高效液相色谱法测定白芷维生素E 乳膏中维生素E 含量

何荣芬

(安徽省淮北市人民医院，安徽 淮北 235000)

白芷维生素E 乳膏是淮北市人民医院的自制制剂，主要成分为白芷、维生素E。维生素E 为自由基清除剂，可使细胞的脂质免受自由基氧化的损害，从而延缓衰老。白芷具有美白除斑、润肤、控油、延缓皮肤衰老的作用。经临床验证，白芷维生素E 乳膏疗效好，使用方便，无刺激性，无不良反应。笔者采用高效液相色谱法测定白芷维生素E 乳膏中维生素E 的含量，方法操作简便、准确、稳定、灵敏度高，适用于制剂的质量控制。

1 仪器与试药

Waters e2695 HPLC 色谱系统;Empower Waters 工作站;Waters 2489 UV/visible Detector 检测器;JAC-300 型超声波处理器(济宁奥波超声电气有限公司);Mettler AE-240 电子分析天平(0.1 mg;0.01 mg)。维生素E(北大国际医院集团西南合成制药有限公司);白芷维生素E 乳膏(淮北市人民医院的自制制剂，批号为20120928，20121025，20121030);甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 处方与制备

处方:白芷细粉100 g，维生素E1g，硬脂酸89.7 g，单硬脂酸甘油酯52.8 g，白凡士林53 g，液体石蜡157.5 g，甘油106 g，三乙醇胺2 mL，十二烷基硫酸钠2 g，蒸馏水加至1 000 g。

制备工艺:取硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、液体石蜡，置水浴上加热熔化，滤过，保温80 ℃左右。另取十二烷基硫酸钠，甘油加入适量蒸馏水加热，控制水相温度在80 ℃左右，在不断搅拌下，将油相细流加入水相中，加三乙醇胺乳化，接近室温时，加入维生素E，过120 目筛的白芷细粉，搅匀，即得。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Platisil ODS 柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇;流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;进样量:20 μL;检测波长284 nm。在此条件下，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

精密称取维生素E 对照品0.104 5 g，置50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液。取本品2 g，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇20 mL，80 ℃水浴加热振摇，使维生素E 充分溶解，超声提取5 min，放冷至室温，用甲醇溶解至刻度，置冰浴冷却2 h，取出后迅速过滤，取续滤液放冷至室温，用0.45 μm 滤膜过滤，即得供试品溶液。取处方中除维生素E 外的其他组分，依法制备阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

干扰试验:按照样品处方，制备缺少维生素E 的模拟样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液，精密量取20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图。结果在与供试品溶液色谱主峰保留时间相同处无色谱峰出现，表明处方中其他成分对含量测定无干扰(图1)。

线性关系考察:分别精密量取对照品贮备液1.0，2.0，3.0，5.0，8.0，10.0 mL，置25 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，按拟订的色谱条件，精密量取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标(μg)进行线性回归分析，得回归方程Y=8 345.923 1 X+4 645.310 4，r=0.999 98(n=6)。结果表明，维生素E 进样质量浓度在83.6 ～836 μg/mL 范围内与峰面积具有良好的线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，连续进样5 次。结果峰面积为1952000，1953000，1955000，1956000，1958000，RSD=0.12%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取样品测定项下的同一供试品溶液(批号为20121025)，于0，2，4，6，12 h 时分别进样测试，记录色谱图。结果维生素E 峰面积的RSD 为0.13%(n =5)，表明供试品溶液在12 h 内稳定性良好。

重复性试验:取同一批样品(批号为20121025)，依法制备供试品溶液并测定，计算含量。结果维生素E 平均含量为标示量的108.3%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20121025)适量，置50 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，共9 份，分成3 组，每组分别精密加入对照品贮备液0.8，1.0，1.2 mL，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm 滤膜过滤，精密量取20 μL 注入液相色谱仪，按拟订色谱条件测定。结果见表1。

表1 维生素E 加样回收试验结果( n=9)

2.2.4 样品含量测定

取样品3 批，精密称取适量(约相当于维生素E 20 mg)，置50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm 滤膜过滤，精密量取20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图，用回归方程计算含量。结果见表2。

3 讨论

维生素E 甲醇溶液在200 ～400 nm 波长内扫描，结果在207 nm 和284 nm 波长出有两个吸收峰，因在207 nm 波长处维生素E 的吸收系数太大，故选择284 nm 作为测定波长，对维生素E主要成分纯度分析，结果表明284 nm 为单一峰。

维生素E 乳膏多采用气相色谱法[1]、高效液相色谱法[2]、紫外分光光度法测定含量，从方法学考察可见，3 种方法都可用于白芷维生素E 乳膏中维生素E 含量的测定。紫外分光光度法操作也较简便，分析成本不高，但选择性较差，在操作中若不慎有杂质干扰，则会对结果造成较大影响，这与紫外检测的加合性有关。高效液相色谱法的精密度与准确度比滴定法略差，操作成本较高，但高效液相色谱法的灵敏度较高，同时由于其高分离能力，故不易受杂质的干扰。

表2 样品含量测定结果

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部) [M]. 北京:中国医药科技出版社，2010:907 -908.

[2] 彭 云，吴美珠，刘 燕，等.HPLC-法测定复发维生素E 乳膏中维生素E 的含量[J]. 今日药学，2011，6(21):340 -341.

[3] 黄夕野.HPLC-法测定复发芦荟乳膏中维生素E 的含量[J]. 中南药学，2007，10(5):467 -468.

[4] 沈 鸿，方子正. 复发维生素E 乳膏的制备及质量控制[J]. 中国药业，2007，16(17):29.