李晓帆 王珏 李玲
·实验研究·
麻疯树种子的HPLC图谱研究
李晓帆 王珏 李玲
目的建立麻疯树种子的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法采用高效液相色谱法测定麻疯树种子95%乙醇提取物中的正丁醇层的图谱, 并通过质谱检测对主要色谱峰进行指认。结果对HPLC图谱中6个色谱峰进行指认, 指认出其中8种化合物, 占总峰面积的50.9%。结论对麻疯树种子药材质量的控制及综合开发利用提供了理论基础。
麻疯树种子;正丁醇提取物;高效液相色谱
麻疯树(Jatrophacurcas L)为大戟科(Euphorbiaceae)麻疯树属植物, 性味涩、微寒、有毒, 在民间常被用于消肿、镇痛、止血、消毒、杀虫等[1]。据报道, 从麻疯树中分离得到萜类、香豆素类、黄酮类、蛋白质多肽类、脂肪酸类等多种化合物[2]。本课题组从麻风果中分离得到多种化合物, 已报道了活性部位中分离的6种木质素类化合物及其抗氧化活性[3]。利用上述分离的化合物作为标准品, 本论文运用现代HPLC分离手段对麻疯树种子的正丁醇提取物进行了分离, 并对其中的特征色谱峰进行了指认, 为后续质量的控制研究奠定了一定的基础, 并对麻疯树种子综合开发利用提供了理论基础。
1.1试验材料 麻疯树种子采于云南, 由深圳市药检所熊英药师鉴定为麻疯树(Jatrophacurcas L)的种子, 标本保存于深圳清华大学研究院创新中药及天然药物研究重点实验室。
1.2正丁醇提取物样品制备 麻疯树的种子, 去除种皮, 使用95%乙醇2 h回流提取三次合并滤液减压浓缩得到提取物浸膏。浸膏用水混悬, 依次用等体积石油醚、正丁醇萃取,减压浓缩得到正丁醇层萃取物。取正丁醇层萃取物30.0 mg,加入1.0 ml甲醇超声溶解, 上清液过微孔滤膜即得。
1.3对照品处理 取对照品(前期分离所得各化合物)1.0 mg,加入1.0 ml甲醇, 超声溶解, 上清液过微孔滤膜即得单一对照品溶液。
1.4液质条件 色谱柱:Phenomenex Luna C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm);柱温:30℃;泵:Agilent 1100Series;流动相:A相, 1‰的乙酸水溶液;B相, 甲醇;梯度:0~50 min(35%~70% B);流速:0.8 ml/min;进样量为20 μl。检测器:DAD检测器;检测波长:280 nm。
质谱条件:分流至质谱的流速为0.4 ml/min, 毛细管温度300℃, 毛细管电压4.0 kV, 干燥气流速 10 L/min, 雾化气压力 30 Psi(1 Psi=6.89476 kPa), 扫描范围m/z:50~1000, 检测模式:负离子。
2.1主要色谱峰的指认 按“1.2~1.4”的样品处理方法和分离条件, 将麻疯树种子正丁醇提取物进行HPLC 分析, 按“1.4”的液质联用条件, 对所得到的色谱图中的主要色谱峰进行解析。通过与前期研究中分离得到的对照品的色谱峰保留时间及其质荷比[M-H]-相拟合, 从而确认出峰物质的结构。根据质谱比对的结果, 共指认得到6个色谱峰共计8种化合物[3]。见表1。
表1 麻疯树种子正丁醇提取物指认成分及其比例
2.2主要成分量值关系 利用HPLC-MS 联用的方法, 对正丁醇萃取物中所指认的色谱峰进行峰面积归一化分析, 这8个被指认出的色谱峰占总峰面积的50.9%。
采用HPLC高效液相获得了麻疯树种子95%乙醇提取物的正丁醇层部位的HPLC图谱, 通过与分离得到的单体化合物的对比, 对色谱图中的主要峰进行了指认。根据与分离得到的单体化合物进行对照以及液-质联用等方法, 对该萃取层图谱中6个色谱峰进行了指认, 结果指认出8个化合物。通过面积归一法计算得到指认出来的峰的面积占总峰面积的50.9%, 较系统的反映了该活性部位的主要物质基础, 并为建立麻疯树种子的质量标准奠定了基础。
[1] 江苏新中医学院.中药大辞典(下册).上海:上海科学技术出版社, 2001:2227.
[2] Adolf W, Opferkuch HJ, Hecker E, et al.Irritant phorbol derivatives from four Jatropha species.Phytochem, 1988, 23(1): 129-132.
[3] 李玲, 李晓帆, 吴慧星, 等.麻疯树种子中抗氧化活性成分的研究.中草药, 2010, 41(12): 1932-1936.
2014-06-18]
518060 深圳大学生命科学学院/深圳市微生物基因工程重点实验室(李晓帆);深圳市药品检验所(王珏);深圳清华大学研究院/深圳市创新中药及天然药物研究重点实验室(李玲)