非小细胞肺癌中 EGFR 基因突变和扩增的检测及其临床意义

张小红 王红民

非小细胞肺癌中 EGFR 基因突变和扩增的检测及其临床意义

张小红 王红民

目的 探讨非小细胞肺癌中 EGFR 基因突变和扩增的检测方法及其临床意义。方法 收集 200 例肺癌组织 , 通过聚合酶链反应扩增 DNA 直接测序法检测肺癌 DNA 中 EGFR 基因突变和扩增 ,重点是检测肺癌中 EGFR 外显子 19～21 在性别不同中的突变和扩增情况以及在分化不同的癌症中的突变和扩增情况 , 同时分析其在临床中的意义。结果 经聚合酶链反应扩增 DNA 直接测序法检测发现 ,非小细胞肺癌中 EGFR 基因总的突变和扩增数为 68 例 , 突变和扩增率为 34%, 肺癌中 EGFR 外显子 20无明显突变和扩增情况发生 , 外显子 19 突变和扩增情况最多有 49 例 , 占总数的 72.1%, 外显子 21 突变和扩增情况较多有 19 例 , 占总数的 27.9%, 其中女性肺癌患者的 EGFR 基因突变和扩增情况多于男性肺癌患者 , 同时基因突变和扩增在腺癌和腺鳞混合癌中发生情况最多 , 其他次之。结论 非小细胞肺癌中EGFR 基因突变和扩增多发生于女性肺癌患者 , 其中又以外显子 19 和 21 发生较多 , 多发生伴有腺癌和腺鳞混合癌的情况下 , 同时聚合酶链反应扩增 DNA 直接测序法技术稳定可靠 , 为临床研究提供有效的依据。

非小细胞肺癌 ；基因突变 ；基因扩增

肺癌是我国发病率和死亡率增长最快、对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一［1］。肺癌在组织学上可以分为非小细胞肺癌 (NSCLC)和小细胞肺癌 (SCLC)两大类 , 又以非小细胞肺癌占肺癌总发生率的 85%［2］。本次研究就探讨非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测方法及其临床意义,将收集的 200 例组织进行检测 , 现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资 料 选择 本院 2012年 1月 ~2013年 6月收集的非小细胞肺癌手术后的肺癌组织 200例作为研究对象 , 男124例 , 女 76例 , 平均年龄 (56±6.3)岁 , 其中腺癌患者 64例 ,鳞癌患者 73例 , 腺鳞混合型癌患者 41例 , 其他癌患者 22例。

1. 2 方法 对 肺 癌 组 织 中 的 DNA采 用 DNA聚 合 酶 进 行PCR扩增 , 反应液里含有 DNA4 μl, 缓冲液 5 μl×10, dNTP 5 μl, 2.5 mmol/L, 上游和下游引物均 1 μl, 20 mmol/L, DNA聚合酶 1 μl, 使用 DEPC-H2O补充至 50 μl, PCR反应条件为 5 min, 95℃变性 , 随后在 95℃、72℃和 57℃进行 40个循环 , 每个循 环 30 s, 随 后 在 72℃ 时 延 伸 7 min, 扩 增 产 物 经 过 1.6%, 100 V的琼脂糖凝胶电泳 30 min, 随后进行 EB染色摄片 , 将阳性扩增条带经柱层析分离纯化后 , 在 ABI 3700型的 DNA序列分析仪上进行基因测序。

1. 3 统计学方法 应用 SPSS11.0软件进行统计分析 , 计数资料用率表示 , 采用χ2检验 , P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 肺癌突变和扩增情况 非小细胞肺癌中 EGFR基因总的突变和扩增数为 68例 , 突变和扩增率为 34%。

2. 2 不同性别中的基因突变和扩增情况 观察发现 , 女性肺癌患者的EGFR基因突变和扩增情况要多于男性肺癌患者 ,差异具有统计学意义 (P＜0.05)。详情见表1。

2. 3 分化不同肺癌中基因突变和扩增情况 非小细胞肺癌中 EGFR基因突变和扩增情况在腺癌和腺鳞混合癌发生的情况较多。详情见表2。

表1 不同性别中的基因突变和扩增情况 (n, %)

表2 分化不同肺癌中基因突变和扩增情况 (n, %)

3 讨论

目前对于治疗肺癌的有效措施有限 , 治疗肺癌的有效率较低 , 虽然化疗和放疗的效果较好 , 但是给予肺癌患者的负担太大 , 甚至带来严重的毒副作用 , 所以新的有效治疗方法是临床研究的方向 , 近些年 , 医学界的专家把重点放在了分子靶向治疗上 , 尤其是其中的 EGFR 为靶点的分子靶向治疗 ,希望可以从中寻找到治疗非小细胞肺癌的关键 , 通过上述研究得出男性肺癌患者的外显子 19 突变和扩增例数为 21 人 ,外显子 21 突变和扩增例数为 11 人 , 两种外显子的突变和扩增占男性总人数的 25.8%, 而女性肺癌患者的外显子 19 突变和扩增例数为 28 人 , 外显子 21 突变和扩增例数为 8 人 , 两种外显子的突变和扩增占女性总人数的 47.4%。与董强刚 ,韩宝惠 , 黄进肃等［3］的 176 例非小细胞肺癌的 EGFR 基因突变分析研究的结果基本一致 , 为临床提供理论依据。EGFR蛋白属于 ErbB 家族 , 具有受体酪氨酸激酶活性［4］。编码酪氨酸激酶区的是第 19～21 号外显子［5］。所以通过聚合酶链反应扩增 EGFR 中的 19～21 号外显子 , 在使用 DNA 测序法检测基因突变和扩增的情况 , 是可以作为医务工作者治疗肺癌的病理指标 , 值得进一步探讨研究。

［1］赵静 ,朱焱 ,张丽 ,等 .非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测及其临床意义 .中华病理学杂志 , 2011,40(10):671-674.

［2］刘红雨 ,李颖 ,陈钢 ,等 .187 例非小细胞肺癌中 EGFR 基因突变和扩增的检测及其临床意义 .中国肺癌杂志 , 2009, 12(12): 1219-1228.

［3］董强刚 ,韩宝惠 ,黄进肃 .等 . 176 例非小细胞肺癌的 EGFR 基因突变分析 .中华肿瘤杂志 , 2006,28(9):686-690.

［4］姜斌 ,朱冠山 ,刘峰 .等 .中国人非小细胞肺癌 EGFR 基因突变的研究 .上海第二医科大学学报 , 2005,25(11):1148-1150.

［5］董强刚 .上皮生长因子受体家族与肺癌的分子靶向治疗 .中华肿瘤杂志 , 2004,24(2):93-95.

2014-04-16］

450052 郑州大学附属郑州中心医院 /郑州市中心医院呼吸内科 (张小红 )；郑州大学第一附属医院呼吸内科 /河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室 (王红民 )