HPLC 法测定宫外孕 I号方中芍药苷的含量

朱明恒

HPLC 法测定宫外孕 I号方中芍药苷的含量

朱明恒

目的 采用高效液相色谱法 (HPLC)测定宫外孕 I号方中芍药苷的含量。方法 采用Kromasil C18色 谱 柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm), 流 动 相 乙 腈 -0.1% 磷 酸 (15 ：85), 流 速 0.8 ml/min, 柱 温30℃。结果 芍药苷在 0.01032～0.16512 mg/ml范围内呈良好的线性关系 , 相关系数为 0.9999, 平均加样回收率为 92.75%, RSD 为 1.03%。结论 本方法简便、准确 , 可用于宫外孕 I号方中芍药苷的含量测定。

宫外孕 I号方 ；高效液相色谱法 ；芍药苷 ；含量测定

宫外孕 I号方是中医治疗宫外孕的代表方剂 , 在本院的临床应用亦已有二十余年的历史。原方由赤芍、丹参、桃仁三味药材组成 , 具有活血祛瘀 , 消癥止痛的功效 , 临床用于宫外孕破损期且未凝成血肿包块者的治疗。芍药苷是方中主药赤芍所含的主要有效成分之一 , 具有降低血液黏度、抗血小板聚集、扩张血管等多种作用［1］。本文参考相关文献 , 采用高效液相色谱法 (HPLC)对提取液中的芍药苷进行含量测定 , 为该方的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪 ；Sartorius CP224S 型电子分析天平。芍药苷对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号 110736-200934)；宫外孕 I号 (本院中药煎药室自制 , 批号 20120703, 20120710, 20120717)；甲醇 , 乙腈为色谱纯 , 其余为分析纯。

2 方法与结果

2. 1 色谱条件 色谱柱 ：Kromasil C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm), 流 动 相 ：乙 腈 -0.1% 磷 酸 (15 ：85), 检 测 波 长 ：230 nm, 流速 0.8 ml/min, 柱温 30℃ , 进样量 ：10 μl。

2. 2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品 10.32 mg,置 50 ml容量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 得 1 ml含芍药苷 0.2064 mg 的对照品溶液。

2. 3 供试品溶液的制备 精密量取本品 5 ml, 置 50 ml容量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液即得。

2. 4 阴性样品溶液的制备及空白试验 按处方组成除去赤芍 , 按工艺制成阴性样品。取 5 ml按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。吸取上述 3 种溶液 , 按“2.1”项下色谱条件进行测定 , 结果表明阴性样品溶液在芍药苷保留时间处无干扰峰。

2. 5 线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液 0.5、1、2、4、8 ml, 置 10 ml量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀。分别吸取上述溶液 10 μl, 注入液相色谱仪 , 按“2.1”项下色谱条件进行测定 , 以峰面积 Y 对进样量 X 进行线性回归分析 ,得 回 归 方 程 Y=12772152X+65462, r=0.9999。表 明 芍 药 苷在0.01032～0.16512 mg/ml范围内呈良好线性关系。

2. 6 精密度试验 精密吸取浓度为 0.1032 mg/ml对照品溶液 10 μl, 重复进样 6 次 , 按“2.1”项下色谱条件进行测定 ,结果芍药苷峰面积值的 RSD=0.62%, 表明仪器精密度良好。

2. 7 重复性试验 精密称取同一批样品 6 份 , 照“2.3”项下方法制成供试品溶液 , 按“2.1”项下色谱条件平行测定 6 次。以芍药苷的峰面积计算 , RSD=1.73%, 表明方法重复性良好。

2. 8 稳定性试验 取同一供试品溶液 , 分别于 0、2、4、6、8、10 h 进样测定 , 结果芍药苷峰面积的 RSD=1.86%, 表明供试品溶液在 10 h 内稳定性良好。

2. 9 加样回收率试验 精密量取已知芍药苷含量的样品溶液 6 份 , 每份 2 ml, 分别加入对照品溶液各 3 ml, 照“2.3”项下方法制成供试品溶液 , 按“2.1”项下色谱条件测定 , 分别计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果 (n=6)

2. 10 样品含量测 定 分 别取批号为 20120703, 20120710, 20120717 的样品 , 照“2.3”项下方法制成供试品溶液 , 按“2.1”项下色谱条件测定并计算含量 , 结果见表2。

表2 样品含量测定结果 (n=3)

3 讨论

［2-4］, 考察了不同比例乙腈 - 磷酸溶液作为流动相时的分离效果 , 发现乙腈 -0.1% 磷酸溶液 (15:85)时分离效果最佳 , 峰形理想。

实验过程中 , 分别采用甲醇和乙醇作为提取溶剂［5,6］,结果表明以甲醇为溶剂时提取较完全 , 测得的芍药苷含量较高 , 故选用甲醇作为提取溶剂。

本实验采用的处理方法简便 , 测定方法结果准确 , 可用于宫外孕I号方的质量控制。

参考文献

［1］郑世存 , 李晓宇 , 欧阳冰 , 等 .芍药苷药理作用研究新进展 .中国药物警戒 , 2012, 9(2):100-103.

［2］史立君 , 王靖 .高效液相色谱法测定赤芍颗粒饮片中芍药苷的含量 .浙江中医药大学学报 , 2011, 35(1):86-87.

［3］权勤波 , 李启红 .HPLC 法测定胃炎康胶囊中芍药苷、盐酸小檗碱及甘草次酸的含量 .药物分析杂志 , 2012, 32(1):120-122.

［4］孙金龙 , 黄付伟 , 覃金玲 , 等 . HPLC 法测定赤牧泡腾片中芍药苷的含量 .中国药师 , 2012, 15(7):978-979.

［5］董月辉 , 赵金 , 王承平 .乐脉胶囊中芍药苷含量的 HPLC 测定方法 .成都医学院学报 , 2011, 6(2):153-154.

［6］陈昕 , 高军 , 张大军 , 等 . HPLC 法测定消乳癖颗粒中芍药苷的含量 .中国药师 , 2012, 15(3):372-373.

2014-04-29］

215002 南京医科大学附属苏州医院药剂科