高效液相色谱法快速检测食品中苏丹红的含量

曹丽芬　姚黎霞　何良兴等

摘要 [目的]建立快速检测食品中苏丹红（苏丹红I、Ⅱ、Ⅲ、IV）含量的高效液相色谱法，简化样品的前处理，降低成本，缩短仪器检测时间。[方法] 选用Athena C18XDB 色谱柱（4.6 mm × 150.0 mm，3.5 μm），以乙腈水溶液和乙腈丙酮溶液为流动相进行等度洗脱，通过二极管阵列检测器检测食品中苏丹红。[结果] 该方法检测线性良好，相关系数R≥0.999 1，检出限为0.01 mg/L，相对标准偏差（n=10）为0.9%～2.0%，回收率为90%～96%。[结论] 该法具有较高的准确度和精密度，适用于食品中苏丹红含量的测定。

关键词 高效液相色谱；苏丹红；食品

中图分类号 S509.9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）05-01532-02

Abstract [Objective] A analytical method was established to determine Sudan （Sudan I， Ⅱ， Ⅲ， IV） content in food by high performance liquid chromatography （HPLC） with simplified sample pretreatment， reduced cost and shorten instrument detection time. [Method] The Sudan were separated on an Athena C18XDB column （4.6 mm × 150.0 mm， 3.5 μm） by isocratic elution using acetonitrile water solution and acetonitrile acetone solution as mobile phase， and analyzed with a diodearray detector. [Result] The method showed a good linear relationship with correlation coefficient of more than 0.999 1. The limit of detection （LOD） was 0.01 mg/L， the relative standard deviation （n=10） was between 0.9%-2.0%， and the recovery rate was between 90%-96%. [Conclusion] The method has a high accuracy and precision， which is suitable for analyzing the Sudan content in food.

Key words High performance liquid chromatography （HPLC）； Sudan； Food

苏丹红是偶氮苯类人工色素，属于工业染料，主要用于油、蜡、鞋等的增光着色。苏丹红及其代谢产物具有致癌性，世界卫生组织早就明文规定禁止苏丹红作为食品添加剂，我国在食品添加剂使用标准[1]中也禁止使用苏丹红。但由于苏丹红价格低廉、颜色鲜艳、不易褪色[2]，一些不法商贩将其添加到食品中，极大地危害消费者的健康。

国内外报道的苏丹红检测方法主要有气相色谱-质谱联用法[3]、高效液相色谱法[4-6]、液相色谱-质谱法[7-8]、薄层层析法[9]等，有些由于仪器和试剂昂贵难以普及。目前我国检测苏丹红（苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、IV）的国标方法为GB/T19681-2005[10]，该方法为高效液相色谱法，需用氧化铝过柱，并经过多次浓缩提取，重复性和回收率都不太理想，同时该方法采用梯度洗脱，检测耗时长。笔者在该方法的基础上进行优化，以期建立一套快速准确的食品中苏丹红的分析方法，便于在实际工作中应用。

1 材料与方法

1.1 材料

主要仪器：Agilent 1200 高效液相色谱仪配有四元泵、DAD 紫外检测器和自动进样器，安捷伦科技有限公司；KQ5200 超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司；ML204/02 分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；

CT14RD 台式低速冷冻离心机，上海天美科学仪器有限公司；MilliQ 超纯水处理器，美国Millipore 公司。主要试剂：标准品为苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ，纯度≥87%；甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙醚，HPLC 级。

1.2 色谱条件

色谱柱：Athena C18XDB 分析柱（4.6 mm × 150.0 mm，3.5 μm）；流动相：溶剂A为 0.1%甲酸的水溶液∶乙腈=85∶15，B为 0.1%甲酸的乙腈溶液∶丙酮=80∶20；流速1 ml/min；进样量10 μl；DAD紫外检测器；检测波长478 nm。

1.3 标准溶液配制

分别称取苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10.0 mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250 ml，配制成标准储备液。吸取标准储备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 ml，用正己烷定容至25 ml，配制成0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56 mg/L標准溶液，经0.45 μm的水系滤膜过滤后，按“1.2”的色谱条件进样分析。

1.4 样品前处理

将样品剪碎，称取10～20 g（准确至0.01 g）样品于离心管中，加入10～30 ml 5%丙酮的正己烷液，3 000 r/min离心10 min，过滤，再用10 ml 5%丙酮的正己烷液洗涤数次，合并滤液，于旋转蒸发仪上蒸至5 ml以下，用正己烷转移并定容至5 ml，经0.45 μm有机滤膜过滤后待测。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 波长的选择。

该试验采用二极管阵列检测器，可在紫外-可见波长范围内对被分离组分扫描获得其吸收光谱。该试验分别对苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、IV在波长200～700 nm 进行光谱扫描和参考其他文献，发现在波长478 nm处均有较高的灵敏度，故选定478 nm为检测波长。

2.1.2 流动相的优化。

2.3 回收率试验

选取具有代表性的3种样品，含水量较大的酱腌菜、固体样品方便面和粉末样品辣椒粉，且该3种样品均未检测出苏丹红。分别称取样品10 g，各加入0.02 mg苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、IV，平行测定3次，得出回收率在90%～ 96%，标准偏差RSD在0.9%～3.8%，加标量越大，RSD值越小（表2）。

3 结论

该研究采用高效液相色谱法快速测定食品中苏丹红（苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、IV）含量，样品前处理采用离心提取，再浓缩定容，流动相比例为溶液A（0.1%甲酸的水溶液∶乙腈=85∶15）∶溶液B（0.1%甲酸的乙腈溶液∶丙酮=80∶20）=10∶90，柱温30 ℃，检测波长为478 nm。该方法操作简单快速，回收率、精密度均满足要求，适用于食品中苏丹红的定性、定量分析。

参考文献

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[2] 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所.GB2760-2007.食品添加剂使用卫生标准[S].北京：中国标准出版社，2007.

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[4] 徐小艳，邓世俊，孙远明.分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定食品中苏丹红Ⅰ～Ⅳ的测定[J].理化检验-化学分册，2013，49（2）：153-156.

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[10] 国家粮食质量监督检验中心，大连市产品质量监督检验所.GB/T 19681-2005.食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法[S].北京：中国标准出版社，2005：1-4.