不同稀释液对β-HCG稀释检测的影响*

卢德权

(佛山市顺德区第一人民医院附属陈村医院，广东 佛山 528313)

人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盘滋养层细胞分泌的糖蛋白激素，由α、β两个亚单位和237个氨基酸组成[1]。通过对HCG定量的检测．可以辅助诊断妊娠及与妊娠有关的疾病．特别是对恶性葡萄胎及绒毛膜癌的治疗以及病情监测有重要的意义。由于α亚基与其他激素(LH、FSH、TSH)有共同的抗原性，β亚基则有其特异性，所以临床应用多以β亚基作为靶抗原来检测HCG，故又称为β-HCG[2]。滋养细胞肿瘤的患者血清β-HCG值远高于20万mIU/ml，甚至几百万mIU/ml．但现有的检测方法检测血β-HCG的线性上限均不超过10000 mIU/ml．对这部分患者的β-HCG无法准确定量，以观察β-HCG测定值随患者的病情变化情况。临床实验室多采用样本稀释后检测乘上稀释倍数报告临床，但所用稀释液各有不同。

对于检测超过线性范围的结果必须进行稀释，当然，只有厂家推荐的或实验室已证实可用的稀释液才能用于稀释样本[3]。因此本文通过选用HCG稀释液、零值血清、生理盐水和蒸馏水作为稀释液．对高浓度β-HCG血清样本进行稀释后测定，以观察不同稀释液对测定结果的影响，为选择适合的样本稀释液提供依据。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 西门子ADVIA centaur电化学发光免疫分析仪与配套的β-HCG试剂。β-HCG检测的线性范围为0．1～10000 mIU/ml，总精密度CV<6%。HCG稀释液(Diluent)为厂家推荐作为仪器检测HCG项目超过线性范围上限时的样本稀释液。

1.2检测对象 到我院就诊的妊娠相关疾病患者高浓度β-HCG血清样本1例，β-HCG测定值为9770 mIU/ml。

1.3方法 抽取受检者静脉血2 ml，3000 r/min分离血清。零值血清吸取当天体检样本中男性血清混匀制成，要求无溶血、无脂血、无污染、无纤维凝块。生理盐水为东莞市普济药业有限公司生产,规格为500 ml/4．5 g。蒸馏水为自制去离子水。零值血清．生理盐水，以及蒸馏水β-HCG测定值均<0.01 mIU/ml。原值血清用HCG稀释液，零值血清，生理盐水和蒸馏水四种不同稀释液分别稀释，稀释比例分别为1∶5，1∶10，1∶20～1∶640稀释．共8个稀释比例，稀释后样本均进行双份测定。

1.4质量控制 室内指控品采用宝迪免疫质控品，高值和低值两个浓度水平。

1.5统计学分析 统计软件SPSS13．0，结果比较采用计算相对偏差和相关性分析。

2 结 果

原值血清用HCG稀释液，零值血清，生理盐水和蒸馏水四种不同稀释液稀释后血清β-HCG检测结果见表1。

表1用四种稀释液稀释高浓度β-HCG血清后的测定结果(mIU/ml)

稀释后样本β-HCG测定值取双份测定值,的平均值，与原值血清的理论浓度进行比较，并计算偏差结果见表2。原值血清样本β-HCG检测结果为9770．00 mIU/ml。

从表2可以看出．HCG稀释液稀释原值血清后．测定值与原值稀释后的理论值比较，其偏差为-9．6%～1．04%，1∶640稀释的时候，偏差>6%，达到-9．6%。零值血清稀释后的测定值与原值稀释后理论值比较，偏差为-1．46%～5．56%，从1∶5，1∶640时，其偏差均<6%。而生理盐水稀释后的测定值与原值稀释后的理论值比较，偏差为-17．58%～3．03%，生理盐水从稀释比为1∶320时。其偏差大于6%，达到～12．69%。蒸馏水稀释后的测定值与原值稀释后的理论值比较，偏差为-2．70%～l3．25%,稀释比为1∶40时，偏差就超过6%，达到9．79%。

表2 不同稀释液稀释后β-HCG测定值与样本理论值的比较(mIU/ml)

由统计学处理后，零值血清组，与生理盐水组，蒸馏水组比较，差异有非常显著性(P<0．01)，HCG稀释液组，与生理盐水组，蒸馏水组比较，差异有非常显著性(P<0．01)。其余各组之间比较差异无显著性(P>0．05)。HCG稀释液组、零值血清组、生理盐水组、蒸馏水组各稀释比测定值的均值分别与理论值进行相关性分析，结果见表3。

表3HCG稀释液组、零值血清组、生理盐水组、蒸馏水组测定值相关性分析比较

稀释液回归方程相关系数HCG稀释液Y=0.96X+3.510.99998零值血清Y=0.99X+3.190.999987生理盐水Y=0.94X+5.590.99984蒸馏水Y=0.97X+18.930.99964

表3结果显示四种稀释液稀释样本后，相关系数均达到0．999以上。但零值混合血清相关系数更接近于1，稀释样本后的斜率与截距最小。而HCG稀释液、生理盐水及蒸馏水的截距均较零值血清高，蒸馏水的截距高达18．93。

3 讨 论

B．HCG测定对早孕和妊娠相关疾病的诊断、疗效观察等有重要意义，其血清β-HCG浓度常常超过试剂的测量范围，需要进行稀释后进行检测。电化学发光免疫法(ECLIA)是由瑞士Roche公司推出的标志免疫检测方法，ECLIA时抗原抗体的特异性结合反应是在一定的介质环境中进行的，影响介质性能的主要原因有蛋白质、pH值、离子强度和其他血清成分如脂质、特有离子等，介质成分的改变会直接影响结合反应的结果[6]。

临床检测分析时，高浓度β-HCG样本血清常需稀释后检测。稀释液不同．则检测结果存在不同程度的差异，可能与基质效应有关。从表2可以看出四种稀释液稀释血清后，零值血清稀释原值皿清后，偏差最小，HCG稀释液次之，生理盐水尚可，蒸馏水偏差最大：HCG稀释液在1∶640时，其偏差达到-9．60%．生理盐水在1∶320时。其偏差达到12．69%，蒸馏水在1∶40时，偏差达到了9．79%，而零值血清从1∶5到1∶640，其偏差均<6%。这种偏差主要由稀释及基质效应造成。表3结果显示四种稀释液稀释样本后，相关系数均达到0．999以上。但零值混合血清相关系数更接近于1，稀释样本后的斜率与截距最小。而HCG稀释液、生理盐水及蒸馏水的截距均较零值血清高，蒸馏水的截距高达18．93。零值血清的蛋白质、pH值、离子强度和其他血清成分与样本血清基本相近，其测定结果偏差最小[5]。HCG稀释液为厂家提供给所有超线性范围项目稀释所用．为厂家推荐的稀释液，其成分比较接近于血清，基质效应相对较小．所以原值血清用HCG稀释液稀释后测定值与理论值比较偏差也相对较小。生理盐水的pH值、离子强度与血清相近，但无蛋白质和血清成分，测定结果偏差较大；蒸馏水的pH值、离子强度与血清相差较大，亦无蛋白质和血清成分，故偏差最大[6]。

所以，在做血清β-HCG稀释检测时，最好选用零值血清作为稀释液，如男性血清或具有其他种族差异的混合血清。HCG稀释液结果也比较可靠，但价格昂贵。生理盐水具有便宜、经济、相对可靠的优点，一般要求下也可作稀释液，蒸馏水不宜作为稀释液。同时建议实验室在编写标准化操作程序时，有必要规范样本稀释程序．以确保检测结果的可靠性。

[1] 郎江明．临床免疫诊断学[M]．广州：广东科学技术出版社，2008：497-498.

[2] 王自正．现代医学标记免疫学[M]．北京：人民军医出版社，2005：177-178．

[3] 潘超，王文龙，张国伟.定量检测中的分析测量范围的验证[J]．检验医学．2010．25(4)：303-308．

[4] 陈春华．探讨用不同稀释液对RIA测定高浓度AFP的影响[J]．华西医学．2011，18(2)：247．

[5] 高云朝，杨亚东，陆汉魁．稀释介质对化学发光免疫分析检测HCG的影响[J].标记免疫分析与临床，2011，14(2)：121．

[6] 丁忠旗，李永培，盛强．不同稀释液对高浓度HCG测定值的影响[J]．中华核医学杂志，2009，22：39．