1 107例宫颈病变患者人乳头瘤病毒感染及基因型分析

王 昕，马少华，王金桃，朱盼东

(芜湖市妇幼保健院 检验科， 安徽 芜湖 241000)

目前已发现HPV有150余种基因型[1]，其中30个与生殖道疾病有关。人们根据其致癌性将其分为高危型和低危型，低危型(HPV6,11)主要引起外生殖器湿疣等宫颈上皮内良性病变，大量宫颈癌病因学研究证实，高危型(HPV16,18,31,33,35)感染是宫颈癌诱发因素[2]。目前已知宫颈癌是一种可经过医学干预使其发病率和病死率下降的妇科常见恶性肿瘤[3]。而全球浸润性宫颈癌病例中HPV型别分布的研究表明其与地理区域的变化有很大关系[4]。本文对我市宫颈病变患者宫颈脱落细胞标本进行HPV分型检测，并对HPV感染率及其型别分布情况进行分析，为我市宫颈病变及生殖道肿瘤的早期防治提供科学依据，并为HPV疫苗的研发和使用提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年1月～2013年6月我院门诊就诊的1 107例女性。年龄18～77岁。

1.2 仪器与试剂 HybriMax医用核酸分子快速杂交仪(凯普)，DNA提取试剂盒(凯普)，人乳头瘤核酸扩增分型检测试剂盒(凯普)。

1.3 标本采集 在本检测前1～3 d禁阴道冲洗和阴道内用药。先擦去宫颈表面和穹隆分泌物，再用特制小毛刷以顺时针方向旋转3～5周，收集宫颈脱落细胞，将毛刷和标本一起放在HPV保存液中送检。

1.4 HPV-DNA分型检测 应用凯普人乳头瘤核酸扩增快速杂交基因分型检测试剂，可检出21个HPV亚型，包括15种高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)和6种低危型(6、11、42、43、44、81CP8304)。实验操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 统计学分析 应用SPSS 17.0软件进行统计学相关分析，以P<0.05为有统计学意义。HPV基因型感染例数包括单一感染和含该基因的多重感染；≥2型为多重感染(不论是高危型或低危型)，多重感染者各亚型阳性率重复计算。

2 结果

2.1 HPV感染情况 在1 107例受检者中HPV阳性230例，总感染率为20.78%(230/1 107)。其中单一感染175例(76.09%)，二重感染41例(17．83%)，三重感染13例(5.65%)，四重感染1例(0．43%),多重感染率随合并感染的型别数增加逐渐下降。

2.2 HPV基因型分布 在所有230例HPV阳性样本中除未检出HPV高危型35,51型和低危型43型外，其余各型均有检出。其中低危型感染为40例(17.39%),高危型感染为173例(75.22%)，高低危混合感染17例(7.39%)。检出的HPV各型别的感染率中HPV16最高为28.26%(65/230);其他型别感染率从高到低依次为HPV58:23.04%(53/230);HPV33:12.61%(29/230);HPV52:11.74%(27/230);HPV6:9.57%(22/230);HPV53:9.57 %(22/230);HPV11:8.70%(20/230);HPV81:5.65%(13/230);HPV68:4.35 %(10/230);HPV66:3.91%(9/230);HPV18:3.48%(8/230);HPV31:3.04%(7/230);HPV39:1.74 %(4/230);HPV56:1.30%(3/230);HPV45:1.30%(3/230);HPV42:1.30%(3/230);HPV44:0.43%(1/230);HPV59:0.43%(1/230)。低危型以6、11型为主，高危型16、58、33型为最高前三位。

2．3 HPV感染的人群年龄分布 在各年龄组受试者中,>60岁组妇女总HPV感染率最高,为42.86%,其次为≤20岁组，为27.78%，其余各年龄组数据见表1。对数据进行卡方检验,各年龄组受试者之间总HPV感染率差异无统计学意义(χ2=8.668,P>0.05)。

表1 不同年龄组HPV阳性率比较[n(%)]

3 讨论

人乳头瘤病毒分为高危型和低危型两类，不同型别的HPV感染对于宫颈癌发生的危险程度不同，且HPV感染的致病性和后果差异也与HPV型别有关[4]。流行病学研究表明，外生殖器湿疣及宫颈良性病变主要由低危型引起，高危型主要与宫颈癌相关，高危型人乳头瘤病毒的持续反复感染是宫颈癌发生的必要条件。因此，不同地区和人群的HPV感染亚型不同的分布资料为生殖道肿瘤的病因学、癌前病变和宫颈癌防治策略提供了依据。HPV感染型别分布有地区差异性，在宫颈细胞学诊断的人群中，亚洲地区以人乳头瘤病毒16、18、33 为主，人乳头瘤病毒16、58、18 为南美地区感染的主要型别；欧洲地区的人乳头瘤病毒型别分布则以HPV16、31、18 为主。有文献报道[5]宫颈癌患者人乳头瘤病毒感染的常见型为16、18、45、31、33、58 和52 型，亚洲地区58 和52 型高于45、31 和33 型；在非洲西部宫颈癌组织中是以HPV45型为主；而HPV39和59型仅在美洲的中部和南部宫颈癌组织中出现。国内研究也陆续报导不同地区的HPV型别特点：李涅[6]研究结果显示河南省HPV亚型中感染率居前5位的分别为16、6、11、52、58型；靳琼等[7]报道西藏自治区子宫颈感染HPV 型主要依次为16、33、58、52；刘曌等[8]对新疆地区239例患者研究结果显示，感染频度前8位的是HPV16、31、35、52、39、51、33、58。本研究结果显示，我市女性宫颈癌患者其HPV 基因亚型以16、58、33、52、6和53为感染率的前五位，其中6和53相同均为 9.57%。与亚洲地区的分布基本相似，但HPV 18型感染率不高仅为3.48%，提示有一定的人群和地区特点。对HPV感染与年龄的相关性有两种观点：一种认为随年龄的增长HPV感染率逐渐降低；另一种认为在年轻女性与年长女性有两个HPV感染高峰[6]，即≤20岁和>60岁。可能与卵巢功能有关，低雌激素水平，机体对外界有害因素的低抵抗力，加之妊娠、分娩导致宫颈受损，更易引起人乳头瘤病毒感染。本研究结果显示，>60岁组总HPV感染率最高，其次为≤20岁组，但各年龄组受试者之间总HPV感染率差异无统计学意义。这一结论与伍星蓉等[9]研究结果相同。

HPV的多重感染是否促进宫颈病变的发生一直是学者们关注的问题，Lee等[10]认为多重感染比单一型别感染者有更高的宫颈癌发生的危险性。陶萍萍等[11]报道HPV的多重感染率在宫颈癌中为48.1%，而在宫颈良性病变中为44.6%，并提示随着病变的升级，HPV的多重感染率在增加。其他研究[12]也显示多重感染比例随宫颈病变级别的增加而增加。在本研究中HPV多重感染率为23.91%，并且以二重感染为主(17.83%)，主要为HPV16型合并其他型别的感染。

总之，由于不同地区和人群的HPV感染亚型的分布不同，各种亚型对不同种族人群致癌性的强弱也明显不同，因此研究和开发HPV疫苗用于预防和治疗HPV感染已成为热点。本次HPV感染调查所获得资料可为本地区宫颈癌防治提供一组可靠的数据，为干预宫颈癌的发生、发展，制定相关措施提供理论依据，同时还可以为今后疫苗有针对性地选择应用提供参考。

【参考文献】

[1] LAI CH,HUANG HJ,HSUEH S,etal.Human papillomavirus genotype in cervical cancer:a population-based study [J].Int J Cancer,2007,120(9):1999-2006.

[2] FANTA BE.The distribution of human papillomavirus infection in women with cervical histological abnormalities from an area with high incidence of cervical cancer [J].Ethiop Med J,2005,43(3):151-158.

[3] 李毅.宫颈病毒感染与宫颈癌相关因素研究[J].中华医院感染学杂志,2008,18(8):1107-1108.

[4] World Health Organization,International Agency for Research on Cancer.IARC handbooks of cancer prevention.Cervix cancer screening[M].Lyon:IARC,2005：10.

[5] CLIFFORD GM，GALLUS S，HERRERO R，etal． Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International Agency for Research on Cancer HPV prevalence surveys:a prevalence surveys:a pooled analysis [J]． Lancet，2005，366:991-998．

[6] 李涅，张菊新.不同年龄女性生殖道人乳头瘤状病毒分布情况分析[J]中华实用诊断与治疗杂志,2012,26(9)：909-911.

[7] 靳琼，沈铿，李辉，等．西藏自治区妇女子宫颈人乳头瘤病毒感染现状调查及相关因素分析[J]．中华妇产科杂志，2009，44(12)：898-902．

[8] 刘曌，白慧丽，陶林，等．新疆地区妇女宫颈病变组织中HPV感染与分型研究[J]．中华实用诊断与治疗杂志,2013，27(3)：243-244.

[9] 伍星蓉，朱威，张海萍，等． 400例健康体检妇女宫颈感染人乳头瘤状病毒基因亚型的检测及分析[J].首都医科大学学报,2009,30(4)：560-562.

[10] LEE SA,KANG D,SEO SSetal． Multiple HPV infection in cervical cancer screened by HPV DNA chip[J]．Cancer Lett，2003，198:187-192．

[11] 陶萍萍，卞美璐，欧华，等． 导流杂交基因芯片技术在人乳头瘤病毒检测中应用的研究[J]． 中华妇产科杂志，2006，41(1):43-47．

[12] 宋保志，林美姜，赵月明.689例宫颈HPV感染临床分析[J].福建医药杂志，2010，32(4)：35-37.