HER-2在非小细胞肺癌中的表达及与预后的关系

李铸鹏张丹李丹苏丹应莉莎毛伟敏,5

1.温州医科大学第一临床学院心胸外科系，浙江 温州 325000；

2.浙江省中医药大学药学院药理系，浙江 杭州 310000；

3.浙江省中医药大学第一临床肿瘤学系，浙江 杭州 310000；

4.浙江省肿瘤医院研究所，浙江 杭州 310000；

5.浙江省肿瘤医院胸外科，浙江 杭州 310000

HER-2在非小细胞肺癌中的表达及与预后的关系

李铸鹏1张丹2李丹3苏丹4应莉莎4毛伟敏1,5

1.温州医科大学第一临床学院心胸外科系，浙江 温州 325000；

2.浙江省中医药大学药学院药理系，浙江 杭州 310000；

3.浙江省中医药大学第一临床肿瘤学系，浙江 杭州 310000；

4.浙江省肿瘤医院研究所，浙江 杭州 310000；

5.浙江省肿瘤医院胸外科，浙江 杭州 310000

背景与目的：人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者预后的提示作用还处于争议之中，本研究旨在探索HER-2在NSCLC中的表达及与预后的关系。方法：利用免疫组化检测425例NSCLC的HER-2的表达。χ2检验评价HER-2与临床病理参数的关系。COX比例风险回归评估HER-2与预后的关系。结果：在425例组织中，HER-2阳性表达83例(19.5%)；HER-2表达与NSCLC的病理类型密切相关，腺癌中的表达最高(P=0.05)。COX回归显示HER-2与NSCLC的预后无相关性。结论：HER-2表达与NSCLC的病理类型密切相关，在腺癌中表达比较普遍，但与NSCLC的预后无关。

非小细胞肺癌；人类表皮生长因子2；预后

在世界范围内，肺癌的死亡率居所有恶性肿瘤的第1位，5年总生存率＜15%［1］。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)约占肺癌的80%，尽管治疗方法已经有很大进步，但是患者的预后依然很差，其中一个很重要原因是缺乏有效的预后诊断标志物，因此基于分子水平的诊断具有非常重要的意义，如肿瘤标志物AFP、CA153可以为肝癌和乳腺癌诊断提供参考［2-3］。

人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)是一种185×103的酪氨酸激酶I型跨膜受体，含有1 255个氨基酸，由17号染色体上的基因编码。HER-2在乳腺癌、肺癌、胃癌和大肠癌中的过表达很常见［4-6］。有研究认为，HER-2与肿瘤的进展和转移有关，与化疗药物的耐药性及不良预后也有关，可以作为化疗药物治疗的潜在靶点［7-9］。然而，HER-2在NSCLC中的表达情况尚不清楚，与预后的关系还具有争议［1,7,10-12］。因此，本研究希望通过探讨HER-2在NSCLC患者中的表达及与预后的关系，从而为NSCLC的个体化治疗提供参考。

1 资料和方法

1.1 患者资料

收集2006年11月—2011年4月在浙江省肿瘤医院接受手术治疗的425例NSCLC患者的临床组织标本，患者手术治疗前均未接受任何放化疗和免疫治疗。病理诊断和分级参照世界卫生组织和国际肺癌研究协会的标准(WHO/IASLC，2007年版)。425例NSCLC患者，男性322例，女性103例，年龄37～82岁，平均年龄60.4岁。鳞癌218例，腺癌200例，其他类型7例。Ⅰ、Ⅱ期284例，Ⅲ、Ⅳ期140例。吸烟患者280例，非吸烟患者123例。本研究通过浙江省肿瘤医院伦理委员会的审查，所有患者在手术之前都签署知情同意书。

随访：在手术后的2年内，每3个月随访1次；第3年每6个月随访1次，之后每年随访1次。无病生存期(disease free survival，DFS)为接受手术到原位复发、远处转移、死亡或失访的时间。总生存期(overall survival，OS)为接受手术到死亡或失访的时间。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化检测

5 mm的切片在烤箱中烤30 min，二甲苯脱蜡，100%、95%和75%梯度酒精，PBS复水，枸橼酸钠高压修复，蒸馏水冲洗，3%双氧水封闭，蒸馏水冲洗，一抗(1∶50，购自福州迈新生物技术开发有限公司)温育1～2 h，蒸馏水冲洗，即用型二抗(购自挪威DAKO公司)温育30 min，蒸馏水冲洗，DAB(购自挪威DAKO公司)显色5 min，蒸馏水冲洗，苏木素复染2 min，自来水冲洗，促蓝液2 min，自来水冲洗，75%、95%和100%梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片、观察。

1.2.2 免疫组化评分

根据美国肿瘤协会(ASCO，2007版)的指南给染色的组织评分：0～10%肿瘤细胞膜着色为(-)；10%以上细胞呈轻度和不完整细胞膜着色为(+)；10%以上细胞呈中度的完整细胞膜着色为(++)；30%以上细胞呈强度完整细胞膜着色为(+++)。HER-2为细胞膜、细胞质着色呈棕黄色颗粒。(-)和(+)为阴性；(++)和(+++)为阳性。

1.3 统计学处理

数据采用SPSS 17.0统计学软件分析，用χ2检验分析HER-2与其他变量之间的关系，COX比例风险回归模型作单因素和多因素分析。双侧检验P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 临床病理特征及与HER-2表达的关系

HER-2蛋白阳性表现为细胞膜、细胞质棕黄色颗粒状着色(图1)，阳性表达率为19.5% (83/425)。腺癌患者中HER-2阳性表达49例，占所有腺癌患者的24.5%；其次是鳞癌33例，占所有鳞癌患者的15.1%；其他类型1例，占其他类型肺癌的14.3%(P=0.05)。HER-2表达与性别、年龄、肿瘤临床分期、肿瘤的分化及患者是否吸烟等临床病理参数无相关性(表1)。

2.2 HER-2与NSCLC预后的相关性

在COX回归分析中，单因素分析显示HER-2表达与DFS和OS的相对危险系数分别为0.95和1.04，P值分别为0.83和0.84。在多因素分析中，利用年龄、性别、分化程度、组织类型、分期和吸烟史等因素进行矫正分析时，HER-2表达与DFS和OS的相对危险系数分别为1.04和1.03，P值分别为0.85和0.87。HER-2表达与DFS及OS无相关性(表2)。

图1 HER-2免疫组化染色结果Fig. 1 Immunohistochemical staining for HER-2

表1 NSCLC患者临床病理特征及与HER-2表达的关系Tab. 1 Relationships between the expression of HER-2 expression and clinicopathological variables

表2 HER-2表达与NSCLC患者预后的关系Tab. 2 Relationships between the expression of HER-2 and the prognosis of NSCLC patients

3 讨 论

本研究发现，HER-2仅与肺癌的病理类型密切相关，腺癌患者更易表达HER-2，且HER-2与NSCLC的预后无明显关联。在临床中，HER-2对乳腺癌和胃癌的预后判断作用及机制已经非常明确，并广泛应用于指导临床治疗。但在NSCLC中，HER-2和预后的关系还存在争议。一些研究者认为，HER-2的表达与NSCLC的预后呈负相关［1,7,13-14］。Selvaggi等［10］的一项研究发现在130例NSCLC肿瘤组织中，有21例(16%)HER-2过表达，证明HER-2过表达与患者的不良预后有关，但与病理分期和组织类型无关。Takenaka等［13］的研究表明，在159例腺癌患者中，HER-2表达是不良预后的一个独立的影响因子，但这些患者中Ⅱ、Ⅲ期患者接受了术前化疗。然而，Toh等［15］报道，在109例东亚女性患者中，HER-2表达与预后无关。Pfeiffer等［16］研究了186例术前未接受放化疗的NSCLC患者HER-2表达情况及与预后的关系，也证实HER-2表达与预后无关，这与我们的研究结果一致。

以上研究得到不同的结论，一部分原因可能归于免疫组化的评分系统。肺癌免疫组化的评分系统参考于乳腺癌HER-2的评分系统，但和乳腺组织不一样的是，HER-2在肺癌组织中的表达是非均一性的，而且免疫组化的评分系统本身具有很强的主观性，难免使评分出现误差，导致研究者之间得出不一样的结论。因此，制定一套适合肺癌的HER-2免疫组化评分系统很有必要。在一些研究中，患者接受过一些术前或术后治疗，而这些治疗势必会影响患者的生存，从而使研究的结论不一致。另外，组织固定时间、抗体稀释浓度及是否接受过放化疗等因素都会影响实验结果，导致出现不同的结论。

总之，由于在非小细胞肺癌患者中HER-2表达与预后相关性存在争议，应用HER-2表达指导NSCLC患者的治疗需慎重；对于HER-2表达与NSCLC预后的关系还需要做更多的研究。

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The expression of HER-2 and its prognostic implication in patients with non-small cell lung cancer

LI Zhu-peng1, ZHANG Dan2, LI Dan3, SU Dan4, YING Li-sha4, MAO Wei-min1,5
(Cardiothoracic Surgery Department of The First Clinical College of Wenzhou Medical University, Wenzhou Zhejiang 325000, China; 2.Department of Pharmacology, Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou Zhejiang 310000, China; 3.The First Clinical Oncology Department of Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou Zhejiang 310000, China; 4.Cancer Research Institute, Zhejiang Provincial Cancer Hospital, Hangzhou Zhejiang 310000, China; 5.Department of Thoracic Surgery, Zhejiang Provincial Cancer Hospital, Hangzhou Zhejiang 310000, China)

MAO Wei-min E-mail: maowm1218@163.com

Background and purpose: The prognostic role of human epidermal growth factor receptor 2 (HER-2) remains controversial in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). This study aimed to evaluate the expression of HER-2 and its prognostic implication in patients with NSCLC. Methods: Four hundred and twenty- fi ve NSCLC patients’ specimens were obtained from Zhejiang Cancer Hospital. HER-2 protein expression was determined by immunohistochemistry (IHC). The relationship between HER-2 and clinicopathological parameters and patients’prognosis was analyzed by Chi-square test and COX proportional hazards regression model. Results: Eighty-three patients were positive expression of HER-2 (83/425, 19.5%). The expression of HER-2 was closely related with histological type (P=0.051), most patients with HER-2 positive were adenocarcinoma, then were squamous carcinoma or other histological types. However, HER-2 was not an independent prognostic indicator for the overall survival of patients with NSCLC. Conclusion: We found that the expression of HER-2 was closely connected with histological type, but it was not a predictive marker for the prognosis in patients with NSCLC.

Non-small cell lung cancer; Human epidermal growth factor receptor 2; Prognosis

10.3969/j.issn.1007-3969.2014.09.007

R734.2

A

1007-3639(2014)09-0679-05

2014-05-07

2014-08-21）

卫生部科研基金项目(No：WKJ2010-2-004)；浙江省重大科技专项计划项目(No：2011C13039-1)。

毛伟敏 E-mail:maowm1218@163.com