血府逐瘀汤颗粒质量标准研究

狄永良，徐海波

（1．江苏省溧阳市中医院，江苏 常州 213300； 2．江阴天江药业有限公司，江苏 无锡 214434）

血府逐瘀汤颗粒由桃仁、红花、当归、生地、川芎等12味药组方，具有活血祛瘀、行气止痛的功效。为保证制剂质量，本研究中采用薄层色谱（TLC）法对方中赤芍进行了定性鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法对制剂中桃仁的主要活性成分苦杏仁苷进行了含量测定。试验结果表明，方法专属性强，重现性好，可作为本制剂的质量控制方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200 series型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；超声清洗机(无锡超声电子设备厂)；电子天平(瑞士Mettler公司)；KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器公司)。血府逐瘀汤颗粒（江阴天江药业有限公司，批号为 200902，200903，201001）；按处方，根据鉴别的药味，去除该药味，按制备工艺提取，制得阴性对照品；芍药苷（批号为111700-200501）、苦杏仁苷（批号为 110820-200403）、赤芍（批号为 110713-200609）对照品，均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 赤芍鉴别

取本品粉末2 g，加乙醇10 mL，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取赤药对照药材及芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，即为对照药材和对照品溶液。再取不含赤芍的阴性对照提取物1 g，照供试品溶液制备方法制备，制得阴性对照品溶液。照TLC法[1]试验，吸取上述4种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷 -乙酸乙酯 -甲醇 -甲酸(40∶5∶10∶0．2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液则无此斑点，本鉴别方法具有专属性，见图1。

图1 薄层色谱图

2．2 苦杏仁苷含量测定[1-4]

2．2．1 色谱条件

色谱柱：Lichrospher C18柱（200 mm ×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 -0．1%磷酸溶液（20∶80）；检测波长：283 nm；柱温：35℃ ；流速：1．0 mL ／min；理 论板数：2 253；进样量：10 μL。

2．2．2 溶液制备

精密称取苦杏仁苷对照品1．95 mg，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0．195 g／L的对照品溶液。取血府逐瘀汤颗粒(批号为 200902)约 0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声提取30 min，放冷，精密称定质量，加甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，过微孔滤膜，即得供试品溶液。另按处方，祛除桃仁，制得不含桃仁的阴性对照品，同法制得不含桃仁的阴性对照品溶液。

2．2．3 方法学考察

阴性干扰试验：分别精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液和供试品溶液各10 μL，按拟订色谱条件测定，记录色谱图和峰面积，见图2。可见，在供试品溶液色谱中，与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照品溶液无此色谱峰，表明在此试验条件下，其他成分对测定无干扰，方法具有专属性。

线性关系考察：分别精密吸取苦杏仁苷对照品溶液(质量浓度为 0．195 g／L)2，4，6，8 mL，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成质量浓度分别为 0．039，0．078，0．117，0．156 g ／L的系列对照品溶液，分别精密吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值(Y)为纵坐标、苦杏仁苷质量浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝9 137．85 X ＋4．23，r＝0．999 89。结果表明，苦杏仁苷进样量在0．39～1．95 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

图2 高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取 2．2．2项下对照品溶液10 μL，连续进样6次，依法测定。结果的 RSD为0．13%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取供试品溶液10 μL，按拟订色谱条件测定，分别于 0，1，2，4，8 h时进样，测定苦杏仁苷峰面积积分值。结果的 RSD为0．49%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取血府逐瘀汤颗粒约0．5 g，精密称定，平行6份，依法制备供试品溶液，分别进样10 μL，测定峰面积积分值并计算含量。结果含量为（10．21 ± 0．05）mg／g， RSD 为 0．46% ，表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品0．25 g，精密称定，分别加入苦杏仁苷对照品适量，依法制备供试品溶液，分别进样10 μL，测定。结果见表1。

表1 苦杏仁苷加样回收试验结果（n＝6）

2．2．4 样品含量测定

取样品约0．5 g，精密称定，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定。结果批号为200902，200903，201001的3批血府逐瘀汤颗粒中苦杏仁苷的平均含量分别为 10．16，10．48，10．31 mg ／g。考虑到不同批次含量的差异，在最低含量的基础上下浮20%，暂订本品每1 g含桃仁以苦杏仁苷(C20H27O11)计，不得少于8．0 mg。

3 讨论

超声提取时间考察：超声提取 10，20，30，40 min，苦杏仁苷的含量分别为 9．99，10．18，10．18，10．17 mg ／g。结果表明，处理20 min，苦杏仁苷含量基本不再增加，为保证提取完全，故确定超声处理时间为30 min。

流动相选择：通过查阅文献和现行药典标准，选择了3种流动相系统进行了预试验，分别为1号[乙腈-冰醋酸-水（16∶1∶84）]、2 号[甲醇 -0．1% 磷酸溶液（20 ∶80）]、3 号[甲醇 - 水（20 ∶80）]。经试验发现，2号流动相出峰较快且峰型好，适合本试验要求，故选择2号流动相。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010：附录34-35．

[2]钱 平，刘志辉，钱 芳，等．桃仁定性鉴别与含量测定研究[J]．中国药事，2008，24（4）：351．

[3]颜永刚．桃仁质量研究[D]．成都：成都中医药大学，2008．

[4]颜永刚，裴 瑾，万德光．HPLC法测定不同产地和品种桃仁中苦杏仁苷[J]．中草药，2008，39（9）：1 415．