高效液相色谱法测定延肾胶囊中淫羊藿苷含量

2014-07-24 01:41芳,石悦,曹
中国药业 2014年4期
关键词:淫羊藿苷刻度

王 芳,石 悦,曹 健

(中国人民解放军第三军医大学新桥医院药学部,重庆 400037)

延肾胶囊是我院研制的非标准制剂,由淫羊藿、大黄、三七、黄芪、川芎、当归、生地、白芍等8 味中药材经加工制成的复方制剂,具有活血化瘀、生血止血、利水渗湿等功效,临床主要用于治疗慢性肾炎、慢性肾功能衰竭1 至3 期、急性肾功能衰竭恢复期。为控制胶囊质量,笔者以方中主药淫羊藿的主要成分淫羊藿苷为指标,参考有关文献[1-5],用高效液相色谱(HPLC)法测定延肾胶囊中淫羊藿苷含量,现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 600 型高效液相色谱仪(美国Waters 公司);ME235s型电子天平(德国Sartorius);CSF-1A 型超声波发生器(上海超声波仪器厂)。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号为110737 -200312);延肾胶囊(0.45 g/粒,自制,批号分别为120629,120925,121108);缺淫羊藿的阴性对照胶囊(自制);乙腈为色谱纯,水为超纯水(自制),其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil ODS 柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(25 ∶75);检测波长:270 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

精密称取淫羊藿苷对照品10.0 mg,置50 mL 量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取2.5 mL 置25 mL 量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得每1mL 含淫羊藿苷0.02 mg 的对照品溶液。取本品10 粒,精密称定,取胶囊内容物,研细,称取细粉约0.5 g,精密称定,置25 mL 容量瓶中,加50%乙醇20 mL,超声处理30 min,放冷至室温,加50%乙醇至刻度,摇匀,过滤,精密吸取续滤液10 mL,置水浴上蒸干,加水10 mL 溶解,以乙酸乙酯萃取3 次,每次10 mL,合并乙酸乙酯萃取液,挥干,残渣用50%乙醇溶解转移至25 mL 容量瓶中,并用50%乙醇定容至刻度,摇匀,以0.45 μm 微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液。按处方工艺制备缺淫羊藿的阴性对照品,取其内容物约0.5 g,精密称定,按供试品溶液制备方法制备缺淫羊藿的阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验:取2.2 项下3 种溶液,分别进样20 μL,记录色谱图(图1)。结果表明,阴性对照品溶液对样品中淫羊藿苷的测定几乎无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称取淫羊藿苷对照品10.0 mg,置50 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取1.5,2.0,2.5,3.0,3.5 mL,置25 mL 容量瓶中,分别加甲醇稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取20 μL,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以峰面积(A)对质量浓度(C)进行线性回归,得回归方程A =43 132 C -5 996.5,r =0.999 8(n =5)。结果表明,淫羊藿苷质量浓度在12.0 ~28.0 μg /mL 范围内与峰面积值线性关系良好。

精密度试验:取淫羊藿苷对照品溶液,重复进样5 次,测定淫羊藿苷峰面积。结果平均峰面积为858 119,RSD =0.25%(n=5),表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批(批号为121108)供试品5 份,按供试品溶液的制备方法制备溶液,每次进样20 μL,测定峰面积,计算含量。结果淫羊藿苷平均含量为2.503 mg/g,RSD=2.01%(n=5),表明方法重复性良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液20 μL,于0,1,2,4,8 h 时进样,记录每次进样的峰面积。结果淫羊藿苷峰面积的RSD =1.28%(n=5),表明供试品溶液在8 h 内基本稳定。

加样回收试验:取已知淫羊藿苷含量(2.503 mg/g)的样品(批号为121108)约0.25 g,精密称定,共6 份,分别精密加入质量浓度为0.2 g/L 的淫羊藿苷对照品溶液3.0 mL,用供试品溶液制备方法制备溶液,按上述色谱条件测定含量,计算回收率。结果见表1。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果( n=6)

2.4 样品含量测定

取3 批样品,依法制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL 进样,测定峰面积,计算淫羊藿苷的含量。结果批号为120629,120925,121108 的样品,每粒中淫羊藿苷平均含量分别为0.927,0.905,1.126 mg(n=3)。

3 讨论

延肾胶囊为中药复方制剂,成分复杂,本试验以淫羊藿苷作为含量测定指标。通过紫外扫描,结果淫羊藿苷对照品溶液在270 nm 波长处有最大吸收,故选270 nm 为测定波长。

[1-4]选用乙腈-水作为流动相,50%乙醇作为提取溶剂,经多次试验,以乙腈-水(25 ∶75)为流动相时分离效果较好。在供试品溶液的制备过程中,对回流提取法、超声提取法及提取时间15,30,45,60 min 分别进行了比较,结果两种提取方法结果无显著差异,提取时间30 min 便可提取完全,故选用操作简便的超声提取法提取30 min。又因超声提取法提取的杂质较多,本试验根据淫羊藿苷的溶解性质[5]再将提取液以乙酸乙酯提取、纯化,结果能使提取的杂质大为减少。

采用高效液相色谱法测定延肾胶囊中淫羊藿苷的含量,方法简便易行,重现性好,可用于延肾胶囊的质量控制。

参考文献:

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) [M]. 北京:中国医药科技出版社,2010:1 156.

[2] 徐天玲.HPLC 测定强骨益肾胶囊中淫羊藿苷的含量[J]. 中国药师,2010,13(10):1 526 -1 527.

[3] 伍 奕,谭安军. 高效液相色谱法测定益肾颗粒中淫羊藿苷含量[J].中国药业,2011,20(1):32 -33.

[4] 丁宏珍. 高效液相色谱法测定颐和春胶囊中淫羊藿苷的含量[J]. 现代中药研究与实践,2006,20(5):40 -41.

[5] 杨 云,冯卫生. 中药化学成分提取分离手册[M]. 北京:中国中医药出版社,1998:329.

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