肝细胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1和β-catenin水平及临床意义*

李 蕾，薛如意，沈锡中

·肝癌·

肝细胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1和β-catenin水平及临床意义*

李 蕾，薛如意，沈锡中

目的探讨肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）和慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者血清分泌型卷曲相关蛋白-1（secreted frizzled-related proteins，sFRP-1）和β-catenin水平及临床意义。方法采用ELISA法检测36例HCC、36例CHB和36例正常人血清sFRP-1和β-catenin水平，应用Spearman相关分析，分析血清sFRP-1和β-catenin水平与年龄、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、白蛋白和总胆红素等的相关性。结果HCC和CHB患者血清sFRP-1水平分别为（1136.28±332.43）pg/ml和（1194.53±156.84）pg/ml，均显著低于正常人[（1477.26±563.12）pg/ml，P＜0.05]；HCC患者血清β-catenin水平为（527.2±20.9）pg/ml，显著高于正常人和CHB患者[分别为（369.8±21.5）pg/ml和（374.0±8.3）pg/ml，P＜0.05]；HCC和CHB患者血清sFRP-1和β-catenin水平与年龄、ALT、白蛋白、总胆红素无显著相关性。结论肝细胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1降低，而肝细胞癌患者血清β-catenin水平升高。

肝细胞癌；慢性乙型肝炎；分泌型卷曲相关蛋白-1；β-catenin

Wnt/β-catenin信号通路是细胞发育和生长调节的一个关键途径，β-catenin是该通路的效应分子，该通路异常激活可以导致肿瘤和纤维增生等疾病的发生[1]。已有研究证实，经典与非经典的Wnt信号途径均参与肝纤维化的形成[2，3]，而在20%～90%HCC患者显示经典的Wnt/β-Catenin信号通路被持续激活[4]。Wnt信号通路抑制因子分泌型卷曲相关蛋白-1（secreted frizzled-related protein 1，sFRP-1）作为Wnt信号通路的一个负调节蛋白，在肿瘤形成及调控细胞调亡等方面亦发挥重要作用[5]。目前sFRP-1/β-catenin通路在慢性乙型肝炎及肝细胞癌发病中的作用机制仍不清楚。本研究检测了CHB和HCC患者血清sFRP-1和β-catenin水平，并分析其与CHB和HCC常见实验室指标的关系，以探讨其判断肝脏疾病进展的临床价值。

1 资料与方法

1.1 病例选择自2007年1月～2010年12月在我院门诊及住院的HCC患者36例，均为男性，年龄30～60岁，平均年龄（43±14）岁，经临床、影像学检查及术后病理学检查证实。CHB患者36例[（均为男性，年龄30～60岁，平均年龄（40±15）岁]。CHB诊断符合慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）[6]标准。以HBsAg阴性、肝肾功能正常的36例男性健康体检者为对照组[年龄30～60岁，平均年龄（36±12）岁]。被研究者签署知情同意书，本研究经中山医院伦理委员会备案。

1.2 血清sFRP-1和β-catenin水平检测采用ELISA法（上海武昊经贸有限公司提供试剂，美国USCNK公司生产）。以Bio-rad比色仪在450nm处测吸光度值，参照标准曲线计算其浓度值。

2 结果

2.1 肝功能情况3组人群主要肝功能指标见表1。

表1 3组人群主要肝功能指标（±s）比较

表1 3组人群主要肝功能指标（±s）比较

与另两组比，①P＜0.01

2.2 肝病患者血清sFRP-1及β-catenin的水平根据标准曲线，通过对OD值的换算得出各组别sFRP-1、β-catenin的表达水平。HCC组和CHB组的血清sFRP-1显著低于正常组（P＜0.05），而CHB组和HCC组血清sFRP-1水平无显著差异；HCC组中β-catenin水平显著高于正常组及CHB组（表2）。

表2 3组人群血清sFRP-1和β-catenin水平（pg/mL，±s）比较

表2 3组人群血清sFRP-1和β-catenin水平（pg/mL，±s）比较

与正常人比，①P＜0.05；与CHB比，②P＜0.05

2.3 血清sFRP-1和β-catenin水平与其他指标的相关性分析在CHB和HCC患者，未发现血清sFRP-1或β-catenin水平与年龄、ALT、白蛋白、总胆红素具有相关性（资料未列出）。

3 讨论

近年来，研究发现Wnt信号通路在细胞转运、细胞凋亡及生物发育等生命过程中发挥重要作用[7，8]，其异常活化与多种人类疾病及肿瘤[9，10]的发生密切相关，已经成为肿瘤发病机制研究的热点。同时，在肝纤维化等慢性肝病及肝癌发病中也发现Wnt信号异常持续激活，提示该途径在肝脏病理生理过程中有着重要的作用[11]。

越来越多的研究表明，分泌型Wnt受体拮抗剂sFRPs家族成员在Wnt信号传导中发挥重要作用，其可以在细胞外阻断异常的Wnt信号通路，从而抑制肿瘤细胞的增殖和诱导肿瘤细胞凋亡[12]。sFRPS通过竞争性结合Wnt配体，阻止Wnt信号传导入细胞，是Wnt信号通路的负调控因子，在肝脏肿瘤的发生发展中也起到了重要的作用。Shih YL等[13]发现在原发性肝癌组织SFRP-1表达广泛下调，其启动子在肝癌组织中甲基化程度明显高于肝硬化、肝炎及正常肝组织，认为sFRP-1可能通过经典wnt信号途径抑制肝肿瘤细胞的生长。

β-catenin是连环蛋白家族中的一员，具有介导细胞黏附及信号转导的双重功能。β-catenin是Wnt通路的效应分子，其可通过核膜进入到细胞核内，与转录因子Tcf/Lef结合，激活Wnt途径靶基因，如c-myc和cyclin D1，调节细胞的增殖，参与肿瘤的形成[14]。Sangkhathat等[15]通过在肝癌细胞内转染siRNAs引起细胞内β-catenin表达下降，从而达到抑制肝癌细胞增殖的作用。

肝纤维化是指肝脏内弥漫性的、过量的细胞外基质沉积，是许多慢性肝病的共同病理学过程。肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）激活是肝纤维化发生的中心环节。近年来一些研究开始关注经典的Wnt信号通路在HSC激活过程中的作用。Myung等[2]研究发现sFRP可抑制HSC激活并抑制Collagen α1和α-SMA生成。葛文松等[16]研究发现，阻断Wnt/β-Catenin信号通路可抑制HSC增殖，促进其凋亡，减少胶原分泌。

本研究采用ELISA法检测了HCC和CHB患者血清sFRP-1和β-Catenin水平的变化，发现HCC患者血清sFRP-1显著低于正常人，与既往研究相符，提示sFRP-1在肝肿瘤发生中发挥抑癌作用，并可能在肝肿瘤组织中发生表观遗传学改变而表达降低或缺失，其具体分子机制有待进一步研究。CHB患者血清sFRP-1亦显著低于正常人，其是否参与了HSC激活及凋亡等机制尚待进一步研究。本研究亦发现HCC组织存在β-catenin高表达，提示β-catenin的异常积聚可能在肝癌发生中起重要作用。随着Wnt信号通路拮抗剂sFRP1在肝癌组织中表达的逐渐减弱，β-catenin的异常表达增高，表明sFRP1的低表达可能是导致β-catenin异常高表达的因素之一。

Wnt传导通路与肝癌的发生、发展密切相关。信号抑制蛋白sFRP1的表达减弱可能是导致β-catenin在细胞质和细胞核内积聚以及Wnt信号活化的原因之一，其潜在的临床价值值得深入研究。关于对经典Wnt信号通路在肝脏病发病中的作用研究，尚有许多基础机制需要阐明，有许多问题仍需要探讨。

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[2]Myung SJ，Yoon JH，Gwak GY，et al.Wnt signaling enhances the activation and survival of human hepatic stellate cells. FEBS Lett，2007，581：2954-2958.

[3]Jiang F，Parsons CJ，Stefanovic B.Gene expression profile of quiescent and activated rat hepatic stellate cells implicates Wntsignalingpathwayinactivation.JHepatol，2006，45：401-409.

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[5]Taylor MD，Rutka JT.The SFRP family of WNT inhibitors function as noveltumorsuppressorgenes epigeneticallysilenced in medulloblastoma.Oncogene，2010，29：3017-3024.

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[12]Kongkham PN，Northcott PA，Croul SE，et al.The SFRP family of WNT inhibitors function as novel tumor suppressor genes epigenetically silenced in medulloblastoma.Oncogene，2010，29：3017-3024.

[13]Shih YL，Hsieh CB，Lai HC，et al.SFRP1 suppressed hepatoma cells growth through Wnt canonical signaling pathway.Int J Cancer，2007，121（5）：1028-1035.

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[15]Sangkhathat S，Kusafuka T，Miao JY，et al.In vitro RNA interference against β-catenin inhibits the proliferation of pediatric hepatic tumors.Int J Oncol，2006，28（3）：715-722.

[16]葛文松，吴建新，范建高，等.siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞增殖和凋亡的影响.实用肝脏病杂志，2011，14（2）：91-94.

（收稿：2013-09-10）

（校对：陈从新）

Serum levels and clinical significance of sFRP-1 and β-catenin in patients with hepatocellular carcinoma and chronic hepatitis B

Li Lei，Xue Ruyi，Shen Xizhong.
Department of Gastroenterology，Zhongshan Hospital，Fudan University，Shanghai 200032，China

ObjectiveTo evaluate serum levels and clinical significance of secreted frizzled-related proteins（sFRP）-1 and β-catenin in patients with hepatocellular carcinoma（HCC）and chronic hepatitis B（CHB）.Methods Serum levels of sFRP-1 and β-catenin in 36 patients with HCC，36 patients with CHB and 36 healthy persons were detected by ELISA；Spearman correlation analysis was used to estimate the relevance between sFRP-1，β-catenin and age，ALT，albumin，total bilirubin.ResultsThe serum levels of sFRP-1 in patients with HCC and CHB were（1136.28±332.43）pg/ml and（1194.53±156.84）pg/ml，respectively，both significantly higher than that in healthy persons[（1477.26±563.12）pg/ml，P＜0.05]；The serum level of β-catenin in patients with HCC was（527.2± 20.9）pg/ml，significantly higher than those in patients with CHB（374.0±8.3）pg/ml and normal persons（369.8± 21.5）pg/ml，P＜0.05）；No correlation was found between serum sFRP-1 or β-catenin levels with age，ALT，albumin，total bilirubin either in CHB or in HCC group.ConclusionThe serum sFRP-1 levels in patients with HCC and CHB decrease，while the serum β-catenin levels in patients with HCC increase.

Hepatocellular carcinoma；Hepatitis B；Secreted frizzled-related proteins-1；β-catenin

10.3969/j.issn.1672-5069.2014.01.019

国家临床重点专科建设项目经费资助

200032上海市复旦大学附属中山医院消化科

李蕾，女，42岁，医学博士，主治医师。主要从事肝纤维化及消化系统肿瘤的防治研究。E-mail：li.lei@zs-hospital.sh.cn

沈锡中，E-mail：shen.xizhong@zs-hospital.sh.cn