叉头框C2和Vimentin蛋白在胃癌中的表达及意义

孙稳莲

叉头框C2和Vimentin蛋白在胃癌中的表达及意义

孙稳莲

目的 探讨人叉头框C2（FOXC2）和Vimentin蛋白在胃癌组织中的表达和意义。方法 采用免疫组化S-P法检测65例胃癌组织及20例正常胃黏膜中FOXC2和Vimentin的表达，分析两种蛋白与胃癌临床特征之间关系的相关性。结果 胃癌组织中FOXC2和Vimentin均呈现高表达，FOXC2和Vimentin在胃癌组织中的阳性表达率分别为41.53%(27/65)和35.38%(23/65)。FOXC2在中晚期胃癌的表达率为58.62%(17/29)，明显高于早期胃癌表达率27.78%(10/36)（P＝0.012；FOXC2在有淋巴结转移组中的表达率为55.88%(19/34)，明显高于无淋巴结转移组表达率29.03%(9/31)（P＝0.018）。Vimentin在中晚期胃癌的表达率为51.72%(15/29)，明显高于早期胃癌表达率22.22%（8/36）（P＝0.013）；在有淋巴结转移组的表达率为41.17%（14/34），高于无淋巴结转移组表达率 19.35%（6/31）（P＝0.014）。胃癌组织中FOXC2和Vimentin的表达成正相关（P＝0.037）。结论 FOXC2和Vimentin可能参与上皮细胞间质转化过程，在胃癌转移中扮演重要角色。

胃肿瘤；FOXC2；Vimentin；EMT

胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，居全球癌症发病率和死亡率的第2位[1]，虽经过多年的研究，胃癌的发病机制仍不清楚。叉头框C2（forkhead box C2，FOXC2）属forkhead转录因子家族的一员。有研究表明，FOXC2在上皮细胞-间质细胞转变（epithlial-mesenchymal transition，EMT）过程中，促进间质细胞的转化，对EMT起着关键的调节作用[2-3]。而上皮性癌细胞的浸润和转移过程与EMT十分相似，拟通过免疫组化法检测胃癌组织中FOXC2和Vimentin的表达情况，探索胃癌的高度恶性行为是否与EMT有关。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2008年1月～2013年6月经病理证实胃癌手术患者65例的标本作为研究对象。其中，男48例，女17例；年龄30～81岁；有淋巴转移34例，无淋巴转移为31例。另取20例健康者正常胃黏膜组织作为阴性对照。

1.2 方法

1.2.1 试剂 抗FOXC2多克隆抗体购于Abcam公司，抗Vimentin单克隆抗体购于福建迈新公司，SP(SP Kit Rabbit)免疫组化试剂盒和浓缩型DAB(Diaminobenzidine)试剂均购自北京中杉试剂公司。

1.2.2 实验方法 按SP免疫组化试剂盒说明书进行。标本常规10%中性甲醛溶液固定，石蜡包埋制片，4m切片脱蜡水化，于枸橼酸钠缓冲液（pH6.0）中微波抗原修复，过氧化物酶阻断内源性过氧化物酶活性，非免疫性动物血清阻断非特异性反应，分别滴加山羊抗人FOXC2多抗和鼠抗人Vimentin单抗，4℃过夜，37℃复温1h后滴加二抗，DAB (Diaminobenzidine)显色，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，镜检。

1.2.3 结果判定[1]FOXC2与Vimentin均主要表达在细胞质内，以细胞质内明显着色及强着色为阳性细胞，计数5个高倍镜视野，阳性细胞数＜5%为阴性，≥5%为阳性，判定过程由2名经验丰富的病理医生负责。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0 统计分析软件进行数据分析，计数资料采用率和百分比表示，两组间计数资料比较采用χ2或Fisher确切概率法，检验水准α＝0.05,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 FOXC2和Vimentin的表达情况 FOXC2及Vimentin在胃癌组织中表达较强，胞内颗粒粗大；在正常胃黏膜组织中表达较弱，颗粒细小。FOXC2在胃癌组织中的阳性表达率为41.53%(27/65)，Vimentin在胃癌组织中的阳性表达率为35.38%(23/65)。

2.2 FOXC2和Vimentin的表达与临床生物学行为的关系FOXC2在中晚期胃癌的表达率为58.62%(17/29)，明显高于早期胃癌表达率27.78%(10/36)（P=0.012）；FOXC2在有淋巴结转移组中的表达率为55.88%(19/34)，明显高于无淋巴结转移组表达率29.03%(9/31)（P=0.018）。FOXC2的过表达与年龄、性别、分化程度是否有关，差异无统计学意义（见表1)。

Vimentin在中晚期胃癌的表达率为51.72%(15/29)，明显高于早期胃癌表达率22.22%(8/36)（P=0.013）；在有淋巴结转移组的表达率为41.17%(14/34)，高于无淋巴结转移组表达率19.35%(6/31)（P=0.014），差异均有统计学意义。而Vimentin的过度表达与年龄、性别、分化程度是否有关，差异无统计学意义(见表 1)。

表1 FOXC2和Vimentin的表达与胃癌临床病理指标的关系

2.3 FOXC2和Vimentin表达的关系 FOXC2阳性表达的胃癌组织中，Vimentin的阳性表达为66.67%，FOXC2阴性表达的胃癌组织中，Vimentin的阳性表达为23.40%，两者成正相关（P=0.405，P=0.037,见表 2）。

表2 FOXC2和Vimentin的相关性（例）

3 讨论

虽然现阶段的流行病学调查发现，不同地区胃癌的发病率均较前有所下降，但全球每年仍有超过93万的病例确诊胃癌，尽管治疗方案越来越多，每年仍至少有70万的胃癌患者死亡。在我国对胃癌进行了多年的基础和临床研究，但其发病机制仍不完全清楚。有研究发现，EMT在各种上皮细胞来源的恶性肿瘤的侵袭转移过程中发挥了重要作用[1]。EMT为暂时而快速的细胞表型可逆性改变，上皮细胞之间的紧密连接消失或者减少，上皮细胞失去其极性并改变其细胞骨架（间质成分增加），细胞运动、迁延、抗凋亡能力提高[3]。EMT可以改变肿瘤细胞的表型，从而提高肿瘤细胞浸润和转移的能力[4]。参与EMT中的蛋白分子众多，如β-Catenin、Paxillin、Vimentin、slug等[5]，其中代表间质细胞的Vimentin由于其高度的选择性表达受到广泛的研究。

FOXC2属于FOXC亚族，经过多年研究发现，它不仅参与调节胚胎的发育，如血管、淋巴管的生成等[6]，还与肥胖、胰岛素抵抗、糖尿病等代谢性疾病相关[7]。近年来的研究还发现，FOXC2与肿瘤的浸润和远处转移密切相关，在乳腺基底细胞癌、子宫内膜癌等肿瘤中呈现高表达，其表达量与肿瘤分期及恶性程度呈正相关，这可能与FOXC2启动EMT促进上皮细胞转化并转移有关[8]。本实验结果显示，FOXC2在胃癌组织伴淋巴结转移组及晚期病例中呈高表达，提示其可能通过上述途径参与胃癌的发展。

Vimentin是一种中间丝蛋白，是连接细胞膜与核膜之间的重要骨架蛋白。Vimentin主要表达于间叶组织细胞，如内皮细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等，是EMT中的一个重要因子。目前大量报道显示，Vimentin在许多上皮性肿瘤，尤其是低分化癌中异常表达，可能与肿瘤细胞的浸润和转移有关。本实验结果显示，Vimentin在胃癌组织伴淋巴结转移组及晚期病例中呈高表达，提示其可能参与胃癌的发展。又有报道称，Vimentin的过度表达还与肝细胞癌、乳腺癌及结肠癌的高度恶性和不良预后有着明显的联系[9-11]；还在Vimentin在膀胱癌中表达异常增加。因此，Vimentin可能作为评估上皮性肿瘤有无转移的指标之一[12]。

本实验还表明，FOXC2和Vimentin的表达呈正相关，随着胃癌的恶性程度增高，FOXC2及Vimentin表达均增加，促进上皮细胞向间质细胞转化。研究结果表明，EMT在结肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌等多种癌症的浸润及转移中起着重要作用[13]。通过本实验发现，FOXC2及Vimentin参与胃癌的EMT过程，促进肿瘤细胞浸润和转移，这可能为继续探索胃癌发病机制提供了新的思路，也为胃癌的诊断及预后判断提供了新的指标。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2014.3.011

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