如意金黄乳膏质量标准的研究

朱倩云，李成网，张 洁，彭 玲，韩 露，严 群

（安徽省医学科学研究院，安徽 合肥 230061）

◇药物分析◇

如意金黄乳膏质量标准的研究

朱倩云，李成网，张 洁，彭 玲，韩 露，严 群

（安徽省医学科学研究院，安徽 合肥 230061）

目的 建立如意金黄乳膏的质量标准。方法 采用薄层色谱法对如意金黄乳膏进行定性鉴别，高效液相色谱法对如意金黄乳膏进行定量鉴别。结果 薄层色谱法能明显检出大黄、黄柏、姜黄、苍术、甘草，同时对不同批号的乳膏样品进行含量测定，得大黄酚含量为：0.272 1、0.270 1、0.278 4 mg·g-1。结论 该法简便、准确、重复性好，可作为如意金黄乳膏的质量控制标准。

如意金黄乳膏；薄层色谱法；高效液相色谱法；大黄酚

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-10AT液相色谱仪（日本岛津）；SDD10AVP紫外检测器（日本岛津）；百万分之一电子天平（美国 PE公司）；AS-3120型超声波清洗器（天津奥特赛恩斯）；800型离心沉淀器（上海手术器械厂）；硅胶G高效薄层板和硅胶 GF254高效薄层板（烟台化工研究所）。

1.2 试药 如意金黄乳膏样品（批号：111121、111123、111125）；缺大黄 、甘草、苍术、黄柏、姜黄阴性样品；大黄素对照品（批号：0756-200110）、大黄酚对照品（批号：0796-200006）、甘草次酸对照品（批号：723-9203）、盐酸小檗碱对照品（批号：0713-200107）、姜黄素对照品（批号：0823-9802），均购自中国药品生物制品检定所；硅胶、中性氧化铝（层析用，100～200目）；甲醇（色谱纯）；水（重蒸水）；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 大黄的薄层鉴别 取三批次样品各 5 g，加硅胶20 g，研匀，装柱，加甲醇150 mL洗脱，洗脱液蒸干，加水50 mL离心10 min（4 000 rpm），取上清液滤过后加盐酸5 mL回流30 min，再用乙醚提取2次，每次50 mL，合并乙醚液，蒸干，加乙醇1 mL使溶解，作为大黄供试品溶液。另取大黄对照药材0.1 g，加甲醇20 mL，超声20 min，滤过，蒸干，加盐酸2 mL，再加氯仿30 mL回流30 mim，分取氯仿液，蒸干后加乙醇1 mL使溶解，作为大黄对照药材溶液。分别取大黄素、大黄酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为大黄对照品溶液。取缺大黄阴性样品，同大黄供试品溶液制备法制备大黄阴性对照溶液。分别吸取上述溶液各5 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯—冰醋酸（15∶5 ∶0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气熏后，日光下检视，斑点变为红色。见图1。

图1 大黄鉴别薄层色谱图注：1.大黄酚对照品；2.大黄素对照品；3.大黄对照药材；4～6.三批供试品；7.缺大黄阴性样品。

2.1.2 甘草的薄层鉴别［2］取2.1.1项下大黄供试品溶液，作为甘草供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为甘草对照品溶液。取缺甘草阴性样品，同甘草供试品溶液制备法制备甘草阴性对照溶液。分别吸取甘草

供试品溶液、阴性对照品溶液10 μL，甘草对照品溶液5 μL，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）—三氯甲烷—冰醋酸（10∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图2。

2.1.3 苍术的薄层鉴别［3］取三批次样品各5 g，加硅胶 20 g，研匀，加中性氧化铝柱上，用石油醚（30～60℃）100 mL洗脱，洗脱液低温挥干后加醋酸乙酯1 mL使溶解，作为苍术供试品溶液。另取苍术对照药材0.5 g，加石油醚（30～60℃）15 mL超声15 min，滤过，滤液低温挥干后加醋酸乙酯 1 mL使溶解，作为苍术对照药材溶液。取缺苍术阴性样品，同苍术供试品溶液制备法制备苍术阴性对照溶液。分别吸取上述溶液各5 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同绿色的斑点。见图3。

图2 甘草鉴别薄层色谱图注：1.甘草次酸对照品；2～4三批供试品；5.缺甘草阴性样品。

图3 苍术鉴别薄层色谱图注：1.苍术对照药材；2～4三批供试品；5.缺苍术阴性样品。

2.1.4 黄柏的薄层鉴别［4］取2.1.3项下苍术供试品溶液的制备中石油醚洗脱后的柱，再加无水乙醇100 mL洗脱，洗脱液蒸干后加 1%盐酸溶液20 mL离心10 mim（4 000 rpm），取上清液滤过后加醋酸乙酯提取2次，每次20 mL，取水液加1%氢氧化钠溶液25 mL，再加醋酸乙酯提取2次，每次30 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，加 1%盐酸甲醇溶液1 mL使溶解，作为黄柏供试品溶液。另取黄柏对照药材0.2 g，加1%盐酸甲醇溶液40 mL超声 30 min，滤过、浓缩至2 mL，作为黄柏对照药材溶液。取盐酸小檗碱对照品，加 1%盐酸甲醇溶液制成每1 ml含0.1 mg的溶液，作为盐酸小檗碱对照品溶液。取缺黄柏阴性样品，同黄柏供试品溶液制备法制备黄柏阴性对照溶液。分别吸取上述溶液各 3 μL，点于同一硅胶 G薄层板上，以苯—醋酸乙酯—甲醇—异丙醇—浓氨试液（12∶6∶3∶3∶1）为展开剂，饱和15 min后展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图4。

图4 黄柏鉴别薄层色谱图注：1.盐酸小檗碱对照品；2.黄柏对照药材；3～5三批供试品；6.缺黄柏阴性样品。

2.1.5 姜黄的薄层鉴别 取三批次样品各5 g，加硅胶20 g，研匀，装柱，加甲醇100 mL洗脱，洗脱液蒸干后加水50 mL离心10 min（4 000 rpm），取上清液滤过后加醋酸乙酯提取2次，每次50 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干后加无水乙醇1 mL使溶解，作为姜黄供试品溶液。另取姜黄素对照品，加乙醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为姜黄素对照品溶液。取缺姜黄阴性样品，同黄柏供试品溶液制备法制备阴性对照溶液。分别吸取供试品溶液、阴性对照品溶液10 μL，对照品溶液5 μL，点于同一硅胶 G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—甲酸（96∶4∶0.7）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图5。

图5 姜黄鉴别薄层色谱图注：1.姜黄素对照品；2～4.三批供试品；5.缺姜黄阴性样品。

2.2 大黄酚的含量测定［5-7］

2.2.1 色谱条件 色谱柱：shim-pack ODS（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇—0.1%磷酸溶液（83∶17）；检测波长254 nm；柱温：40℃；流量：1 mL ·min-1。在此条件下，大黄酚与其它组分能达到基线分离，系统适用性试验理论板数按大黄酚峰计算：n＝9 884，不低于1 500。分离度：R＝2.39（R＞1.5），符合药典规定。拖尾因子：T＝1.03（0.95≤T≤1.05），符合药典规定。供试品中大黄酚所对应的峰保留时间与对照品峰保留时间一致，而阴性空白无干扰。结果见图6。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取三批 1.0 g如意金黄乳膏样品，精密加甲醇50 mL超声处理30 min，摇匀，滤过。再参照2010版药典大黄含量测定供试品制备方法制备供试品溶液［8］。

2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取大黄酚对照品2.481 3 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解，再精密吸取10 mL置50 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，即得大黄酚对照品溶液。

2.2.4 阴性空白溶液的制备 取缺大黄的阴性样品，按“2.2.2供试品溶液的制备”项下的方法制备缺大黄阴性空白溶液。

2.2.5 标准曲线的制备 精密吸取大黄酚对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取10 μL，依次注入液相色谱仪中，依法测定，并以大黄酚浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，得线性回归方程为：A＝23 668C-185.08，r2＝0.999 9（n＝7）。实验结果表明：大黄酚浓度在 1.985～13.895 mg·L-1范围内与吸收度峰面积值呈良好的线性关系。

2.2.6 稳定性试验 精密量取的供试品溶液于制备后0、2、4、6、8、10 h分别依法进样10 μL，得 RSD 为1.39%，结果表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.2.7 精密度试验 精密量取的供试品溶液依法进样10 μL，连续测定5次，得RSD为0.61%。

2.2.8 重复性试验 取同一批样品 （批号：111123）5份，按“2.2.2供试品溶液的制备”项下的方法制备溶液，并按“2.2.1色谱条件”项下色谱条件依法进样10 μL，测定大黄酚含量。结果测得大黄酚平均含量为0.270 0 mg·g-1，RSD为1.64%。

2.2.9 加样回收率试验 取已知含量样品5份，精密称定0.5 g，分别置50 mL量瓶中，精密加入一定浓度大黄酚对照品溶液 1 mL，加甲醇超声30 min后放冷，再加甲醇至刻度，摇匀，滤过。按含量测定项下的方法依法测定，得平均回收率为 99.25%，RSD为1.83%，具体结果见表1。

图6 色谱图

表1 加样回收率试验结果

2.2.10 样品的测定 三批样品中大黄酚的含量分别为0.272 1、0.270 1、0.278 4 mg·g-1。

3 讨论

3.1 如意金黄乳膏中原料药的薄层分析 由于本制剂为乳膏制剂，在 TLC鉴别过程中供试品的处理尤为重要，为达到干扰小、易检出的目的，我们首先取部分乳膏以 1∶4的比例与层析用硅胶研和并干燥，使乳膏均匀吸附在硅胶上，为进一步的供试品制备提供前提物质。

3.2 如意金黄乳膏含量测定指标的选择 在处方制剂的含量测定中以检测方中君臣药、贵重药和毒剧药的含量为原则，故本研究对如意金黄方中主药大黄的活性成分大黄酚［9］进行含量检测。之所以选择大黄酚是因为大黄酚性质比较稳定，检出限较低，专属性强，干扰性少。

同时，试验也考察了大黄素的含量测定，但干扰较大，故舍弃［10］。原制剂如意金黄散在 2010版药典中采用的是以姜黄素为指标，但考虑到姜黄素受光、热不稳定，经过溶剂提取制备制成软膏剂之后，很难作为稳定的检测指标故本研究选用大黄酚为含量测定指标。

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Quality standard study of Ruyijinhuang Cream

ZHU Qian-yun，LI Cheng-wang，ZHANG Jie，et al
（Anhui Academy of Medical Science，Hefei 230061，China）

Objective To establish quality standards of Ruyijinhuang Cream.Methods We used TLC method for qualitative identification of Ruyijinhuang Cream，and HPLC method for quantitative identification.Results The TLC method was established to identify rhubarb，licorice，arisaema，treats，turmeric in Ruyijinhuang Cream，and the HPLC method was established to determine the content of chrysophanol in three batches of Ruyijinhuang Cream：0.272 1，0.270 1，0.278 4 mg·g-1.Conclusions This quality standard of Ruyijinhuang Cream is scientific，rational，simple and controllable which can be used for quality control.

ruyijinhuang cream；TLC；HPLC；chrysophanol如意金黄乳膏是根据传统经方提取精制而成的乳膏剂型，原方如意金黄散由大黄、黄柏、姜黄、白芷、天南星、苍术、厚朴、陈皮、天花粉、甘草十味中药材组成，百余年来一直为中医外治箍围消法的基本代表方［1］。但由于其散剂在临床运用有诸多不便，故进行剂型改革制成如意金黄乳膏，以符合临床需求。现对三批次自制的如意金黄乳膏进行质量控制分析以建立如意金黄乳膏的质量标准。

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.03.012

2013-08-27，

2013-10-13）