高效液相色谱法测定氯锌油中氯霉素含量

胡娟妮，聂 平，邓永琪，李晓燕，李文莉

(1. 中南大学，湖南 长沙 410013;2. 湖南省食品药品检验研究院，湖南 长沙 410001)

氯锌油为第2 版《中国医院制剂规范·西药制剂》收载的制剂，由氯霉素、氧化锌、麻油等组方，适用于亚急性及慢性皮炎、湿疹、烫伤等，对婴幼儿重度臀红有良好效果[1-2]。低钙血症患儿静脉滴注时出现局部皮肤红肿、水疱时，给予氯锌油局部涂药后，可不需拔针重新穿刺，减轻了患儿痛苦[3]。改良后的氯锌油渗透性强，具有减轻组织水肿、软化痂皮的作用，适用于小儿消化道术后皮肤感染[4]。氯锌油的现行标准均为各医院的注册标准，各标准中缺乏对氯霉素的含量控制方法，因此建立该品种中氯霉素的含量测定方法很有必要。笔者建立了氯锌油中氯霉素的含量测定方法，旨在为有效地控制氯锌油的质量提供参考。

1 仪器与试药

LC-20AT 型高效液相色谱仪(日本岛津公司);LC Solution色谱工作站;Mettler AE-200 型电子天平，Mettler CP-225D 型电子天平(德国梅特勒公司);超高速离心机。重蒸馏水自制，甲醇为色谱纯，均经0.45 μm 滤膜过滤;其余试剂均为分析纯;氯霉素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为130555-200602，含量99.4%)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Waters C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.01 mol /L 庚烷磺酸钠缓冲溶液(取磷酸二氢钾6.8 g，用0.01 mol/L 庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1 000 mL，再加三乙胺5 mL，混匀，用磷酸调节pH 至2.0)-甲醇(60 ∶40);流速:1.0 mL/min;检测波长:277 nm;柱温:30 ℃。理论板数按氯霉素计，不低于5 000。

取对照品溶液、供试品溶液及缺氯霉素的阴性对照品溶液各10 μL，按拟订色谱条件进样，记录色谱图。结果表明，样品中其他成分对氯霉素的测定无干扰，见图1。

2.2 溶液制备[5]

图1 高效液相色谱图

精密称取氯霉素对照品52.03 mg，置50 mL 容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液各0.5，2.0，5.0，20.0 mL，分别置50 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.010 34 g /L 的对照品溶液Ⅰ、0.041 37 g /L 的对照品溶液Ⅱ、0.103 4 g /L 的对照品溶液Ⅲ、0.413 7 g /L 的对照品溶液Ⅳ、以及1.034 mg /mL 对照品溶液Ⅴ。精密称取本品适量(约相当于氯霉素10 mg)，置50 mL 离心管中，加入石油醚(30-60)25 mL 使溶解，摇匀，4 000 r/min 离心3 min，弃去上清液，加甲醇25 mL，摇匀，3 000 r/min 离心2 min，收集上清液于100 mL 容量瓶中，再重复收集甲醇提取液2 次，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按处方比例和方法去除氯霉素外的其余辅料制成缺氯霉素样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺氯霉素的阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品溶液Ⅰ～Ⅴ各10 μL，注入高效液相色谱仪测定，以峰面积积分值为纵坐标、样品质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=2 ×107X-209 35，r=1。结果表明，氯霉素对照品质量浓度在0.010 34 ～1.034 g/L 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取氯霉素对照品溶液Ⅲ，按拟订色谱条件，连续进样6 次，每次10 μL，记录色谱峰面积。结果的RSD 为0.08%。表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液(批号为120427)，分别于配制后的0，1，2，4，6，8 h 时，精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，测定氯霉素峰面积。结果的RSD 为0.39%，表明供试品溶液8 h 内稳定。

重复性试验:取同一批(批号为120427)样品，依法制备供试品溶液，测定氯霉素的含量。结果氯霉素的平均含量为标示量的98.6%，RSD 为0.94%，表明方法重复性良好。

回收率试验:精密称取氯霉素原料9 份，分别加入相应处方量的空白辅料，制成每2 g 中约含氯霉素的量分别为0.08，0.10，0.12 mg 的溶液，按照样品处理方法处理，加甲醇至刻度，摇匀;另取氯霉素原料适量，加甲醇定量稀释并制成每1 mL 含氯霉素0.10 mg 溶液，作为对照品溶液。分别取对照品溶液和供试品溶液各10 μL 注入高效液相色谱仪;按外标法计算。结果见表1。

表1 氯霉素加样回收试验结果( n=9)

2.4 样品含量测定

取不同批次的氯锌油样品，依法制备供试品溶液。结果批号为120427 和120509 的样品含量为标示量的98.5%和99.3%。

3 讨论

供试品溶液制备方法的确定:参照2010 年版《中国药典(二部)》中氯霉素的性状[6]，氯霉素在甲醇、乙醇、丙酮或丙二醇中易溶，在水中微溶，而氧化锌在水或乙醇中几乎不溶，故首先采用石油醚除去辅料麻油，再用甲醇提取氯霉素。本试验考察了不同提取方式、提取次数、提取时间的提取效率，选择最优提取条件。而离心的目的是分离溶液与沉淀，便于收集上清液，故离心的转速与时间不会影响氯霉素的提取效率，在试验过程中观察发现3 000 r /min 离心2 min 时，易于收集上清液。

检测波长选择:采用紫外分光光度法测定，氯霉素在277 nm 波长附近有最大吸收，因2010 年版《中国药典(二部)》氯霉素项下含量测定选择277 nm 波长作为检测波长，故本试验选择该检测波长。

流动相选择:本试验曾采用甲醇-水体系洗脱，但氯霉素峰形拖尾，理论板数较低，采用甲醇-庚烷磺酸钠缓冲溶液体系后收到了很好的效果，可以满足测定需要。

[1] 陈淑英，陈春青，陈红梅，等. 氯锌油软膏用于婴儿红臀的效果观察[J]. 当代护士，2008(11):39.

[2] 丁川中，王凤姣，肖 嫔，等.2 种药物治疗婴幼儿重度臀红的效果比较[J]. 当代护士，2009(10):60.

[3] 杨亚玲，邵成香. 氯锌油治疗静脉注射钙剂外渗[J]. 护理学杂志，2002，1(17):27.

[4] 王可为. 改良氯锌油软膏在小儿消化道术后皮肤感染中的应用[J].护理学杂志，2007，2(22):62.

[5] 魏丕纪，刘凤声，董伟海，等. 氯锌油软膏的制备及临床应用[J]. 中国医院药学杂志，2001，21(9):564.

[6] 国家药典委员会. 中国药典二部[J]. 北京:中国医药科技出版社，2010:1 029 -1 030.