泰兴地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床意义

黄 兵，朱新功，何小峰，杨建功，张会爱

(扬州大学医学院、蚌埠医学院附属泰兴市人民医院感染科，江苏 泰兴 225400)

泰兴地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床意义

黄 兵，朱新功，何小峰，杨建功，张会爱

(扬州大学医学院、蚌埠医学院附属泰兴市人民医院感染科，江苏 泰兴 225400)

目的 了解泰兴地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布情况，探讨HBV基因型与临床的相关性。方法 选择HBV慢性感染者138例，其中慢性乙型肝炎(CHB)病例113例，肝硬化病例25例，采用荧光定量PCR法测定HBV基因型，并结合临床资料进行统计学分析。结果 138例病例中，基因B型46例(33%)，C型89例(65%)，B/C混合型1例(0.7%)，非B非C型2例(1.4%)；CHB组中，B、C基因型在ALT、HBV DNA、HBeAg阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)；C基因型在CHB重度占77%、肝硬化中占80%，B基因型在CHB重度占20%，肝硬化中占20%，C基因型在CHB重度、肝硬化中比例明显升高。结论 本地区HBV基因型中以C型为主，其次为B型，有少量B/C混合型及其他类型，C基因型往往较B基因型病情严重。

乙型肝炎病毒；基因型；荧光定量PCR；分布；临床意义

乙型肝炎病毒基因型的概念首先由日本学者Okamoto等[1]在1988年提出，根据全基因组序列差异≥8%作为分型标准，1992年Noder等[2]又提出了S区基因序列差异≥4%的分型标准，目前，已发现A-I 9个基因型[3-5]。不同基因型有各自的病毒生物学特点，感染后与疾病的进展有显著相关性。HBV基因型有明显的地域分布，我国地区以B、C基因型为主[6]，故我们选择商用乙型肝炎病毒基因分型诊断试剂盒(荧光定量PCR法)对泰兴地区138例HBV慢性感染者进行了检测，并分析其与临床相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2012年1月至2013年3月泰兴市人民医院感染科部分住院患者共138例，其中男性104例，女性34例，年龄17～66岁，平均(37.9±10.2)岁，其中慢性乙型肝炎(CHB)113例，代偿期肝硬化25例，所有病例诊断均符合2000年《病毒性肝炎防治指南》诊断标准。

1.2 标本采集 采集患者的空腹静脉血3 ml，试管2 000 g离心10 min，取分离出的血清0.2 ml左右，-20℃冻存待检，为保证HBV基因型的检查，入选病例检测前HBV DNA＞1.0×103Coppies/ml。

1.3 血清生化、病毒标志物检测 血清生化检测仪器为Olympus Au5800全自动生化分析仪；血清HBV标志物采用罗氏诊断试剂盒，电化学发光法检测。

1.4 HBV基因型测定 美国Stratagen MS3000P PCR扩增仪检测，HBV基因分型试剂盒(PCR荧光法)购自上海复星长征医学科学有限公司，具体操作方法严格按照说明书，结果判断见表1。

表1 基因结果判断

1.5 统计学方法 -采用Epi info6.0统计软件，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，均数比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV基因型的分布特点 138例HBV慢性感染者中，B基因型46例(33%)，C基因型89例(64%)，B/C混合基因型1例(0.7%)，非B非C型2例(1.4%)，提示本地区以C基因型为主，其次为B基因型，有少量的B/C混合基因型及其他类型的基因型。

2.2 慢性乙型肝炎患者不同基因亚型临床特点 慢性乙型肝炎113例，B基因型36例，男性所占比例为75%（27/36），C基因型74例，男性所占比例为78%(58/74)，两组资料在性别上差异无统计学意义(P=0.877)，同时在ALT水平(P=0.826)、HBeAg阳性率(P=0.257)、HBV DNA载量水平(P=0.848)上，两组之间差异亦无统计学意义(P＞0.05)；B/C混合基因型及非B非C型因样本量少未列入统计，见表2。

表2 CHB组中不同基因型临床资料特点(±s)

表2 CHB组中不同基因型临床资料特点(±s)

注：C基因与B基因比较，aP值均＞0.05。

2.3 不同病情患者各基因型分布情况 CHB轻度、中度两组资料中，C基因与B基因所占比例相当，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。而随着病情的进展，在CHB重度、代偿期肝硬化两组资料中，C基因型所占比例明显高于B基因型，差异均有统计学意义(均P＜0.05)，见表3。

表3 不同基因型与临床诊断之间的关系[例（%）]

3 讨论

HBV基因型分析测定方法众多，我国《慢性乙型肝炎防治指南》上，有直接DNA序列分析法、聚合酶链反应-限制性长度多态性分析（RFLP）、单克隆抗体酶联免疫法（ELISA）、多对型特异引物巢式PCR基因分型及S基因测序法等，但上述检测方法或多或少存在操作繁琐、技术要求高、费用昂贵等劣势，较难在临床工作中广泛开展。鉴于我国慢性HBV感染者中以B、C基因型为主，故我们采用了商用荧光PCR检测试剂盒(针对B、C基因型设计)，它有检测技术成熟、操作快捷、灵敏度高、费用低廉等优势。

我国HBV慢性感染者中，北方地区以C基因型为优势，而随着地理位置的南移，逐渐以B基因型为主。本地区为江苏中部地区，相关HBV基因型测定工作尚未大样本量开展，故我们对138例HBV慢性感染者做了检测，提示本地区以C基因型为主，次之为B基因型，与经继生等[7]报道一致，当然仍需更大样本量求证。

更多证据表明[8-9]，HBV基因型与肝脏疾病进展、临床转归、治疗疗效均有一定关系，C基因型比B基因型HBV感染后更容易导致肝脏炎症活动、肝纤维化、肝硬化、肝癌的进展，但也有报道认为B基因较C基因易导致严重的临床病情[10-11]。

本研究CHB患者组中，ALT水平、HBV DNA病毒载量，B、C基因型之间差异无统计学意义，HBeAg阳性率C基因组较B基因组高，但差异亦无统计学意义，与杨家红等[12]报道一致。从B、C两种主要基因在疾病谱中分布情况来看，发现从CHB轻度～重度、肝硬化四组中，B基因比例逐渐下降，而C基因比例逐渐升高，本研究支持C基因更易导致病情进展的观点。

[1]Okamoto H,Tsuda F,Sakugawa H,et al.Typing hepatitis B virus by homology in nucleotide sequence:comparison of surface antigen subtypes[J].J Gen Virol,1988,69(10):2575-2583.

[2]Norder H,Courouce AM,Magnius LO.Complete genomes,phylogenetic relatedness,and structural proteins of six strains of the hepatitis B virus,four of which represent two new genotypes[J].Virology,1994,198(2):489-450.

[3]CaoGW.ClinicalrelevanceandpublicsignificanceofhepatitisBvirusgenomicvariations[J].WorldJGastroenterol,2009,15(46):5761-5769.

[4]TranTT,TrinhTN,AbeK.NewcomplexrecombinantgenotypeofhepatitisBvirusidentifiedinVietnam[J].JVirol,2008,82(11):5657-5663.

[5]Olinger CM,Jutavijittum P,Hubschen JM,et al.Possible new hepatitis B virus genotype,southeast Asia[J].Emerg Infect Dis,2008,14 (11):1777-1780.

[6]高俊薇,李雅娟,庄 辉,等.中国11城市乙型肝炎病毒慢性感染中乙型肝炎病毒基因型分布[J].中华流行病学杂志,2007,28(4): 315-318.

[7]经继生,黄 培,阮成荣,等.江苏省乙型肝炎病毒基因型分布与临床相关性[J].江苏大学学报（医学版）,2006,16(2):123-126,129.

[8]Kobayashi MA,Suzuki F,Akuta N,et al.Correlation ofYMDD mutation and breakthrough hepatitis with hepatitis B virus DNA and serum ALT duringlamivudinetreatment[J].HepatolRes,2010,40:125-134.

[9]丁静娟,张 权,彭 亮,等.贵州省四城市乙型肝炎病毒感染者病毒基因型调查研究[J].中华流行病学杂志,2006,27(11):977-980.

[10]刘映霞,胡国龄,谭德明,等.湖南省乙肝病毒基因型分布及临床意义[J].湖南医科大学学报,2002,27(1):29-31.

[11]赵 红,李 俊,张跃新,等.乙型肝炎病毒基因型与国产阿德福韦酯片疗效相关性的研究[J].中华实验和临床病毒学杂志,2007, 21(3):282-284.

[12]杨家红,张 浩,张 健,等.四川省德阳地区慢性乙型肝炎病毒感染者病毒基因型的分布与临床意义[J].中华传染病杂志,2011, 29(12):752-755.

Distribution of hepatitis B virus genotyps in Taixing area and its clinical significance.

HUANG Bing,ZHU Xin-gong,HE Xiao-feng,YANG Jian-gong,ZHANG Hui-ai.
Department of Infectious Diseases,Taixing People's Hospital Affiliated to Medical College of Yangzhou University and Bengbu Medical College,Taixing 225400,Jiangsu,CHINA

Objective To investigate the distribution of hepatitis B virus(HBV)genotypes in Taixing,and explore its clinical relationship.MethodsAtotal of 138 patients with chronic HBV infection,including 113 cases of chronic hepatitis B(CHB)and 25 cases of liver cirrhosis,were enrolled.Quantitative fluorescence PCR was used for determination of serum HBV genotyping,then the results were analyzed by statistical method.ResultsOf the 138 patients,46 (33%)were genotype B,89(65%)were genotype C,1(0.7%)were genotype B/C mixed;2(1.3%)were neither genotype B nor genotype C.In CHB patients,genotype B and genotype C had no significant differences between the ALT value, HBV DNAlevels and HBeAg positivity;genotype C showed a gradual increase in severe CHB and liver cirrhosis patients. Conclusion The predominant HBV genotypes in the district are confirmed to be genotype C,then,genotype B,few genotype B/C mixed and neither genotype B nor genotype C.Genotype C cause more serious hepatic lesion than genotype B.

Hepatitis B virus;Genotype;Quantitative fluorescence PCR;Distribution;Clinical significance

R512.6+2

A

1003—6350（2014）02—0206—02

2013-07-17)

江苏省泰州市科技局科研项目（编号：TS2010102）

朱新功。E-mail：zxgccfzyh@sina.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.02.0077