牦牛嗜皮菌病的诊断

周跃塔，曾 泽，张 斌，汤 承

（西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041）

牦牛嗜皮菌病（Dermatophilosis）是由刚果嗜皮菌（Dermatophiluscongolensis）引起的一种呈急性或慢性感染的疾病，以浅表渗出性、脓疱性皮炎，局限性痂块性和脱屑性皮疹为主要临床特征，为各种动物和人类共患的皮肤性传染病［1-2］。该病属于皮肤接触性传染病，通过接触或吸血昆虫传播，主要感染牛、绵羊和马，也感染山羊、许多野生哺乳动物以及蜥蜴和海龟，偶尔也感染人、犬、猫和猪［3-4］。在英国、澳大利亚、阿根廷、加拿大、美国、印度等许多国家均有嗜皮菌病的报道。国内甘肃省、新疆、江苏省等地也均有报道。陶金陵等［5］、效宏儒等［6］分别从绵羊、牦犊牛分离鉴定出刚果嗜皮菌。韩文星［3］建立了动物嗜皮菌病的PCR诊断方法。本研究从四川省红原县发病牦牛被毛根部分离获得刚果嗜皮菌，确诊发病牦牛为刚果嗜皮菌感染。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 采自四川省红原县发病牦牛体表结痂处形成的毛团，共6个样本。

1.1.2 培养基及试剂 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA），青岛海博试剂有限公司产品；TaqDNA聚合酶、dNTP、DNA Marker DL 2 000、Cycle-pure kit试剂盒，宝生物工程（大连）有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 核酸的提取 剪取被毛根部并将其剪碎，根据普通革兰阳性菌DNA提取方法提取DNA，提取的DNA放置于-20℃备用。

1.2.2 PCR检测 根据已建立好的刚果嗜皮菌的PCR检测方法［3］，对提取的DNA进行检测，引物由宝生物工程（大连）有限公司合成。分别对6个样的DNA进行PCR扩增，PCR扩增产物用20g／L琼脂糖凝胶电泳检测，观察结果。用PCR纯化试剂盒，宝生物工程（大连）有限公司产品；对PCR扩增产物进行纯化，纯化产物送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。

2 结果

2.1 发病情况和临床症状

四川省红原县一批牦牛发生以渗出性和脓包型皮炎为特征的疾病，各个年龄段的牦牛均有发生，发病率高达30%以上。发病牦牛体温，脉搏，呼吸正常，皮肤粗糙且有的会出现面包样皮屑，皮肤表面可见黑褐色的黄豆大小的结节，表面凹凸不平，体型消瘦，被毛逆行、稀短，体表结痂常形成毛团。

2.2 PCR检测

PCR扩增产物用20g／L琼脂糖凝胶电泳检测，电泳结果显示扩增片段约为600bp，与预期的606 bp相一致（图1）。用PCR纯化试剂盒，对PCR扩增产物进行纯化，纯化产物送上海生工生物工程技术服务有限公司测序，测序结果在NCBI中Blast比对分析发现，与GenBank中已收录的刚果嗜皮菌相应的基因序列同源性达100%，进一步确定6个样均为嗜皮菌。由此我们可以确诊发病牦牛是由刚果嗜皮菌感染引起的。

图1 刚果嗜皮菌PCR鉴定结果Fig.1 The PCR Detection of Dermatophilus congolensis

3 讨论

嗜皮菌病是由刚果嗜皮菌致发的一种人兽共患的皮肤传染病，在由单一微生物引起的动物疫病中，没有几种象刚果嗜皮菌病那样致发各种动物发生如此惊人的临床病象［7-8］。不仅对所有年龄的牛、羊、马属动物及许多野生动物有不同的临床表现，也有自然感染的报道，而且刚果嗜皮菌无宿主特异性。

本研究从四川省红原县发病牦牛的毛团根部中分离获得致病菌，根据临床症状、PCR检测和序列分析结果确诊发病牦牛为刚果嗜皮菌感染。刚果嗜皮菌属真菌，革兰染色阳性，有大量的孢子和菌丝［9］，一般多发生于多雨季节或潮湿多水的地区，因此，可以将畜群由潮湿草场转至干燥地区，同时应防止畜群受到雨淋以预防嗜皮菌病的发生。对于患病动物应从畜群中隔离出来，并对圈舍和畜体严格消毒，并在畜群中应用灭蚊蝇粉喷雾以驱避蚊蝇等昆虫，切断本病的传染途径，防止更多的动物感染嗜皮菌［10-12］。另外，刚果嗜皮菌是一种人兽共患病，在处理发病牦牛和清理被污染环境时应加强个人防护。

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