瞿胜 程丽娟
【摘要】目的:对抑郁症首次发病的患者的内皮祖细胞数量和功能变化进行初步研究。方法:根据国际疾病分类第十次修订本首发重性抑郁症的诊断标准判断中年抑郁症患者20例是否合格,结果表明,24项HAMD抑郁量表评分>35分,定为观察组。选择正常志愿者20例,判断24项HAMD抑郁量表,评分<8分,要求志愿者的性别、年龄、受教育程度均与观察组相当,设为对照组。分离外周血内皮祖细胞并进行体外培养,对于EPC生长情况进行观察和记录,通过分析多项指标分析EPC各项,判断具有分化为内皮细胞的特性,进行统计学分析。结果:观察组外周血EPC细胞数量和细胞增殖率低于对照组,观察组血清白细胞介素水平超过对照组,超敏反应蛋白水平高于对照组,两个数据差异均有统计学意义(均P<0.05);(2)Spearman相关分析显示,患者组IL-6和TNF—d水平与循环EPCs的数量和增殖率呈负相关(均P<0.05);(3)多元线性逐步回归分析显示,HAMD总分和IL-6水平是循环EPC数量的独立影响因素(均P<0.05)。结论:抑郁症首次发病患者EPC数量减少,从而证明内皮祖细胞数量减少、功能减退。
【关键词】抑郁症、内皮祖细胞数量及功能
【key words 】changes in the number and function of endothelial progenitor cells in patients with first onset of depression were studied. Methods: The revised according to the International Classification of Diseases, Tenth diagnostic criteria for major depression of the first judgment of 20 patients aged depression is qualified, the results showed that 24 HAMD depression scale score> 35 points, as the observation group. Choose healthy volunteers, 20 cases judged 24 HAMD depression scale, score <8 points, requiring volunteers gender, age, educational level and the observation group were quite, as the control group. Peripheral blood progenitor cells isolated and cultured in vitro for EPC growth were observed and recorded, analyzed a number of indicators by analyzing the EPC to determine the characteristics differentiate into endothelial cells, were statistically analyzed. Results: The number of peripheral blood EPC cells and cell proliferation rate than the control group, serum interleukin observation group than in the control group levels, hypersensitivity higher protein levels, two data differences were statistically significant (both P <0.05); (2) Spearman correlation analysis showed that patients IL-6 and TNF-d levels and the number of circulating EPCs and the proliferation rate was negatively correlated (all P <0.05); (3) Multiple linear Stepwise regression analysis showed that, HAMD total score and IL-6 levels were independent predictors of the number of circulating EPC (all P <0.05). Conclusion: The number of EPC first onset of depression in patients with reduced, thereby reducing the number of permits Mingneipizu cell dysfunction.
【key words 】depression, the number and function of endothelial progenitor cells
【中圖分类号】R714.6 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2014)04-0051-01
随着社会不断发展,人们生活压力与日剧增,越来越多的人患各种心理精神疾病,抑郁症是较为严重的一种心理疾病,抑郁患者通常表现为遇事消极怠慢,思考问题不乐观,生活态度消极低沉。有资料显示,抑郁症自杀死亡者占所有自杀的1/3-1/2。病人通常表现为心境低落、悲伤、无希望、兴趣和愉快感丧失。患者在治疗方面会有巨大的难度,而且会给家庭和家人带来巨大的压力。自20世纪中期以后,,其发病率逐年升高,已成为一个主要的全球性精神问题。经过多年的深入研究,学者发现抑郁症的发病因素不仅与心理问题有关,其血管内皮损伤与免疫炎症激活存在着某种相关性,可促进心血管病的发生与发展。EPC可以在血管修复的过程中起到非常积极的作用,通过整合到血管中帮助血管再生。EPC是内皮细胞的前体细胞,,机体EPC的表达和生长机理在病理、生理、病生多种角度都有深入的研究。本文旨在研究抑郁症首次发病患者外周血EPC数量和功能的关系。现将研究结果作如下汇报。
1资料与方法
1.1一般资料 选取2011年2月-2013年2月到我院就诊的抑郁症患者20例作为观察组,年龄45-58岁,平均年龄49.5岁。性别为女,按照国际疾病分类第十次修订本(ICD-10)重性抑郁症的诊断标准,判断24项HAMD抑郁量表评分>35分,均为首次发作。志愿者应保证身体健康,精神状态良好,无任何头部外伤史、神经系统疾病和其他精神障碍性疾病或药物、酒精依赖者;患者与志愿者都不能有肢体缺陷,无任何磁共振扫描禁忌症;保证志愿者不能参加其他临床药物研究;保证志愿者性别与患者一致,不能處于哺乳期。选取同期与患者居住环境相同或相似的患者,要求:年龄范围一致,精神状态良好,无其他心理疾病,无酗酒吸毒现象,经过标准判断24项HAMD抑郁量表评分<8分,符合对照要求。
在开始研究之前,与志愿者及其家属说明实验方式及过程中存在的风险,并获得书面的同意证明。
1.2试验方法
1.2.1分离、培养内皮祖细胞 利用15毫升外周血分离内皮祖细胞的方法采用密度梯度离心法,密度梯度离心方法是利用成分血之间的密度差异来分开不同成分。这种方法可以得到含EPC的单个核细胞,单个核细胞包括淋巴细胞核单核细胞。用经过离心后的细胞应培养在特别的培养基中,培养基组成为胎牛血清和生长因子。第7天随机计数各组EPC集落和细胞数目,然后收集部分培养的EPC分别进行下列实验。细胞密度根据需要进行调整,接种到纤维连接蛋白包被的培养板,培养30min,在细胞贴壁状态下进行计数。将细胞密度做适当调整,利用细胞毒性试剂盒测定EPC的增殖能力。最后进行迁移方法计数,调整细胞密度24小时的培养后,用法,计算改良的Boyden小室小室下层的细胞数。
1.2.2染色、鉴定内皮祖细胞 将分离纯化后的含高密度EPC的内皮祖细胞放在无菌盖玻片,加入蛋白进行溶解,在与人体体温相同状态下进行孵育,将蛋白进行吸弃后准备使用。将分离的单个核细胞接种于放入24孔细胞培养板,每孔加入0.5ml,用盖玻片覆盖,培养箱中培养四天培养,将非贴壁细胞用PBS洗脱,换培养液至7天。在乙酞化低密度脂蛋白培养状态下继续37摄氏度孵育1h。固定细胞10min,浸洗PBS6分钟,分为三次,。在标本上加入FITC标记的荆豆凝集素,继续在37oC下孵育lh,同样用PBS浸洗3次,每次2min,90%甘油封片。
1.2.3通过染色变化测定祖细胞衰老 根据研究发现,大多数细胞并不是能够连续不断分裂增殖的,他们被认为增值能力有限,而不能分裂增殖的细胞就成为进入衰老期。在衰老状态下,细胞并未失去生命活性,但是从内在来看,其基因组成和蛋白质氨基酸表达形式已经不再和正常细胞一致。衰老细胞的细胞周期长短分配发生变化,这类细胞不能再一些常规刺激下继续进行分裂,这种状态并不同于一些损伤诱导的细胞休眠,也不同于细胞生长接触抑制的情况。关于细胞衰老的研究中,认为这是生物体滋生避免发生肿瘤的一种自卫方法。细胞进入衰老期首先得表现为体积变大,在酸碱状态pH6.O时,p一半乳糖普酶活性非常高。,细胞衰老事实上是生物体老化的一种潜在原因。细胞衰老状态下p一半乳糖营酶会被催化为深蓝色。通过光学显微镜下观察可以看到变成蓝色的细胞或组织。
2结果
EPC进行试验的时间基本为七天,鉴定也将在此时间段进行,细胞数量可以直接反应实验结果,所以我们将统计内皮祖细胞的数量和增值功能,另外统计各种炎症因子存在的差异,来反映抑郁症患者首次发病时内皮祖细胞数量和功能的变化。
2.1采用SPSS12.0软件包对所有数据进行分析,观察组与对照组内皮祖细胞各项因子指数差异存在统计学意义(P<0.05),具体数据见下表。
3讨论
1997年,Asahara通过实验研究发现了内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EpC)。自此开始打开了内皮祖细胞治疗血管损伤和缺血区域血管再生研究的大门。抑郁症是心血管疾病的独立危险因素,EPC参与血管内皮损伤后修复、血管新生和损伤血管再内皮化过程,对维持血管稳定的生物学功能具有重要作用[8,9,10]。首先从外周血中分离提纯EPC细胞,EPC细胞是内皮祖细胞的前体,是多种表型的表达形式。分离方法采用密度梯度离心法,分离后的到单个核细胞,经过培养和选择最终得到高密度EPC。有了吩咐的实验原料,才能进行严谨周密的实验。到目前为止,学者们并未给EPC做出一个明确的定义,也没出现任何一个统一的分离鉴定标准。就目前来看,能够进行增生分化的成熟内皮细胞和能过分化为造血干细胞的细胞定义为EPC。关于EPC还有待研究,但是可以肯定的是,在血管再生领域内皮祖细胞的损伤修复占有一席之地,可以根据这个进行心脑血管疾病的研究与治疗[11,12,13]。
综上所述,抑郁症可减少骨髓来源的循环EPC数量和功能,影响内皮的修复能力,并增加机体的免疫炎症反应,两者可共同促进心血管疾病的发生和发展。而EPCs作为心血管疾病的一个新型细胞学生物标记物,其数量和功能的变化灵敏地反映人群罹患心血管疾病的危险性[14]。因此,抑郁症首次发病患者的内皮祖细胞数量降低,功能减弱,而EPC的数量与之密切相关,可以证明抑郁症会诱导产生心血管疾病。脑血管病血管损伤修复和再生治疗领域完全可能以内皮祖细胞培养的方法治愈。
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