喉鳞状细胞癌组织中CD44+和Ki67+的表达及与临床病理的关系

付莉　任喜梅　贾平

【摘要】目的：观察CD44+和Ki67+癌干细胞的在喉癌中的表达特征及其与临床病理的关系。方法：应用免疫组织化学染色， 检测了18例正常喉黏膜，69例鳞状细胞癌患者中CD44和Ki67+的表达，定位CD44+和Ki67-细胞，并观察、计数。结果：CD44+细胞在正常粘膜组几乎不表达，而在喉鳞状细胞癌组表达丰富，两者差别经独立样本t检验，有统计学意义（P<0.05），Ki67+细胞在正常粘膜组只在基底细胞层散在表达，在喉鳞状细胞癌组织中表达丰富，两者差别有统计学意义（P<0.05）；喉鳞状细胞癌患者中，不同性别、年龄、临床分型之间的CD44+和Ki67+细胞表达没有差异（P>0.05），而在在分化程度、T分期之间的表达有差异（P<0.05）。结论：CD44+和Ki67+作为肿瘤干细胞的标志，可以考虑作为喉癌诊断、判断分化程度、T分期的参考指标。

【关键词】CD44﹢细胞；Ki67+细胞； 喉鳞状细胞癌；免疫组化

【中图分类号】R738.1 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）04-0210-01

喉癌占全身肿瘤1%-5%，在耳鼻喉恶性肿瘤中占7.9%-35.0%，占耳鼻咽喉各部肿瘤的第三位[1]，仅次于鼻咽癌、鼻腔癌。目前病理机制尚未阐明，从分子水平上寻找與肿瘤发生发展有关的标志物，有助于喉癌的早期诊断，并可帮助评估临床预后[2]，许多研究表明，Ki67是目前应用最广泛的增殖细胞标志之一[3]，而CD44是癌干细胞的主要标志[4]，本文利用免疫组织化学法，标记CD44+和ki-67-的喉癌干细胞，研究其分布特点及临床病理学关系。

1材料和方法

在兰州军区兰州总医院病理科2008年～2012年手术的喉癌标本中筛选出鳞状细胞癌患者69例，其中男62例，女7例，平均年龄58.65岁。另取18例正常喉黏膜组织标本作对照，其中男13例，女5例，平均年龄57.72岁。所有外检标本24 h内取相应组织，经4%中性甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋。

2方法

参照张登才等[5]介绍的制作组织芯片的方法，手工制作喉鳞癌组织芯片3个，3μm厚切片，用于免疫组织化学的蜡片裱于经2% 3-氨丙基-乙氧基甲硅烷（APES）丙酮液处理过的载玻片上备用。3块组织芯片连续切片各2张（厚4μm）用EliVisionTM super二步法分别标记CD44和Ki-67，操作步骤按说明书进行，DAB显色，阳性显色为棕黄色，苏木精复染核，中性树脂胶封固。光学显微镜下观察结果。

3结果

3 1 CD44+细胞在正常粘膜组几乎不表达，在喉鳞癌组织表达丰富，两者差别经独立样本t检验，有统计学意义（t=-15.119，P=0.000）；Ki-67﹢细胞在正常粘膜只在基底细胞层散在表达，喉鳞癌组织表达丰富，两者差别经独立样本t检验，有统计学意义（t= -44.98，P= 0.000）。

3.2 CD44﹢和Ki-67﹢细胞在性别、年龄、临床分型之间的表达没有差异（Mann-Whitney U 检验，P>0.05），而在分化程度、T分期之间的表达有差异（P<0.05），分化程度越低，T分期越高者表达越高。CD44表达与是否有淋巴结转移无关，而Ki-67的表达与淋巴结转移有关，有淋巴结转移者表达高于无转移者。

4讨论

喉癌作为肿瘤的一种，其发生和发展是一个多因素、多步骤过程。虽然早期癌症患者疗效较好，但是仍有部分患者难于治愈。肿瘤治疗的关键在于早期发现、早期治疗。CD44是分布极为广泛的一组细胞表面跨膜糖蛋白，在细胞恶性转化过程中，其结构和功能发生显著变化，进而影响肿瘤细胞的侵袭转移。作为细胞增殖活性的生物学标志物，Ki-67蛋白现己被广泛开展应用，但在喉癌预后及治疗方面的研究应用，近来才受到关注。

本研究发现，癌旁正常组织CD44表达很低，且多局限于基底层细胞和近基底层的棘细胞，而喉癌则累及上皮全层细胞，并向深层浸润。CD44在喉癌组织中的表达水平比其在癌旁正常组织中的表达高，并且具有显著性差异（P<0.05），表明CD44可能与喉癌的发生有关联。而Ki-67是一种细胞增殖核抗原， 存在于G0期以外的各期细胞，与细胞有丝分裂密切相关，是反映细胞增殖状态的理想标记物， 对判断肿瘤恶性程度有一定的价值[6，7]。

研究结果表明，CD44、Ki-67可作为喉癌的临床评判指标，且应用免疫组化技术在喉癌组织中检测简易可行， 二者联合可更好的为喉癌患者的临床病理诊断提供辅助参照，也可为喉癌患者制定化疗方案提供依据。

参考文献

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[2]孙宝春. 赵舒薇. 刘达根，等. Ki67、P53 蛋白在人喉组织中的表达及临床意义[J]，北京医学， 2007，29（10）：577-579

[3]BubánT， TóthL， Tanyi M， Kappelmayer J， Antal-Szalmás P. [Ki-67 new faces of an old player]. OrvHetil 2009； 150： 1059-1070

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[5] 张登才， 刘斌， 张丽华， 等. 一种简便实用的组织芯片制作方法[J]. 诊断病理学杂志， 2013， 20（11）： 722-724.

[6]张军辉， 董明敏，黄玮.喉鳞状细胞癌组织中COX2、Ki-67、VEGF的表达及意义[J].河南职工医学院学报，2007；19（3）：229-230

[7]韩军平，刘斌，杨艳丽，等. 结直肠癌CD44+/ki-67-癌干细胞特征及其与临床病理关系[J].世界华人消化杂志，2011； 19（34）： 3483-3488