延胡索酸泰妙菌素对猪支原体肺炎的临床疗效实验

吴彤，李鹏飞，郭桂芳，张海燕，王中杰，邹杰，师凯，杨升，张跃伟，吴文学∗

（1.南京农业大学生命科学学院，南京210095；2.中国兽医药品监察所，北京100081；3.中国农业大学动物医学院，北京100193）

延胡索酸泰妙菌素对猪支原体肺炎的临床疗效实验

吴彤1，李鹏飞2，郭桂芳2，张海燕3，王中杰3，邹杰3，师凯3，杨升3，张跃伟3，吴文学3∗

（1.南京农业大学生命科学学院，南京210095；2.中国兽医药品监察所，北京100081；3.中国农业大学动物医学院，北京100193）

为了研究延胡索酸泰妙菌素对猪支原体肺炎的临床疗效，选用体重90 kg左右的2月龄健康杜洛克长白杂交猪，通过建立疾病模型和疗效评价指标判别延胡索酸泰妙菌素的治疗效果。结果表明，按1000 kg饲料添加100 g或200 g延胡索酸泰妙菌素，可以显著减轻感染猪的临床症状和病理变化，提高猪的增重，其效果优于磷酸泰乐菌素预混剂。

延胡索酸泰妙菌素；猪支原体肺炎；预混剂；临床疗效

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的严重危害养猪业健康发展的传染病，全世界广泛存在。我国是世界养猪大国，每年因该病损失上百亿元。现有疫苗虽然能够明显减轻攻毒引起的病变，降低发病率，但是对临床病原感染的保护效果却并不理想。国外对采用三种不同疫苗免疫策略的20个猪场的检测结果发现，53%的肺检出有猪肺炎支原体感染，55.9%的肺表现肉眼可见的流行性肺炎病变［1］。为此，使用抗菌药物成为控制该病的主要手段。泰妙菌素（Tiamulin）是截短侧耳素类动物专用抗生素，对支原体及某些革兰氏阳性菌具有良好的抗菌活性。米同国等［2］报道，延胡索酸泰妙菌素可溶性粉按60 mg／L剂量混饮，对临床猪肺炎支原体感染发病猪治疗的有效率为100%，治愈率为95%。但是，延胡索酸泰妙菌素混饲的治疗效果尚未见报道。为此，实验采用延胡索酸泰妙菌素预混剂和人工感染猪肺炎支原体动物模型研究了延胡索酸泰妙菌素混饲给药的治疗效果。

1 材料

1.1 药物 延胡索酸泰妙菌素预混剂，80%，批号为06050591138，保加利亚Biovet JSC公司生产；磷酸泰乐菌素预混剂，89%，批号06071209－2，西安亨通光华制药有限公司生产。

1.2 培养基 根据《中华人民共和国兽药典》中支原体培养基的配制方法［3］配制。

1.3 菌种与诊断试剂制备 猪肺炎支原体济南系，中国兽药监察所提供。猪肺炎支原体抗体检测试剂盒，美国Idexx公司生产。

1.4 实验动物 60头2月龄健康杜洛克长白杂交猪，公母兼有，平均体重30 kg左右，北京九鼎良种养殖有限公司。出生后未接种过支原体疫苗且血清抗体阴性。同时，参照沈青春等［4］建立的PCR方法检测鼻拭子中病原为阴性。

1.5 饲料 未添加抗生素全价仔猪料：玉米59.3%、麸皮20%、三七糠6.8%、豆饼12.4%、贝壳粉1.2%和盐0.3%，另外每50 kg饲料中添加微量元素硫酸铜25 g、硫酸亚铁15 g、硫酸锌10 g、干酵母35 g、钙片15片、硫酸钴30 mg、亚硒酸钠5 mg，北京震亚饲料厂生产。

2 方法

2.1 实验动物分组 60头健康杂交猪购回后观察两周，无咳嗽、气喘等症状，X光透视片、支原体抗体检测和病原PCR检测结果为阴性。随机分为6组，每组10头。根据产品推荐剂量（以有效成份计100～200 mg／kg），将延胡索酸泰妙菌素预混剂高、中、低剂量组每吨饲料添加量分别定为200、100和50 g（以有效成份计），同时设正常对照组、攻毒不给药的阳性对照组和磷酸泰乐菌素预混剂对照组（产品推荐剂量为每吨饲料添加磷酸泰乐菌素500 g）。实验期间，各组猪自由采食与饮水。

2.2 实验攻毒 用生理盐水100倍稀释强毒，混匀后气管内接种正常对照组以外的50头杂交猪，每头20 mL（1x106CCU／mL）。疾病模型指标：包括临床症状、血清学诊断、剖检症状、X光透视片检。

2.3 给药治疗 接种后15～30 d，密切观察，待猪只发病时，开始经混饲给药进行治疗，连续7 d，给药结束后20 d，进行X光片检。给药前后对每头猪进行称重并记录。

2.4 临床观察

2.4.1 临床计分标准 每日观察猪群症状20～30 min，在观察期间，主要进行呼吸情况观察、咳嗽情况观察和精神状态与食欲观察。呼吸情况主要观察呼吸的方式和程度以及鼻腔粘膜的状态；咳嗽情况主要观察咳嗽的频率和程度；精神状态和食欲主要观察猪是否喜欢活动，运动性如何以及进食情况。根据参考文献资料［2－4］对各项指标进行了评分。

2.4.2 病变计分标准 通过X光检查和解剖检查结果来综合判定人工感染及给药前后每头猪的病理变化。X光检查X线光照条件：管电压：95～100 kv；管电流：100 mA；曝光时间：0.06～0.08 s；焦距：1 m；滤线栅：10∶1。对实验猪的右侧位和腹背位分别进行X光检查，记录肺野中央区域的心膈三角区和心脏外围不规则絮状阴影的范围大小、浓度和深浅程度。剖检时主要观察7个肺叶（左侧尖叶、心叶、膈叶、右侧尖叶、心叶、膈叶和副叶）的病变程度、气管、支气管内容物情况和肺门淋巴结的病变情况。根据X光检查和剖检结果给每头猪进行病变计分。

2.4.3 血清学诊断 耳静脉采血2 mL，室温放置30 min后3000 rpm离心5 min，收集上层血清，用稀释液稀释40倍，按Idexx猪支原体检测试剂盒说明书进行检测。在阳性对照组平均值和阴性对照组平均值的差距≥0.150且阴性对照的光吸收平均值≤0.150时，如果样本的光吸收值A（650）和阳性对照的光吸收平均值的比值S／P＜0.3，则表示抗体检测结果为阴性；S／P值在0.3～0.4之间则表示检测结果可疑；S／P＞0.4则表示抗体检测结果为阳性。

2.4.4 疗效评价指标 死亡率：实验期间“出现猪支原体肺炎的典型症状并死亡，剖检有典型的特征性病变，即为感染死亡，根据各组动物中的死亡数计算死亡率。治愈率：实验期间，经用药后猪只的临床症状基本消失（计分值＜3），X光透视片检结果为阴性，均属治愈。根据各组动物中的治愈数计算治愈率。显效率：用药后咳嗽、气喘、腹式呼吸等症状与对照组相比明显减轻（计分减少值≥5），经X光透视片检有明显的病肺阴影消散痕迹，判为显效。据每组动物显效数计算显效率。平均增重：根据给药前及实验结束时的猪只体重，计算每头猪的增重。据此计算每组猪平均增重。

2.5 数据的分析处理 用EXCEL软件进行数据的t检验，P＞0.05表示差异不显著，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极。

3 结果

3.1 人工诱发疾病模型

3.1.1 血清学检测 经试验盒检测，攻毒前支原体抗体为阴性，攻毒后15 d血清中支原体抗体检测几乎均转为阳性。

3.1.2 X光检查 正常猪肺部经X光检查，整个肺野清晰，心脏轮廓清楚，界限分明（图1、图2）。感染猪两侧全肺遍布较为浓密的絮状阴影，心脏轮廓不清晰，呈现小叶实质浸润性病变（图3）或肺段实质浸润性病变（图4）。

图1 正常猪肺部X线正位

图2 正常猪肺部X线侧位

图3 感染猪X线正位

图4 感染猪X线侧位

3.1.3 临床症状观察 人工感染后4～12 d，所有猪均出现咳嗽与喘气症状，严重者表现高频率的痉挛性咳嗽，并明显可见腹式呼吸，个别猪因呼吸困难呈犬卧姿势。排除意外死亡和病变计分未超过2的猪，获得人工感染成功的猪分别为阳性对照组8头、低剂量组9头、中剂量组9头、高剂量组8头和药物对照组9头。

3.2 药物疗效

3.2.1 增重 治疗前后，正常对照组猪的平均增重最高（11.4±3.08 kg），阳性对照组的平均增重最低（5.55±3.59 kg），药物对照组的平均增重为6.61± 4.59 kg，泰妙菌素低剂量组、中剂量组和高剂量组的平均增重分别为6.30±2.07 kg、9.12±2.49 kg和8.99±3.45 kg（图5）。

图5 各组增重结果比较

3.2.2 临床症状观察 治疗前后，阳性对照组猪的临床症状计分平均下降了5.75±4.13，药物对照组的临床症状计分平均下降了9.78±3.67，泰妙菌素低、中和高剂量组的临床症状计分平均下降值分别为8.11±3.26、10.56±1.51和10.5±1.85（图6）。

图6 各组临床症状计分改善结果比较

3.2.3 病变检查 治疗前后，阳性对照组猪的病变计分下降了5.8±1.2，药物对照组的临床症状计分平均下降了13.2±5.3，泰妙菌素低、中和高剂量组的临床症状计分平均下降值分别为11.2±2.6、15.5 ±4.6和16.0±4.3（图7）。

3.2.4 疗效评价 根据对每头猪治疗前后的临床症状和病变计分结果，阳性对照组猪、药物对照组、泰妙菌素低、中和高剂量组的治愈率分别为12.5%、55.6%、44.4%、66.7%和62.5%，显效率分别为50%、88.9%、77.8%、100%和100%。

图7 各组病变计分改善结果比较

4 讨论与小结

肺炎支原体是一类没有细胞壁的病原菌，因此通过抑制或破坏细菌细胞壁来发挥抑菌或杀菌作用的药物通常对猪肺炎支原体无效，能够抑制或杀死猪肺炎支原体的药物主要有四环素类、大环内酯类、林可胺类和氯霉素类药物。张纯萍等［7］通过体外药敏试验发现，4株猪肺炎支原体对泰妙菌素和环丙沙星最为敏感（MIC≤0.03 μg／mL），其次分别为四环素（MIC≤0.03或0.12 μg／mL）和多西环素（MIC≤0.03～0.25 μg／mL）、泰乐菌素（MIC＝0.12 μg／mL）、林可霉素（MIC＝0.25或0.5 μg／mL）、替米考星（MIC＞0.5 μg／mL）、氟苯尼考（MIC＝1或2 μg／mL）、磺胺甲恶唑和头孢噻呋（MIC＞4 μg／mL）。由此说明，泰妙菌素和环丙沙星一样，都是猪肺炎支原体最敏感药物，可作为最理想的抗猪肺炎支原体感染的药物。王丽平等［8］发现，猪链球菌、金黄色葡萄球菌对泰妙菌素也较敏感，MIC分别为0.125和0.5 μg／mL。曹继军等［9］发现，血清Ⅰ型猪胸膜肺炎放线杆菌对延胡索酸泰妙菌素的MIC为16 μg／mL，且延胡索酸泰妙菌素预混剂按100～200 mg／kg的剂量混饲给药，连续7 d，可有效治疗血清I型猪胸膜肺炎放线杆菌感染引起的猪传染性胸膜性肺炎。

研究发现，延胡索酸泰妙菌素预混剂对于人工感染猪肺炎支原体引起的临床症状有明显治疗效果，大多数的猪在用药后症状明显减轻，尽管停药后个别猪会复发，但都症状较轻。

正常猪肺部经X光检查，整个肺野清晰，心脏轮廓清楚，界限分明，在侧位片上，由于猪的脂肪较多，X线在穿透心前区时要穿过较多组织，在加之心脏靠前，压缩该区的肺脏，因此心前区的影像较模糊。感染猪两侧全肺遍布较为浓密的絮状阴影，心脏轮廓不清晰，表现间质浸润、小叶实质浸润和或肺段实质浸润。经药物治疗后，大多猪肺脏在影像上的表现大都得到了不同程度的恢复。心脏轮廓和肺野已经比较清晰。侧位肺叶区病变阴影基本消退，仅在心叶病变较严重猪的肺心叶区域有少量絮状阴影。剖检发现，与X光检查结果相符，发病猪全肺肿大，有不同程度的水肿和气肿，肺叶边缘圆钝，按压富有弹性，搓捏有黏着感，感觉硬度不均匀。病程较短的猪，肺病变的颜色多为淡红色或灰红色，半透明状，病变界限明显，呈“肉样变”；病程较长的猪，病灶呈灰白色或灰红色，坚韧度增加，呈“胰变”。肺门淋巴结和纵隔淋巴结肿大，呈灰白色，水肿。气管和支气管内充满浆液性渗出液，并含有小气泡。

综合上述各项结果，按每1000 kg饲料添加100～200 g（以有效成分计）延胡索酸泰妙菌素预混剂，对猪支原体性肺炎有显著疗效，且具有明显促生长作用，优于磷酸泰乐菌素预混剂。

［1］ Hillen S，von Berg S，Köhler K，et al.Occurrence and severity of lung lesions in slaughter pigs vaccinated against Mycoplasma hyopneumoniae with different strategies［J］.Prev Vet Med，2014. pii：S0167－5877（13）00394－2.doi：10.1016／j.prevetmed.2014.

［2］ 米同国，黄占欣，孟志敏，等.延胡索酸泰妙菌素可溶性粉对猪支原体肺炎的疗效研究.安徽农业科学，2011，6：19－24.

［4］ 沈青春，覃青松，王琴，等.PCR方法测定猪肺炎支原体培养物菌数.中国预防兽医学报，2006，1：15－19.

［5］ Halbur P G，Paul P S，Frey M L，et al.Comparison of the Pathogenicity of Two US Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Isolates with that of the Lelystad Virus［J］.Vet Pathol，1995，32：648－660.

［6］ Thacker E L，Thacker B J，Young T F，et al.E.ect of vaccination on the potentiation of porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）－induced pneumonia by Mycoplasma hyopneu⁃moniae［J］.Vaccine，2000，18：1244－1252.

［7］ 张纯萍，沈青春，胡海燕，等.猪肺炎支原体体外抗菌药物敏感性试验研究，中国兽药杂志，2013，4：20－25.

［8］ 王丽平，江善祥，史晓丽，等.泰妙菌素的体外抑菌活性与一般毒性研究.畜牧与兽医，2004，07：10－18.

［9］ 曹继军，李秀波，张秋楠，等.延胡索酸泰妙菌素预混剂对猪胸膜肺炎的疗效试验.中国兽医杂志，2007，06：22－27.

［10］黄贺贤，曾振灵，黄显会.截短侧耳素类抗生素－泰妙菌素的研究进展.中国兽药杂志，2010，44（6）：42－45.

［11］王海莲，马登龙.泰妙菌素等防治山羊传染性胸膜肺炎的效果观察.山东畜牧兽医，2012，12：35－40.

（编辑：陈希）

Therapeutic Effect of Tiamulin Fumarate on Mycoplasmal Pneumonia of Swine

WU Tong1，LI Peng－fei2，GUO Gui－fang2，ZHANG Hai－yan3，WANG Zhong－jie3，ZHOU Jie3，SHI Kai3，YANG Sheng3，ZHANG Yue－wei3，WU Wen－xue3∗
（1.College of Life Sciences，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China；2.China Institute of Veterinary Drugs Control，Beijing 100081，China；3.College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

This study aimed to evaluate the clinical therapy efficacy of tiamulin fumarate against mycoplasmal pneumonia of swine.We established mycoplasmal pneumonia models with 2 months old Duroc Landrace hybrid pigs about 90 kg bodyweight，and evaluated the therapeutic effect of tiamulin fumarate according to the improvement of the gains of bodyweight，clinical symptoms and pathological changes.The results showed that the bodyweight gains and the improvements of clinical symptoms and pathological changes of the high and mediumdose groups were significantly higher than the positive control group and drug control group，which suggest that tiamulin at the dosage of 100 g or 200 g per 1000 kg feed has a significant therapy effect against mycoplasma pneumonia of swine than tylosin phosphate premix.

tiamulin fumarate；mycoplasmal pneumonia of swine；premix；therapeutic effect

2014－09－29

A

1002－1280（2014）11－0029－05

S856.3

吴彤，从事生物技术专业方面研究；李鹏飞同属第一作者。

吴文学。E－mail：wuwenxue＠cau.edu.cn