维生素B12的复方产品含量检测的研究

赵宇 刘程城

【文章摘要】

本文研究了高效液相法检测维生素B12的复方产品的含量。检测方法是色谱柱是COSMOSILC18；流动相是甲醇-0.05mol/L磷酸盐缓冲液；流速为1.2mL/min；柱温是室温；进样量是20μL；检测波长是360nm。试验结果表明该方法适用于检测维生素的复方产品中维生素B12的含量。

【关键词】

HPLC；维生素B12；检测

0 引言

高效液相色谱法（HPLC）也可以称作高速液相色谱、高压液相色谱等。它是色谱法的一个非常重要的分支，此种方法的流动相为液体，输液系统采用高压灌输，将流动相输入色谱柱内，流动相的液体为单一溶剂或按照比例混合的混合溶剂、缓冲液等。在色谱柱内各种成分被分离，然后进入检测器检测，得到待测样品的成分含量。这种 检测方法在医学、化学等领域应用十分普遍。

维生素也被称为“万年青”产品，它的市场的应用前景非常广阔。复方维生素产品是一种处方药，它在国内外的应用已经非常普遍，它的主要成分是维生素B12、维生素B6及叶酸。近年来，采用高效液相色谱法也就是HPLC法，测定维生素B12的单体含量已经被国、内报到，但是对于采用HPLC法测定维生素复方产品的报道还非常少。本文建立的HPLC法可测定维生素复方成品中维生素B12的含量，方法简单、不受叶酸等成分的干扰，测定结果准确。

1 仪器与试药

1.1仪器

LC-10ATvp高效液相色谱仪（N2000色谱工作站、7725i六通进样阀、SPC-10Avp紫外检测器）；电子天平；pH计；UV-260型紫外分光光度计。

1.2试药

维生素B12对照品（含量为99.8%）；复方维生素胶囊（根据处方比例自制）甲醇为色谱纯，其它所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

本试验采用的色谱柱是COSMOSILC18，其规格为250mm×4.6mm×5μm；流动相是甲醇-0.05mol/L磷酸盐缓冲液（22：78，pH为6.4）；流速为1.2mL/min；柱温是室温；进样量是20μL；检测波长是360nm。

2.2测定法

取样品内容物，准确称取5份，每份的质量精确为0.1g，用0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH= 6.4）溶解并定量转移至50 ml棕色溶量瓶中，加磷酸盐缓冲液稀释至刻度，超声溶解20min，过滤后取上清液即得制备的样品。精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B12按照上述制得待测样品，相同方法测定。对照品是按处方比例制备的不含维生素B12的样品，对照样品溶液制备的过程和上述方法相同。进样5次，待测样品溶液、维生素B12溶液及对照样品的溶液色谱图如图1所示。图A维生素B12溶液、图B待测样品溶液、图C对照品溶液。

2.3系统适应性试验

分别精密吸取上述待测样品溶液、维生素B12溶液、对照样品溶液溶液各20μL，按照色谱条件进样，记录色谱，详见图1。理论塔板数按维生素B12计算不低于2000。由图1可知，维生素B12保留时间约为715min，维生素B6及叶酸等无干扰。

2.4线性分析试验

用分析天平准确称取对照品维生素B12适量，加入流动相制成浓度是10.2μg/mL维生素B12对照品溶液。准确移取该溶液1、5、10、15、20ml，分别放入100mL棕色容量瓶中，加入流动相稀释至刻度，然后混匀，制备得到不同浓度的维生素B12溶液。上述溶液分别取20μL进样，记录色谱图。横坐标是峰面积积分值（X），纵坐标是维生素B12进样量（Y）作图，得到线性回归方程Y=38647.1X+368.5，r=0.9999。结果表明，维生素B12进样量在10.0μg-202. 00μg之间，峰面积积分值和进样量的线性关系良好。

2.5进样的精密度试验

将不含维生素B12对照品溶液连续进样5次，维生素B12峰面积变化的RSD=1.2%。

2.6样品溶液的稳定性试验

制备好供试品溶液溶液之后，分别在制备的第0、2、6、8 h进行取样测定，测得的结果，维生素B12含量变化的RSD=0.29%。

2.7样品回收试验

按照处方的各成分比例制备维生素B12标示量为80%、100%和120%的复方样品，根据样品溶液的制备方法，制备不同浓度的维生素B12溶液，根据色谱条件进行测定，平均回收率为99.7%； RSD=1.81% （n=9）。

2.8待测样品含量测定

样品的含量测定根据2.2项下的方法进行，3批样品的含量测定结果分别为93.7%、90.6%、96.2%。

3 讨论

根据以往的研究成果，维生素B12的吸收波长的范围在190nm-600nm，它的最大吸收波长是360nm。因此，在本实验中，维生素B12的含量测定波长为360nm。同时，因为维生素B12具有见光易分解的特性，所以，在试验的检测过程中要注意避光。

由于维生素复方成品中中除了含有维生素B12以外，還含有叶酸、维生素B6、淀粉等成分，这些成分都会对维生素B12的溶出造成影响。所以为了保证试验结果精确性，样品采用超声法进行处理，增大维生素B12的溶解度。

根据试验可知，流动相pH值的变化对维生素B12的保留时间影响不大，但是流动相中甲醇和磷酸二氢钾缓冲液的比例变化显著影响维生素B12的保留时间。所以，要在试验过程中选择甲醇和磷酸二氢钾缓冲液的最佳比例。

【参考文献】

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[2]李祥胜，阚家义.复合维生素B注射液中4种维生素含量测定[J]. 安徽医药，2009，07：755-757.

[3]王喜明.高效液相法测定康乐鼻炎片中马来酸氯苯那敏的含量[J].中国医药指南，2012，33：461-462.

【作者简介】

赵宇，女，1977年7月24日，辽宁锦溪市人，实验师，研究方向：生物技术。