张秋丽,于小玲
(青岛大学医学院,山东青岛266021)
姜黄素对小鼠离体空肠平滑肌舒缩活动的影响
张秋丽,于小玲
(青岛大学医学院,山东青岛266021)
目的探讨姜黄素对胃肠道蠕动是否有直接影响。方法取小鼠离体空肠平滑肌,放入37℃Krebs液浴槽中,通入95%氧气和5%二氧化碳混合气体,进行如下实验:第一组小鼠空肠平滑肌,加入不同浓度的姜黄素,测量记录空肠平滑肌的自主收缩变化;第二组给予乙酰胆碱收缩平滑肌,然后加入姜黄素,观察姜黄素对平滑肌收缩的影响;第三组给予阿托品舒张平滑肌,然后加入姜黄素,观察姜黄素对平滑肌舒张的影响;第四组给予肾上腺素舒张平滑肌,然后加入姜黄素,观察姜黄素对平滑肌舒张的影响。统计学处理经SPSS19.0软件,所获数据用方差分析t检验。结果小鼠空肠平滑肌加入姜黄素后,平滑肌自主收缩明显下降(P<0.01),降低的幅度与姜黄素剂量呈现相关性;应用乙酰胆碱导致空肠收缩后,再加姜黄素,空肠平滑肌的收缩幅度也有明显的下降(P<0.01);给予阿托品导致小鼠平滑肌舒张后,再给予姜黄素,平滑肌收缩幅度进一步降低;给予肾上腺素引起小鼠平滑肌舒张后,再给予姜黄素孵育,平滑肌收缩幅度进一步降低。结论姜黄素对小鼠离体空肠平滑肌具有直接舒张作用。
姜黄素/药物作用;空肠;平滑肌;体外研究
姜黄素是一种天然酚类物质,来源于植物姜黄的干燥根茎,是从姜黄属中药姜黄,郁金等的块茎中提取出来的一种酚性色素。目前主要用于食品添加剂。国内外研究表明姜黄素具有较好的抗炎、抗氧化、抗肿瘤作用,并且研究过程中发现,姜黄素可以广泛改善胃肠蠕动障碍,并对肠道疾病有良好的治疗作用,现已被广泛用于胃肠道疾病的治疗,本实验室前期研究表明,对注射过顺铂、阿托品的小鼠整体给药,可以显著减轻其胃肠蠕动功能的障碍,促进小鼠胃排空及其小肠蠕动[1],但姜黄素促进胃肠蠕动的作用和具体机制到目前为止还没有相关的报道。本实验研究用姜黄素直接作用于小鼠离体空肠平滑肌条,目的在于观察姜黄素是否对胃肠道运动有直接刺激作用,以及姜黄素是否对离体的平滑肌有收缩或舒张的影响。现将实验结果报道如下。
1.1 材料选用雄性昆明种小鼠24只,重量大约为20~25 g,购自青岛市药检所动物中心。姜黄素购自sigma公司,选择临床常用乙酰胆碱(Ach)、阿托品、肾上腺素制剂。
1.2 方法将小鼠随机分成四组。实验前给小鼠禁食12 h,然后脱臼处死,分离小鼠空肠,制成平滑肌条,第一组为姜黄素组,第二组为乙酰胆碱+姜黄素组,第三组阿托品+姜黄素组,第四组为肾上腺素+姜黄素组。取小鼠空肠平滑肌条,放入37℃Krebs液浴槽中,在浴槽中通入有95%O2和5%CO2组成的混合气体,进行下列实验:第一组先测不加药物时的空肠平滑肌收缩波平均振幅(通过多道生理信号采集处理系统测量记录空肠平滑肌的张力变化),后加入姜黄素,分别测姜黄素浓度为10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L平滑肌收缩波振幅;第二组给予乙酰胆碱收缩平滑肌,测量记录空肠平滑肌的张力变化,收缩稳定后再加入姜黄素,测量记录空肠平滑肌的张力变化;第三组给予阿托品舒张平滑肌,测量记录空肠平滑肌的张力变化,舒张稳定后,再加入姜黄素,测量记录空肠平滑肌的张力变化;第四组给予肾上腺素舒张平滑肌,测量记录空肠平滑肌的张力变化,舒张稳定后,再加入姜黄素,测量记录空肠平滑肌的张力变化。
1.3 统计学分析应用SPSS19.0统计软件进行方差分析、LSD-t检验。
2.1 不同浓度姜黄素对小鼠空肠肌条收缩波平均振幅的影响对照组空肠平滑肌自主收缩波振幅为(0.31±0.05)g;加入姜黄素浓度为10μmol/L时,收缩波振幅为(0.27±0.05)g;浓度达到20μmol/L时,收缩波振幅有所降低,为(0.23±0.05)g;浓度达到30 μmol/L时,收缩波振幅明显降低为(0.17±0.04)g,P<0.05;浓度达到40 μmol/L时,收缩波振幅降低幅度更大(0.15±0.06)g,P<0.01,所以收缩波降低幅度与姜黄素有剂量相关性。
2.2 姜黄素对Ach或阿托品/肾上腺素(附加药物)诱导的空肠收缩或舒张振幅的影响(表1)。
表1 姜黄素对Ach/阿托品/肾上腺素诱导的空肠收缩或舒张振幅的影响
表1 姜黄素对Ach/阿托品/肾上腺素诱导的空肠收缩或舒张振幅的影响
*:与对照组相比,P<0.05;**:与加入乙酰胆碱后相比,P<0.01;#:与对照组比,P<0.05;##:与加入阿托品后相比,P<0.01;$:与对照组相比,P<0.01;$$:与加入肾上腺后相比,P<0.05。
组别例数加药前加入附加药物后再加入姜黄素后收缩波振幅(g)收缩波振幅(g)收缩波振幅(g)姜黄素30 μmol/L+乙酰胆碱组60.31±0.050.42±0.07*0.25±0.07**姜黄素30μmol/L+阿托品组60.32±0.060.23±0.05#0.12±0.07##姜黄素30μmol/L+肾上腺组60.31±0.040.17±0.05$0.11±0.07$$
研究显示姜黄素具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种作用,姜黄素不良反应少,无毒副作用,世界卫生组织认定为安全药物[2]。国内外研究证明姜黄素具有抗氧化、抗炎、抗癌[3]、抑制细菌、促进伤口愈合、抗凝以及保护肝脏功能的作用[4]。
多种研究表明,姜黄素可以减轻小鼠肠炎模型、胃溃疡模型的胃肠损伤[5],改善肠黏膜的通透性,我们先前发现姜黄素整体灌胃给药可以改善胃肠运动的功能,并且可以改善顺铂导致的小鼠胃肠功能紊乱以及阿托品和一氧化氮导致的胃肠蠕动减慢[1],说明无论胃肠道有无蠕动功能障碍,姜黄素整体给药都能促进其蠕动。
本次研究采用姜黄素直接作用于小鼠离体空肠,观察姜黄素所起的作用。结果发现,第一组小鼠空肠加入姜黄素后,随着浓度增高,收缩波振幅降低幅度依次增大,说明平滑肌收缩波降低幅度与姜黄素有剂量相关性。当先用Ach孵育空肠平滑肌条,发现收缩兴奋,收缩波振幅较之前增大(P<0.05),波幅稳定后,加入30 μM姜黄素,发现空肠离体肌条收缩波振幅有了明显减小(P<0.01),更换新鲜Krebs液,发现离体肌条收缩波振幅恢复原来大小。先用阿托品孵育空肠离体平滑肌条,发现空肠平滑肌舒张,收缩波振幅明显减小(P<0.05),振幅稳定后再加入30 μM姜黄素,发现小鼠空肠离体肌条收缩波振幅进一步减小(P<0.01),同样更换新鲜Krebs液,结果发现离体肌条收缩波振幅恢复到原来大小。如果先用肾上腺素孵育空肠离体平滑肌条,空肠平滑肌舒张,收缩波振幅明显减小(P<0.01),振幅稳定后再加入30 μM姜黄素,发现小鼠空肠离体肌条收缩波振幅进一步减小(P<0.05),更换新鲜Krebs液,结果发现离体肌条收缩波振幅恢复到原来大小。由以上实验结果,我们判断姜黄素可以直接抑制平滑肌的自主收缩活动,并且在用乙酰胆碱、阿托品、肾上腺素等药物收缩或扩张空肠平滑肌的基础上,仍然能起到其抑制肠道蠕动的作用,因此姜黄素对于小鼠肠道的整体给药及离体情况下用药,作用恰好相反,由此,说明我们认为整体给药之所以能促进胃肠道蠕动,原因是姜黄素在体内的代谢物在起作用。因为目前有关姜黄素对胃肠道作用报道极少,作用机制研究国内外未见报道,到底是姜黄素的哪种代谢产物起到促进胃肠蠕动的作用,需要进一步研究。
[1]罗霜,于小玲,李红静.姜黄素促进小鼠胃肠蠕动作用及机制初步探讨[J].齐鲁医学杂志,2012,27(10):431-432.
[2]Aggarwal BB,Harikumar KB.Potential therapeutic effects of curcumin,the anti-inflammatory agent,against neurodegenera-tive,cardiovascular,pulmonary,metabolic,autoimmune and neoplastic diseases [J].Int J Biochem Cell Biol,2009,41,40-59.
[3]Ruby AJ,Kuttan G,Babu KD,et al.Anti-tumour and antioxidant activity of natural curcuminoids[J].Cancer Lett,1995,94:79-83.
[4]Subramanian L.Selvam R:Prevention of CCl-induced hepatotoxicity by aqueous extract of turmeric[J].Nutr Res,1999,19:429-441.
[5]Hanai H,Sugimoto K.Curcumin has bright prospects for the treatment of inflammatory bowel disease[J].Curr Pharm Des,2009,15(18): 2087-94.
Effects of Curcumin on the Activity of Isolated Jejunum Smooth Muscle of Mice
Zhang Qiuli,Yu Xiaoling
(Medical of Qingdao University,Qingdao 266021,Shandong)
Objective To investigate whether curcumin has a direct effect on the motility of the gastrointestinal tract. Methods The jejunum smooth muscle of mice were immediately removed and we put it Into the 37℃Krebs liquid bath gassed with 95%O2and 5%CO2.The experiment is following:The first group of mice jejunum,we puted different concen⁃trations of curcumin,measured voluntary contraction change of jejunal smooth muscle,then record it.The second group,we put the Ach,smooth muscle contracted,adding curcumin,to observe the effects of curcumin on smooth muscle contracted. The third groups,we put the atropine,smooth muscle diastoled,adding curcumin,to observe the effects of curcumin on smooth muscle relaxated.The fourth groups,we put the epinephrine,smooth muscle diastoled,adding curcumin,to observe the effects of curcumin on smooth muscle relaxated.Statistical processing by SPSS19.0 software,data obtained by variance analysis test.Results After curcumin were puted into the jejunum smooth muscle,the average contractile amplitude was significantly reduced(P<0.05).After adding Ach to jejunum smooth muscle,the average contractile amplitude of the jeju⁃num smooth muscle was enlarged,then added curcumin to it,we observed the average contractile amplitude obviously de⁃creased(P<0.01).After adding atropine to jejunum smooth muscle,the average contractile amplitude of the jejunum smooth muscle was decreased,then added curcumin to it,we observed the average contractile amplitude more significantly de⁃creased(P<0.05).After adding epinephrine to jejunum smooth muscle,the average contractile amplitude of the jejunum smooth muscle was decreased,then added curcumin to it,we observed the mean contractile amplitude more significantly de⁃creased(P<0.05).Conclusion Curcumin directly diastole the jejunum smooth muscle of mice.
curcumin/drug effects;jejunum;smooth muscle;in vitro
R28.55
A
1008-4118(2014)01-0001-03
2014-03-15
10.3969/j.issn.1008-4118.2014.01.01
张秋丽(1981-),女,现在菏泽医学专科学校工作。
于小玲,Email:xiaoling_yu2004@163.com