一测多评法测定人参健脾片中3种成分

张罡 齐喜红 王庆

宁夏食品药品检验所 宁夏银川 750004

一测多评法测定人参健脾片中3种成分

张罡 齐喜红 王庆

宁夏食品药品检验所 宁夏银川 750004

目的:建立在同一色谱条件下测定枳壳、陈皮和青皮中的活性成分柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量的方法。方法:采用Phenomenex Gemini C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以乙腈－水(17:83)(用磷酸调pH至3.0)为流动相，检测波长283nm。结果:柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷的线性范围分别为0.0999～1.249μg(r=0.9996)，0.08172～1.0215μg(r=0.9999)，0.0816～1.02μg(r=0.9996)。结论:该法简便，分离效果好，专属性强，准确，可用于人参健脾片的质量控制。

HPLC;人参健脾片;柚皮苷;橙皮苷;新橙皮苷

人参健脾片是由人参、当归、草豆蔻等17味中药制成的片剂，具有补气健脾，开胃消食的作用［1］。临床用于脾虚湿困所致的食少便溏，或吐或泻，脘腹胀满，四肢乏力，面色萎黄等症。为了更好的控制药品质量，保证临床用药的安全性和有效性，我们建立了同一色谱条件下同时测定人参健脾片中枳壳有效成分柚皮苷、新橙皮苷［2］、陈皮和青皮有效成分橙皮苷的高效液相色谱法。

1 仪器与试药

1.1 仪器Agilent1260高效液相色谱仪，Agilent1260色谱数据工作站。梅特勒－托利多XS205电子天平。

1.2 试药橙皮苷对照品(批号:110721－201014)纯度为95.1%;柚皮苷对照品(批号:110722－200610);新橙皮苷对照品(批号:111857－201102)纯度为99.6%，均由中国药品生物制品检验所提供。人参健脾片样品为河北百善制药有限公司生产，批号为120211、1202132、11101151;浙江维康药业有限公司生产，批号:20100809、20120212、20120213、20120214。乙腈为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件Phenomenex Gemini C18(250mm×4.6mm，5μm);以乙腈－水(17:83)(用磷酸调pH至3.0)为流动相，检测波长283nm。在上述条件下，样品峰达到基线分离，与相邻的色谱峰分离度大于1.5。各对照品峰理论塔板数不小于3000.结果见图1.

图1 高效液相色谱图

2.2 混合对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品，柚皮苷对照品，新橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学研究

2.4.1 测定波长的选择根据《中国药典》2010年版，设定波长为283nm。

2.4.2 线性关系考察精密吸取混合对照品溶液(柚皮苷对照品溶液(0.2498mg/ml)，橙皮苷对照品溶液(0.2043mg/ml)，新橙皮苷对照品溶液(0.204mg/ml))0.4ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别吸取10μl注入液相色谱仪测定。以进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。回归方程分别为Y=1433.2X－2.4036，r=0.9996;Y=1614.9X－1.3078，r= 0.9999;Y=1696.2X+5.4345，r=0.9996。

2.4.3 稳定性试验取同一批供试品(批号批号120211)，按2.3项供试品溶液制备方法制备，分别于配制后0、4、8、12、16、20小时，依法测定，柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的相对标准偏差分别为0.42%、0.94%和0.99%。结果表明，在20小时内样品溶液基本稳定。

2.4.4 重复性试验取同一批供试品(批号批号120211)6份，按2.3项制备成供试品溶液，按2.1项色谱条件测定。结果表明该方法重复性良好，相对标准偏差分别为2.16%，2.30%，2.07%。

2.4.5 加样回收试验精密称取已知含量同一批号(批号120211，柚皮苷含量0.29mg/片，橙皮苷含量0.44mg/片，新橙皮苷含量0.23mg/片)的供试品6份，每份取样量为供试品取量(1g)的50%(0.5g)，以当前取样含量的1:1，分别精密加入柚皮苷对照品溶液(0.2498mg/ml)、橙皮苷对照品溶液(0.2043mg/ml)、新橙皮苷对照品溶液(0.2040mg/ ml)2ml，按2.3项制备成供试品溶液，按2.1项色谱条件测定，计算柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的回收率，结果平均回收率分别为100.7%，98.3%，100.3%;RSD分别为1.41%，2.96%，2.44%。结果见表1，表2，表3。

表1 柚皮苷的确度试验结果

表2 橙皮苷的确度试验结果

表3 新橙皮苷的确度试验结果

2.5 样品测定结果取7批样品(批号:120211、1202132、11101151、0100809、20120212、20120213、20120214。)。每批各6份，按2.3项制备成供试品溶液，按2.1项色谱条件测定。结果见表4。

表4 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 采用HPLC法测定了人参健脾片中有效成分的量。参考相关文献［3－7］，对甲醇－水，乙腈－磷酸水及甲醇－冰醋酸－水流动相系统进行了考察，最终采用了乙睛－水(17:83)(用磷酸调节pH至3.0)为流动相系统进行实验，同时测定处方中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷三种成分，并进行了方法学考察，结果表明该方法简便快速，精密度、重复性、回收率良好，可作为人参健脾片的质量控制方法。

3.2 本实验所用的色谱条件可使人参健脾片中的各主要色谱峰得到良好的分离，分析结果表明，经对峰的纯度光谱检验，各主要成分色谱峰纯度均大于95%。

3.3 中药复方制剂广泛用于临床，其疗效与药材饮片的质量及制备工艺密切相关，因此，本实验建立的质量控制方法能够更好的控制其质量，保证人民的用药安全。

［1］国家药典委员会.卫生部药品标准［M］.中药成方制剂第十册

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.一部.北京:化学工业出版社，2010.

［3］于敏，弥宏，焦连庆.HPLC法测定人参健脾丸中橙皮苷的含量［J］.特产研究，2005(04):47－48.

［4］尚远宏，刘圆，田金凤.反相高效液相色谱法测定人参健脾片中橙皮苷的含量［J］.时珍国医国药，2007，(05):781－782.

［5］尚远宏，刘圆，石圣洪.高效液相法测定人参健脾片中柚皮苷的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2006，(10):12－13.

［6］康四和，周锐，聂晶.HPLC测定小儿消积止咳口服液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量［J］.中成药，2010(12):2088－2091.

［7］宋剑锋，冯敬骞，胡建华，等.HPLC法同时测定常山胡柚花中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的量［J］.中草药，2014(06):854－856.

R285.5

B

1009－6019(2014)10－0324－02