液相法检测乳与乳制品中糖精钠等标准品配制的研究

于敏，吴腾，赵桂荣，张河霞，乌恩其木格，秦培林

(内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，呼和浩特011550)

0 引 言

糖精钠(学名：邻磺酰苯酰亚胺钠 )[1]，甜度是蔗糖的500倍，溶液浓度大时有苦味[2，3]。苯甲酸是羧基直接相连接在苯环碳原子的最简单的芳香酸[4]。是一种常用的食品消毒防腐剂[5]。山梨酸(化学名称：2，4-己二烯)[6]，还能抑制有害微生物的繁殖与生长[7-8]。安赛蜜是目前世界上第四代甜味剂。

乳与乳制品中检测糖精钠、苯甲酸、山梨酸、安赛蜜等项目时如何配置标准品国标方法中没有明确规定，在开展检测项目时会遇到新旧标准品如何比对的问题。一般情况下标准品配制成单标标准品和混合标准品后使用，配制方法对标准品的比对有一定的影响。通过实验对不同的配制方法进行研究满足不同批次标准品的对比要求。

1 实 验

1.1 仪器与设备

Dionex U3000型 高效液相色谱仪(配有紫外检测器)， 恒温水浴锅，10 mL容量瓶，100 mL容量瓶，10～100 L移液器

1.2 试剂

(1)苯甲酸单标标准品10 mg/L。准确吸取苯甲酸标准物质(1.00 g/L)100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(2)山梨酸单标标准品10 mg/L。准确吸取山梨酸标准物质(1.00 g/L)100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(3)安赛蜜单标标准品10 mg/L。准确吸取安赛蜜标准物质(1 000 mg/L)100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(4)糖精钠单标标准品10 mg/L。准确吸取糖精钠标准物质(1.00g/L)100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(5)苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠混标标准品10 mg/L。准确吸取苯甲酸标准物质(1.00 g/L)、山梨酸标准物质(1.00 g/L)、安赛蜜标准物质(1 000 mg/L)、糖精钠标准物质(1.00 g/L)各100 uL，用1∶1甲醇水溶液定容至10 mL容量瓶中。

(6)磷酸盐缓冲盐。分别称取2.5 g磷酸二氢钾和2.5 g磷酸氢二钾，用水溶解并定容于1 000 mL的容量瓶中。

1.3 色谱条件

流动相为磷酸缓冲盐-甲醇(95:5)；色谱柱为C18柱(250×4.6mm,5um)；流速为1.0 mL/min；柱温为38℃；进样量为10 uL；波长为227 nm。

1.4 样品处理

称样20 g于100 mL容量瓶,加入25 mL氢氧化钠(浓度0.1 mol/L)摇匀，70℃水浴15 min,冷却后用硫酸溶液(浓度0.5 mol/L)调pH值为7.0～8.0，加入2 mL亚铁氰化钾和2 mL乙酸锌，用力摇匀，静置15 min，用甲醇定容至刻度，至少放置2 h，过滤上机检测。

2 方 法

2.1 阳性样品检测

取糖精钠阳性样品处理后，在上述色谱条件下检测，分别用糖精钠单标标准品和苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠混标标准品作为标准品进行检测糖精钠。检测数据如表1所示。

表1 单混标标准品检测糖精钠结果及精密度

由表1可以看出，糖精钠单标工作液与混标工作液检测结果精密度不符合GB 21703-2010,乳与乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定方法要求。

2.2 峰面积测量

不同日期，分别配制苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠单标标准品与苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠混标标准品，在上述同一色谱条件下，检测峰面积，结果如表2～表6所示。

表2 苯甲酸单混标标准品峰面积对比数据 mAu·min

表3 山梨酸单混标标准品峰面积对比数据 mAu·min

表4 安赛蜜单混标标准品峰面积对比数据 mAu·min

由表2～表6结果可以看出，苯甲酸、山梨酸单标工作液与混标工作液峰面积没有显著的差异。

表5 糖精钠单混标标准品峰面积对比数据 mAu·min

表6 单混标标准品检测苯甲酸回收率数据

安赛蜜、糖精钠单标工作液与混标工作液峰面积有显著的差异，即：在相同检测条件下检测混标工作液的峰面积要大于单标工作的峰面积。

2.3 回收率检测

选取一个灭菌乳样品，在其中分别添加2个不同质量分数苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠，分别用苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠单标标准品和苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠混标标准品作为标准品，进行回收率平行实验，结果如表6-表9所示。

表7 单混标标准品检测山梨酸回收率数据

表8 单混标标准品检测安赛蜜回收率数据

由表6～表9可以看出，混标标准品与单标标准品检测苯甲酸回收率都符合GB 21703-2010,乳与乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定方法中回收率的要求；混标标准品与单标标准品检测山梨酸回收率其检测值没有显著的差异；混标标准品检测安赛蜜、糖精钠回收率其检测值较小，且符合GB 21703-2010,乳与乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定方法中回收率的要求。而用单标标准品检测安赛蜜、糖精钠回收率其检测值较大，回收率超出GB 21703-2010,乳与乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定方法中回收率的要求。

表9 单混标标准品检测糖精钠回收率数据

3 结 论

通过上述实验结果表明：安赛蜜、糖精钠单标标准品与混标标准品峰面积有显著的差异，验收安赛蜜、糖精钠标准品时，最好使用相同的配置方法。即：新旧标准品都配成单标工作液或都配成混标工作液进行验收比对，否则很可能会出现验收不合格而实际标准品是合格的情况。

通过回收率试验结果表明，安赛蜜、糖精钠用混标标准品检测时，其回收率符合GB 21703-2010,乳与乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定方法中回收率的要求。而用单标标准品检测时其回收率超出GB 21703-2010,乳与乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定方法中回收率的要求，检测安赛蜜、糖精钠样品和回收率时最好使用混标标准品；苯甲酸、山梨酸检测用单标标准品与混标标准品时，没有显著的差异。

[1]万年星.乳制品中防腐剂高效液相色谱检测方法的研究[D].山东大学：2007.

[2]王冬梅，王家保，李俊玲.液相色谱法同时测定乳制品中糖精钠、苯甲酸、山梨酸[N].中国卫生检验杂志，2005(8):18-19.

[3]肖素荣,李京东.天然食品防腐剂及其发展前景[J].中国食品与营养,2007(6)：30-33.

[4]石立三,吴慧清.我国食品防腐剂应用状况及未来发展趋势[J].食品研究与开发,2008,29(3):157-161.

[5]衷明华,李云.毛细管电泳法分离测定潮汕凉果中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠[J].光谱实验室,2009,26(6):1568-1571.

[6]刘绍.食品分析与检验[M].武汉:华中科技大学出版社,2011.

[7]GB 21703-2010,乳与乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定[S].

[8]晓唐.糖精钠对人体有哪些危害[J].监督与选择,2004(7):11.

[9]GB/T 5009.140-2003,饮料中乙酰磺胺酸钾的测定[S].

[10]GB/T 5009.28-2003,食品中糖精钠的测定[S].

[11]GB/T23495-2009,食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法[S].