虫草菌粉对雏鸡细胞免疫功能的影响

胡雅婷　潘美慧　李进进　陈如圣　陶明江　张祥华　邬向东

摘 要：虫草菌粉是由新鲜冬虫夏草中分离蝙蝠蛾拟青霉经液体深层发酵所得，具有很好的免疫增强作用。为探讨虫草菌粉对鸡免疫力的影响，在虫草菌粉添加于鸡饲料中连续饲喂30 d，通过检测活性E玫瑰花环试验和淋巴细胞转化试验了解虫草菌粉对雏鸡细胞免疫的影响。结果发现通过饲喂不同剂量的虫草菌粉后，E玫瑰花环率无显著差异，但淋巴细胞转化率有显著的提高，说明虫草菌粉能够显著提高细胞的免疫水平，增强雏鸡免疫力。

关键词：雏鸡；虫草菌粉；细胞免疫

中图分类号：S816 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2014）06-0052-02

虫草菌粉为蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌粉，或者又称为发酵虫草菌粉，俗称虫草粉，虫草菌粉，虫草提取物，发酵虫草粉等。蝙蝠蛾拟青霉菌粉是从新鲜冬虫夏草菌中分离所得的虫草菌——蝙蝠蛾拟青霉经液体深层发酵培养、过滤、干燥、粉碎制成的产品。蝙蝠蛾拟青霉菌种是江西国药有限责任公司与中国医学科学院药物研究所卫生部天然药物生物合成重点实验室经过10年时间从青海产天然冬虫夏草中分离纯化而得，该菌种生产的发酵虫草菌粉自1989年获得卫生部批准为一类原料药新药（文号：[89]卫药准字Z-17号），在十多年的临床应用当中，其良好的临床效果以及可靠的安全性，深获国内外医药专家学者的认可。并于2001年3月23日被国家卫生部发文（卫法监发[2001]84号文），确认为可用于保健食品的真菌名单。

虫草菌粉具有养肺阴，补肾阳的功效，為平补阴阳之品，用于肺痨咳血，阳痿遗精等症。从现代免疫角度来说，其具有明显的提高机体免疫力的功能[1-4]。为了解虫草菌粉对家禽免疫功能的影响，笔者将虫草菌粉应用于雏鸡饲养，通过检测活性E玫瑰花环形成率、淋巴细胞转化率来反映雏鸡细胞免疫功能变化，为虫草菌粉应用于畜禽养殖的可能提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 全价雏鸡鸡饲料

购自南昌正大集团。

1.1.2 雏鸡

购自江西省农业科学院畜牧兽医研究所，10日龄余干乌鸡。

1.1.3 虫草菌粉

由江西国药集团提供。

1.1.4 主要试剂

鸡外周血淋巴细胞分离液、改良型RPMI-1640培养液为赛默飞世尔生物化学制品有限公司产品；Hanks液、植物血凝素（PHA）、胎牛血清等为索莱宝公司产品。

1.2 方法

1.2.1 试验分组

将240羽10日龄健康雏鸡随机分为四组，每组60羽，从第11日龄开始试验，四个组均使用南昌正大全价雏鸡饲料为基础日粮（具体见表1）。

1.2.2 饲喂方法及处理

饲喂至第10、20和30天每组随机抽取20羽，分别采血用肝素抗凝，一部分全血供活性E花环试验、淋巴细胞转化试验用，另一部提取血清，供细胞因子检测用。

1.2.3 试验方法

1.2.3.1 E玫瑰花环试验，参照文献方法[5]进行，略有修改。

淋巴细胞的分离：新鲜抗凝血用Hanks液倍比稀释，用淋巴细胞分离液以2 500 r/min离心 10 min/次的密度梯度离心法分离淋巴细胞，计数后，用Hanks液配成107个/mL淋巴细胞悬液备用。

1 %SRBC悬液的制备：无菌采取绵羊抗凝血，2 500 r/min离心10 min/次，弃上清和白细胞，加Hanks液稀释后再离心，重复上述操作直到除净白细胞。用Hanks液配成1 %SRBC悬液备用，细胞浓度约为8×107个/mL。

活性E玫瑰花环试验：取上述淋巴细胞悬液 100 μL，1 %SRBC 100 μL，胎牛血清50 μL混匀，37 ℃水浴5 min，以500 r/min离心5 min，弃50 μL上清，再加入0.8 %戍二醛1滴，轻轻摇匀，固定数分钟。取一滴于事先铺有Hanks液的玻片上，自然干燥，吉姆萨瑞氏染色5 min，油镜观察200个淋巴细胞中阳性花环数，计算花环形成率。

1.2.3.2 淋巴细胞转化试验 采用形态学检查法。

取2.2 mL RPMI-1640培养液于细胞培养瓶，同时加入100 μg/mL PHA 0.2 mL，胎牛血清0.6 mL，青霉素、链称素各100 u或100 μg/mL；再加新鲜抗凝血0.2～0.5 mL。将上述细胞培养瓶置于CO2培养箱（37 ℃、5 %CO2、饱和湿度）每天旋转摇匀2次。培养3 d后，各取一滴进行美兰染色，油镜观察200个淋巴细胞中转化的细胞数，计算转化率。

1.2.4 结果统计分析

采用SPSS软件进行数据处理，单因素方差分析比较两组间差异。所有数值均以“平均值±标准差”表示。

2 结果

2.1 活性E玫瑰花环试验结果如表2、图1

2.2 淋巴细胞转化试验结果，见表3、图2

3 小结与讨论

3.1 本次试验结果表明

雏鸡饲喂一定剂量虫草菌粉后，各组间活性E花环率差异不显著（P>0.05），仅在饲喂20 d时，中剂量组、高剂量组与空白对照组玫瑰花环率差异显著（P<0.05）。这与小鼠中相关报道不太相同[6]，说明虫草菌粉对不同动物的影响不尽相同。

3.2 本试验证实

雏鸡连续饲喂虫草菌粉10 d时，低剂量组与空白对照组淋巴细胞转化率差异不显著（P>0.05），中剂量组、高剂量组与空白对照组淋巴细胞转化率差异极显著（P<0.01）。当饲喂20 d时，低剂量组、中剂量组、高剂量组与空白对照组淋巴细胞转化率差异皆极显著（P<0.01）。30 d时，低剂量组与空白对照组淋巴细胞转化率差异显著（P<0.05），中剂量组、高剂量组与空白对照组淋巴细胞转化率差异极显著（P<0.01）。说明虫草菌粉能够显著提高淋巴细胞转化率，增强细胞的免疫水平，且中高剂量虫草菌粉比低剂量虫草菌粉作用更强，这与小鼠中的相关报道相同[7]。

3.2 虫草菌粉应用前景广阔

虫草菌粉不仅可以人类保健中应用，在畜禽养殖中亦可发挥重要作用[8-9]。而且虫草菌粉是蝙蝠蛾拟青霉经液体深层发酵培养、过滤、干燥、粉碎制成的产品，可常温保存2年不失效，没有抗生素的耐药问题，也没有饲料添加剂的药物残留等问题。以虫草菌粉的独特优势，如作为免疫增效剂推广应用于畜禽生产，则前景 广阔。□□

参考文献：（9篇，略）