卵黄囊呈椭圆形，卵黄囊长径为1.1±0.1mm，卵黄囊短径为0.8±0.1mm；刚出膜的仔鱼游动能力差，靠油球作用浮在水中，时常作间隙性“窜动”。油球位于卵黄囊的后下方。（图版Ⅱ-1）

孵化出第1d仔鱼，全长5.6±0.2mm，卵黄囊长径为1.0±0.1mm，卵黄囊短径为0.6±0.2mm，消化道直管状。其他同初孵仔鱼。（图版Ⅱ-2）

孵化出第2d仔鱼，全长5.9±0.1mm，卵黄囊明显缩小，卵黄囊长径为0.7±0.2mm，卵黄囊短径为0.4±0.1mm，视囊周围黑色素增多，其他同前。口凹出现，消化管变粗，末端出现弯曲，肛门未开。脊索末端出现放射丝。背鳍褶增高，在尾鳍褶上出现一条明亮的弧形曲线，曲线的两端分别与背、腹鳍褶的后端相连接。在第3～4对肌节上方的背鳍褶处，出现一个无色的圆形亮点，直径32～40μm，从圆形亮点向四周伸出4～5条有光泽的辐射线，其中一条稍粗，且另一端固定在左侧背部第4肌节处，其余几条呈游离状。此时的仔鱼对光反映不敏感，在水体中分布均匀，靠尾部作间歇性摆动。（图版Ⅱ-3）

孵化出第3d仔鱼，全长6.1±0.1mm，卵黄囊长径为0.5±0.2mm，卵黄囊短径为0.3±0.1mm，仔鱼口膜破裂，口径0.25±0.03mm，肛门开口于体外，消化管产生一道弯曲，仔鱼仍未开始摄食。原始胸鳍形成，鳔已出现。视囊内黑色素加深，晶体内出现黑色素。这时的仔鱼常倾斜或倒竖水中，有时作短距离游动。（图版Ⅱ-4）

孵化出第4d仔鱼，全长6.2±0.1mm，口径0.35±0.02mm，仔鱼口张合明显，肠蠕动明显，肠管中部膨大，仔鱼开始摄食，所食轮虫清晰可见。眼球黑色素增加，仔鱼胸鳍明显，呈扇形。仔鱼游动能力增强，对光反映开始敏感，白天出现集群现象。（图版Ⅱ-5）

孵化出第5d仔鱼，全长6.5±0.2mm，口径0.41±0.05mm，头部明显增大，眼球已完全变黑。有肌节25对，脊椎骨25节。消化道变粗，出现2个弯曲。在第3～4对肌节上方背鳍褶处的无色圆形亮点及尾鳍褶上的弧形曲线均消失。此时，油球有提供能量的作用第5d出现体色，呈粉红色，胸鳍扩大，辐射状鳍条明显，仔鱼作水平游泳，活动迅速，视觉敏锐，出现垂直迁移运动的习性，可摄食。彩鲫仔鱼在孵化后第7d左右卵黄囊消失，此时如没有饵料投喂，仔鱼即进入饥饿期，该时期可维持1～2d左右。（图版Ⅱ-6）

图版Ⅱ 彩鲫的仔鱼的初期发育

3 讨论

表1 溶解氧、温度和盐度的在24h的变化图

彩鲫亲鱼的性腺发育程度、卵成熟度会对彩鲫胚胎发育发生影响。在观察彩鲫胚胎发育过程中，会看到去粘性、受精质量不高的卵，它们在发育过程中往往会出现迟滞发育甚至夭折死亡的情况，一些卵即便孵出仔鱼来也是尾鳍弯曲，心脏跳动微弱，不久即死去。所以，在进行彩鲫人工繁殖初期建议采用人工催产、自然受精的繁殖方法可以获得较理想的受精率和孵化率。

此外，在17～24℃的水温条件下，彩鲫从受精卵到孵化出膜期全部发育过程需68～75h。实验发现卵受精后1h开始第1次分裂，6h结束卵裂，10h结束囊胚发育而出现胚环，22h开始脑的分化，34h开始心跳，72h孵化出膜。从表1中显示整个孵化期间水温变幅较小，且每日温差也不大，这样的水温更有利于胚胎的发育。这是因为孵化酶的分泌和作用主要受温度的影响。鱼类胚胎的孵化出膜主要靠两方面的作用：胚体的机械性收缩运动和孵化酶的作用。大多数鱼类的胚胎具有起源于外胚层的单细胞孵化腺，由其分泌孵化酶，使卵膜变薄。孵化酶的分泌和作用受温度的影响，随温度升高，酶的作用加强，但是温度也有一定的范围：如果低于下限温度，则酶的活性受到抑制；高于上限温度，则酶的活性被破坏。而盐度虽然对卵的渗透压有影响，但是鱼胚胎有渗透压调节机能，有防止在低渗条件下不再吸收水分而在高渗条件下失水干燥的功能。因此，盐度没有温度影响胚胎发育速度的作用显著。